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浙江红花油茶×广宁红花油茶杂交子代的表型性状及其SSR分子鉴定

  • 周文才1

    机 构：

    1. 江西省林业科学院 油茶资源培育与利用江西省重点实验室，南昌 330013

    ×
  • ，田仟仟1,2

    机 构：

    1. 江西省林业科学院 油茶资源培育与利用江西省重点实验室，南昌 330013

    2. 江西农业大学，南昌 330045

    ×
  • ，李田1

    机 构：

    1. 江西省林业科学院 油茶资源培育与利用江西省重点实验室，南昌 330013

    ×
  • ，黄彬1

    机 构：

    1. 江西省林业科学院 油茶资源培育与利用江西省重点实验室，南昌 330013

    ×
  • ，温强1

    机 构：

    1. 江西省林业科学院 油茶资源培育与利用江西省重点实验室，南昌 330013

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1. 江西省林业科学院 油茶资源培育与利用江西省重点实验室，南昌 330013；
2. 江西农业大学，南昌 330045；

Phenotypic traits and SSR molecular identification of hybrid progenies of Camellia chekiangoleosa × C. semiserrata

  • ZHOU Wencai1

    Affiliation：

    1. Key Laboratory of Cultivation and Utilization of Oil Tea Resources of Jiangxi Province, Jiangxi Academy of Forestry, Nanchang 330013 , China

    ×
  • ，TIAN Qianqian1,2

    Affiliation：

    1. Key Laboratory of Cultivation and Utilization of Oil Tea Resources of Jiangxi Province, Jiangxi Academy of Forestry, Nanchang 330013 , China

    2. Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045 , China

    ×
  • ，LI Tian1

    Affiliation：

    1. Key Laboratory of Cultivation and Utilization of Oil Tea Resources of Jiangxi Province, Jiangxi Academy of Forestry, Nanchang 330013 , China

    ×
  • ，HUANG Bin1

    Affiliation：

    1. Key Laboratory of Cultivation and Utilization of Oil Tea Resources of Jiangxi Province, Jiangxi Academy of Forestry, Nanchang 330013 , China

    ×
  • ，WEN Qiang1

    Affiliation：

    1. Key Laboratory of Cultivation and Utilization of Oil Tea Resources of Jiangxi Province, Jiangxi Academy of Forestry, Nanchang 330013 , China

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1. Key Laboratory of Cultivation and Utilization of Oil Tea Resources of Jiangxi Province, Jiangxi Academy of Forestry, Nanchang 330013 , China；
2. Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045 , China；

作者简介:

周文才(1978—)，博士，研究员，主要从事经济林遗传育种研究，(E-mail)zhouwencai2000@2000.com。

通讯作者:

温强，博士，研究员，研究方向为经济林遗传育种，(E-mail)jxwenqiang@aliyun.com。

中图分类号:Q943

文献标识码:A

文章编号:1000-3142(2024)07-1269-09

DOI:10.11931/guihaia.gxzw202305015

参考文献
DONG L, LI T, HUANG WY, et al. , 2021. Selection and comprehensive evaluation of superior individual plant in Camellia chekiangoleosa [J]. J Cent S Univ For Technol, 41(11): 35-45. [董乐, 李田, 黄文印, 等, 2021. 浙江红花油茶优株筛选与综合评价 [J]. 中南林业科技大学学报, 41(11): 35-45. ]
查找原文
参考文献
DRIDI J, FENDRI M, BRETON CM, et al. , 2018. Characterization of olive progenies derived from a Tunisian breeding program by morphological traits and SSR markers [J]. Sci Hort-Amsterdam, 236: 127-136.
查找原文
参考文献
GAO JY, LIU XK, ZHAO QM, 2016. Illustrations of the new camellia hybrids that bloom year-round [M]. Hangzhou: Zhejiang Science and Technology Press: 1-581. [高继银, 刘信凯, 赵强民, 2016. 四季茶花杂交新品种彩色图集 [M]. 杭州: 浙江科学技术出版社: 1-581. ]
查找原文
参考文献
GU ZJ, SUN XF, 1997, A karyomorphological study of seventeen species of Chinese Camellia [J]. Acta Bot Yunnan, 19(2): 159-170. [顾志建, 孙先凤, 1997. 山茶属17个种的核形态学研究 [J]. 云南植物研究, 19(2): 159-170. ]
查找原文
参考文献
HAN GH, XIANG SQ, WANG WX, et al. , 2010. Identification and genetic diversity of hybrid progenies from Shatian pummelo by SSR [J]. Sci Agric Sin, 43(22): 4678-4686. [韩国辉, 向素琼, 汪卫星, 等, 2010. 沙田柚杂交后代群体的SSR鉴定与遗传多样性分析 [J]. 中国农业科学, 43(22): 4678-4686. ]
查找原文
参考文献
HE YC, WU MJ, DONG L, et al. , 2020. Analysis of kernel oil content and variation of fatty acid composition of Camellia chekiangoleosa in the main producing areas [J]. Non-Wood For Res, 38(3): 37-45. [贺义昌, 吴妹杰, 董乐, 等, 2020. 主产区浙江红花油茶籽仁含油率及脂肪酸组成变异分析 [J]. 经济林研究, 38(3): 37-45. ]
查找原文
参考文献
HU WS, HUANG AP, JIANG F, et al. , 2015. Identification and genetic diversity of reciprocal hybrids in Longan (Dimocarpus longan) by SSR [J]. Acta Hortic Sin, 42 (10): 1899-1908. [胡文舜, 黄爱萍, 姜帆, 等, 2015. 龙眼正反交后代的SSR鉴定及遗传多样性分析 [J]. 园艺学报, 42(10): 1899-1908. ]
查找原文
参考文献
KHAJUDPARN P, PRAJONGJAI T, POOLSAWAT O, et al. , 2012. Application of ISSR markers for verification of F1 hybrids in mungbean（Vigna radiata） [J]. Genet Mol Res, 11 (3): 3329-3338.
查找原文
参考文献
KHAN H, SIVALINGAM PN, CHAUHAN S, et al. , 2013. Improved crossing technique and identification of true F1 hybrids of Ziziphus mauritiana Lam. by molecular markers [J]. Sci Hort-Amsterdam, 150: 164-171.
查找原文
参考文献
LI L, 2016. Garden plant genetics and breeding, Chongqing: Chongqing University Press: 157-173. [李凌, 2016. 园林植物遗传育种 [M]. 重庆: 重庆大学出版社: 157-173. ]
查找原文
参考文献
LI WX , HE JJ, ZHANG HL, et al. , 2021. Identification of F1 hybrids of Hevea brasiliensis by SSR Markers [J]. Chin J Trop Crops, 42(5): 1305-1309. [李文秀, 贺军军, 张华林, 等, 2021. SSR分子标记鉴定橡胶树F1真伪杂种 [J]. 热带作物学报, 42(5): 1305-1309. ]
查找原文
参考文献
LEI Y, DUAN JH, HUANG FY, et al. , 2021. Identification and genetic diversity of tea F1 hybrids based on SSR markers [J]. J Plant Genetic Resour, 22(3): 748-757. [雷雨, 段继华, 黄飞毅, 等, 2021. 茶树杂交F1真假杂种的SSR鉴定及遗传多样性分析 [J]. 植物遗传资源学报, 22(3): 748-757. ]
查找原文
参考文献
LIU YX, LI PT, CHI TH, et al. , 2019. Identification and genetic diversity analysis of interspecific F1 hybrids between Chrysanthemum nankingense × C. lavandulifolium [J]. Acta Hortic Sin, 46(8): 1553-1564. [刘颖鑫, 李沛曈, 迟天华, 等, 2019. 菊花脑×甘菊种间F1杂种的鉴定和遗传多样性分析 [J]. 园艺学报, 46(8): 1553-1564. ]
查找原文
参考文献
LUO XL, ZHU WX, 2010. Processing technology of oil-tea camellia seed oil and comprehensive utilization of Camellia oleifera resources [J]. Chin Oils And Fats, 35(9): 13-17. [罗晓岚, 朱文鑫, 2010. 油茶籽油加工和油茶资源综合利用 [J]. 中国油脂, 35(9): 13-17. ]
查找原文
参考文献
QIN SY, RONG J, ZHANG WJ, et al. , 2018. Cultivation history of Camellia oleifera and genetic resources in the Yangtze River Basin [J]. Biodivers Sci, 26(4): 384-395. [秦声远, 戎俊, 张文驹, 等, 2018. 油茶栽培历史与长江流域油茶遗传资源 [J]. 生物多样性, 26(4): 384-395. ]
查找原文
参考文献
SUN PG, CHEN XY, XI RC, et al. , 2012. Research progress on the evaluation of Camellia oleifera germplasm resources [J]. Chin For Sci Technol, 26(3): 1-6. [孙佩光, 陈晓阳, 奚如春, 等, 2012. 油茶种质资源评价研究进展 [J]. 林业科技开发, 26(3): 1-6. ]
查找原文
参考文献
TIAN QQ, HUANG JJ, WEN Q, et al. , 2021. The current situation and trend of molecular breeding in oil-tea camellia [J]. S Chin For Sci, 49(5): 53-59. [田仟仟, 黄建建, 温强, 等, 2021. 油茶分子育种现状与趋势 [J]. 南方林业科学, 49(5): 53-59. ]
查找原文
参考文献
TIAN XX, FANG XZ, SUN HZ, et al. , 2018. Analysis of triacylglycerols in different oil-tea camellia cones [J]. For Res, 31(2): 41-47. [田潇潇, 方学智, 孙汉洲, 等, 2018. 不同油茶物种及品种果实中甘油三酯成分分析 [J]. 林业科学研究, 31(2): 41-47. ]
查找原文
参考文献
WANG XN, CHEN YZ, WANG R, et al. , 2020. The breeding of two new Camellia varieties [J]. J Centr S Univ For Technol, 40(8): 1-6. [王湘南, 陈永忠, 王瑞, 等, 2020. 2个山茶新品种的选育 [J]. 中南林业科技大学学报, 40(8): 1-6. ]
查找原文
参考文献
WEN Q, YE JS, LEI XL, et al. , 2006. Study on the inter-simple sequence repeat condition of Camellia oleifera [J]. J Centr S For Univ, 26(6): 22-26. [温强, 叶金山, 雷小林, 等, 2006. 油茶ISSR反应体系建立及优化 [J]. 中南林业科技大学学报, 26(6): 22-26. ]
查找原文
参考文献
WEN Q, ZHU H, YE JS, et al. , 2015. Authentication of Camellia chekiangoleosa and its close species using RPB2 gene sequences [J]. Mol Plant Breed, 13(11): 2559-2565. [温强, 朱恒, 叶金山, 等, 2015. 利用RPB2基因序列甄别浙江红山茶及其近缘种 [J]. 分子植物育种, 13(11): 2559-2565. ]
查找原文
参考文献
WU XH, SHEN B, HUANG YF, et al. , 2016. Analysis and evaluation of nutrient ingredients in Camellia chekiangoleosa [J]. Non-Wood For Res, 34(3): 130-134. [吴雪辉, 沈冰, 黄永芳, 等, 2016. 红花油茶营养成分分析及评价 [J]. 经济林研究, 34(3): 130-134. ]
查找原文
参考文献
XU J, HUANG LD, XU Y, et al. , 2009. Identifying hybrids of golden camellia using SSR molecular markers [J]. J Fudan Univ (Nat Sci), 48(5): 668-673. [徐晶, 黄连冬, 徐颖, 等, 2009. 用SSR分子标记鉴定金花茶杂交种 （英文） [J]. 复旦学报(自然科学版), 48(5): 668-673. ]
查找原文
参考文献
YANG D, HU X, LIU Z, et al. , 2010. Intergeneric hybridizations between Opisthopappus taihangensis and Chrysanthemum lavandulifolium [J]. Sci Hort-Amsterdam, 125(4): 718-723.
查找原文
参考文献
YANG ZL, LI JY, FAN ZQ, 2004. A preliminary study on the cross-compatibility among Sect. Camellia species and C. japonica cultivars in the genus Camellia [J]. Non-Wood For Res, 17(5): 680-684. [杨志玲, 李纪元, 范正琪, 2004. 山茶属红山茶组物种间及其与品种杂交亲和性研究初报 [J]. 林业科学研究, 17(5): 680-684. ]
查找原文
参考文献
YE S, WANG Y, HUANG D, et al. , 2013. Genetic purity testing of F1 hybrid seed with molecular markers in cabbage (Brassica oleracea var. capitata) [J]. Sci Hort-Amsterdam, 155 (2): 92-96.
查找原文
参考文献
YIN BY, ZHANG Y, SUN FL, et al. , 2019. Identification and genetic diversity of apple F1 hybrids based on SSR markers [J]. J Hebei Agric Univ, 42(5): 46-51. [尹宝颖, 张媛, 孙福来, 等, 2019. 苹果F1群体的SSR鉴定与遗传多样性分析 [J]. 河北农业大学学报, 42(5): 46-51. ]
查找原文
参考文献
YUSUKE S, 1988. Studies on the flower colours in the genus Camellia, with special reference to the phylogenies of the genus [J]. Bull Fac Agric Kagosh Univ, 38: 9-62.
查找原文
参考文献
ZHOU NN, LI SB, LI YB, 2017. Hybrids identification and genetic analysis in diploid roses population (F1) using SSR markers [J]. Acta Hortic Sin, 44(1): 151-160. [周宁宁, 李淑斌, 李远波, 等, 2017. 二倍体月季F1群体的SSR鉴定与遗传分析 [J]. 园艺学报, 44(1): 151-160. ]
查找原文
参考文献
ZHOU S, ZHU JH, XIAO JZ, et al. , 2001. Distant crossing trial with oil tea camellia [J]. Non-Wood For Res, 19(1): 20-25. [周盛, 朱金惠, 肖景治, 等, 2001. 油茶远缘杂交育种试验 [J]. 经济林研究, 19(1): 20-25. ]
查找原文
参考文献
ZHOU WC, HOU J, GUO W, et al. , 2015. Identification of the true hybrids for Populus deltoides by using SSR markers [J]. J Nanjing For Univ (Nat Sci Ed), 39(3): 45-49. [周文才, 侯静, 郭炜, 等, 2015. 基于SSR标记的美洲黑杨杂交子代的鉴定 [J]. 南京林业大学学报(自然科学版), 39(3): 45-49. ]
查找原文
参考文献
ZHOU WC, XIAO XY, SHEN JL, et al. , 2019. Review on germplasm resources and breeding strategy for Camellia chekiangoleosa [J]. S Chin For Sci, 47(6): 20-24. [周文才, 肖相元, 沈敬理, 等, 2019. 浙江红花油茶种质资源述评及育种策略 [J]. 南方林业科学, 47(6): 20-24. ]
查找原文
目录contents

    摘要

    浙江红花油茶(Camellia chekiangoleosa)种仁含油率和油酸含量高，广宁红花油茶 (C. semiserrata) 具有较强的生长势和抗性。为了利用浙江红花油茶和广宁红花油茶的优点，培育优良种质材料，该研究对浙江红花油茶与广宁红花油茶的45个F1杂交子代进行表型性状分析，以掌握杂交子代的表型性状情况，同时利用SSR标记对其进行杂种真伪鉴定，并筛选可用于油茶杂交子代鉴定的SSR标记。结果表明：（1）浙江红花油茶 × 广宁红花油茶的F1子代表现为树形高大、生长迅速且其叶脉、萼片、柱头均倾向于父本广宁红花油茶的性状，而花和叶片形态等性状与母本浙江红花油茶接近，叶片颜色与大小等特征介于双亲特征之间。（2）从32个SSR标记中筛选出了8个可区分双亲且能明确杂交子代来源的完全互补型标记，用于开展杂交子代鉴定，其中7个标记杂种鉴定效率高达100%，1个标记杂种鉴定效率为55.56%；8个标记相互补充鉴定出45个杂交子代全是真杂种。（3）8个SSR标记对杂交子代进行的鉴定能力验证表明，利用这些SSR标记鉴定油茶杂交子代是可行的。该研究结果为油茶物种间的杂交育种提供了参考，同时也为后续油茶物种间的杂交子代SSR标记鉴定提供了依据。

    Abstract

    Camellia chekiangoleosa has high oil concentration and oleic acid content, while C. semiserrata has strong growth vigor and resistance. In order to make the utmost of the advantages of C. chekiangoleosa and C. semiserrata and cultivate excellent germplasm materials, the phenotypic traits of 45 F1 hybrid progenies of C. chekiangoleosa and C. semiserrata were analyzed to grasp the phenotypic traits of the hybrid progenies. In addition, SSR markers were used to identify hybrids, and SSR markers that could be used to identify the hybrid progenies of oil tea were screened. The results were as follows：(1) The F1 hybrids of C. chekiangoleosa × C. semiserrata showed tall tree and rapid growth, and their leaf veins, sepals and stigmas were all tended to the traits of the male parent C. semiserrata, while flower and leaf morphologies and other traits were similar to the female parent C. chekiangoleosa, and the characteristics of leaf color and size were between those of the parents. (2) From the 32 SSR markers, eight fully complementary markers that could distinguish parents and determine the origin of offspring were screened out for identification of hybrid progenies, among which the hybrid identification rates of seven markers were as high as 100%, and the hybrid identification rate of one marker was 55.56%. And 45 hybrid progenies were all true hybrids identified by the complementarity of eight markers. (3) The eight SSR markers were used to verify the ability to identify the hybrid progenies, indicating that it is feasible to use these SSR markers to identify the authenticity of the hybrid progenies of oil tea. This study results provide a reference for interspecies cross breeding of oil tea, and also provide a reference for the SSR marker identification of hybrids of oil tea.

  • 油茶泛指山茶科山茶属植物中具有较高油用价值的木本油料作物，其茶油中含有大量对人体有益的油酸、亚油酸以及生育酚、角鲨烯等活性物质，是一种优质的功能性食用油（罗晓岚和朱文鑫，2010；秦声远等，2018；田仟仟等，2021）。浙江红花油茶（Camellia chekiangoleosa）和广宁红花油茶（C. semiserrata）是油茶中的主栽品种（孙佩光等，2012）。浙江红花油茶又名浙江红山茶，喜夏凉、冬寒、不耐热，主要分布于江西、浙江、湖南、湖北、皖南等山区海拔600~1 400 m的山地。广宁红花油茶，即南山茶，喜温暖湿润，耐半阴，具有较强的生长势，主要分布于广东和广西。与其他油茶物种相比，无论是种仁脂肪酸含量，还是种仁营养成分价值，红花油茶都有着较大的优势，尤其是浙江红花油茶，其油酸含量平均在80%以上，种仁含油率在60%以上，显著高于普通油茶（含量40%左右）（吴雪辉等，2016；周文才等，2019；贺义昌等，2020），而种仁含油率和油酸含量是产量和品质的重要指标。此外，其相对含量高低不受果实采收时期的影响，具有高产稳产的特性，为高种仁含油率、高品质的油茶优良材料（田潇潇等，2018；周文才等，2019）。

  • 杂交育种试验成本低、后代性状分离广且杂交子代兼具双亲优良性状，是培育油茶新品种的重要途径（李凌，2016）。因此，利用油用性状优良的浙江红花油茶与生长势和抗性强的广宁红花油茶进行杂交，有望培育性状更加优良的高产杂交子代。周盛等（2001）研究表明油茶物种间的杂交子代性状多表现为双亲性状中间型，但有倾向于某一亲本的趋势。杨志玲等（2004）以浙江红花油茶为母本与其他红山茶组物种进行杂交发现，浙江红花油茶与广宁红花油茶的杂交组合获得的杂交结实率最高。目前，浙江红花油茶与广宁红花油茶的杂交子代性状情况相关研究未见报道。

  • 油茶属虫媒异花授粉植物，其遗传杂合度高，存在杂交育种周期长以及杂交过程中易发生混杂致使F1子代出现假子代等问题。SSR标记是共显性标记，对二倍体材料扩增后，可根据F1子代基因型来鉴定真假子代。表现具有双亲特征条带或具父本特征条带的子代样本为真杂种，而只表现为母本特征条带无父本特征条带的为假杂种（胡文舜等，2015）。有学者认为浙江红花油茶是宛田红花油茶或广宁红花油茶演化到山茶品种群的过渡物种，又或是广宁红花油茶到香港红山茶（C. hongkongensis）演化过程中一个至关重要的物种（Yusuke，1988），这就不难解释自然条件下浙江红花油茶与广宁红花油茶等近缘种间的生殖隔离不明显，会产生杂交子代的现象（顾志建和孙先凤，1997）。另外，在实施人工杂交育种的过程中也存在外来花粉污染造成子代混杂的可能，而明确F1子代的真实性是构建遗传图谱、开展子代测定等的前提（周文才等，2015）。因此，有必要对杂交子代进行早期鉴定，以提高育种效率，节约成本。

  • 子代鉴定的方法主要有形态特征、染色体计数、荧光原位杂交和分子标记等。根据杂交子代的表型来判断子代的真实性是最基本的方法。该方法具有直观便捷的优点，但鉴定周期长且易受观察者主观和栽培环境影响，无法保证鉴定结果的准确性（Ye et al.，2013；Dridi et al.，2018）。细胞学方法中的荧光原位杂交及染色体计数具有较高的鉴定效率，但操作繁杂、费时费力。分子标记鉴定不仅具有鉴定效率高、操作简便、不受栽培环境和生长发育条件的影响等优点，还可明确子代和亲本的基因型，从基因组的水平上揭示子代与双亲间的遗传差异（Yang et al.，2010；Khajudparn et al.，2012；Khan et al.，2013）。分子标记中的简单重复序列（simple sequence repeats，SSR）标记，由于具有共显性、重复性好、稳定可靠、操作简单等优点，因此也已被广泛应用于茶树（雷雨等，2021）、沙田柚（韩国辉等，2010）、菊花（刘颖鑫等，2019）等物种的杂种鉴定。然而，由于油茶杂交群体不易获得，有关杂种后代鉴定的研究鲜有报道，只是在同属的物种中有利用SSR标记鉴定杂交子代的研究报道，徐晶等（2009）利用分别来自叶绿体DNA、rDNA的内部转录间隔区和核基因组共5个SSR标记，对金花茶（C. nitidissima）× 七星白（C. japonica）以及金花茶 × 茶梅（C. sasanqua）的6个杂交子代进行杂种鉴定，鉴定效率为83.33%。

  • 本研究以油茶杂交育种及品种分子鉴定为研究区域，以浙江红花油茶为母本，广宁红花油茶为父本，采用人工杂交获得45株F1子代，通过对杂交子代进行表型测定，同时筛选SSR标记并利用该标记开展杂交子代的鉴定，拟探讨：（1）浙江红花油茶 × 广宁红花油茶的杂交子代表型偏向父本或母本，还是介于父母本之间；（2）能否获得适于油茶种间杂种鉴定的特异SSR标记；（3）SSR标记能否对浙江红花油茶 × 广宁红花油茶杂交子代进行真伪鉴定及其鉴定效率。以期为油茶物种间的杂交育种提供参考，同时也为后续油茶物种间的杂交子代SSR标记鉴定提供依据。

  • 1 材料与方法

  • 1.1 试验材料和DNA提取

  • 以广宁红花油茶为父本，浙江红花油茶为母本经常规杂交后获得45株F1子代。杂交子代为5年生实生苗，栽植于江西省林业科学院试验基地。每份样本采集3~5片嫩叶，并保存于-80℃超低温冰箱待用。利用改良CTAB法（温强等，2006）提取DNA后，用1%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，Nanodrop 2000（Thermo Scientific，USA）检测DNA的浓度和纯度，将DNA浓度稀释至100 ng ·μL-1，于-20℃保存备用。

  • 1.2 SSR引物设计和PCR扩增

  • 基于浙江红花油茶全长转录组序列，利用Primer 3.0软件进行SSR引物设计。引物PCR 扩增体系为10 μL：10 × Buffer 1.0 μL，Mg2+（25 mmol·L-1）1.0 μL，dNTPs（10 mmol·L-1）1.0 μL，10 μmol·L-1的 Primer-F、Primer-R 各0.4 μL，Taq酶（5 U·μL-1）0.1 μL，DNA模板（100 ng·μL-1）0.5 μL，加灭菌ddH2O补齐到10 μL。PCR扩增程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，57~60℃（因不同引物而异）退火30 s，72℃延伸30 s，共25个循环；72℃延伸1 min，4℃保存。PCR扩增产物用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，150 V电压电泳90 min后进行银染显色，并拍照记录。

  • 1.3 引物的筛选和可靠性验证

  • 经过初步PCR扩增筛选出32个条带清晰、多态性好的标记。经2个亲本以及6个杂交子代样本筛选出可区分双亲和子代并能明确子代位点来源的SSR标记，用于后续的45个F1子代样本的扩增。为确保杂交子代鉴定试验结果的可靠性，选取3个广宁红花油茶样本（非父本）和3个浙江红花油茶样本（非母本）对杂交子代鉴定效率低的SSR标记进行可靠性验证。双亲和杂交子代的等位基因用A、B、C、D 英文字母表示。

  • 2 结果与分析

  • 2.1 杂交子代表型性状

  • 浙江红花油茶 × 广宁红花油茶的F1子代在表型上表现为亲本性状中间型，从整体看树形高大、生长迅速更倾向于父本广宁红花油茶的性状（表1，图1）。F1子代的枝、叶及叶柄光滑无毛，老枝灰白色，新梢红色；叶片绿色略偏黄，薄革质，椭圆或长椭圆形，侧脉约8对，叶脉明显，边缘3/4有锯齿；子代播种种植后第4年开花，花顶生单花，红色，花冠直径7~8 cm，花瓣7~8片，柱头5裂、中裂；苞片及萼片早期黄绿色被毛，后期淡褐色被毛，9~10片，宿存。

  • 表1 双亲及F1子代的表型性状

  • Table1 Phenotypic traits of parents and F1 hybrid progenies

  • 图1 双亲及杂交子代的照片

  • Fig.1 Photos of parents and hybrid progenies

  • 2.2 杂交子代鉴定的引物筛选

  • 初步筛选出的32对SSR引物在双亲和6个杂交子代（10号、12号、13号、28号、33号和40号）中均可扩增，其中亲本间表现为多态性的引物有20对，多态性比例为62.5%。从中选择8对扩增条带清晰并呈现共显性的SSR引物，用于45株杂交子代鉴定，详细引物信息见表2。

  • 2.3 杂交子代的SSR分子鉴定

  • 通过8对SSR引物对45个 F1子代进行鉴定，结果表明所有子代均为真子代，单对引物的杂种鉴定效率为55.56%~100%（表3）。引物CC_eSSR152、CC_eSSR174和CC_eSSR296在亲本扩增出2个等位基因，基因型为纯合互补型（AA × BB），扩增出的F1子代的基因型均为AB型，鉴定出45个真杂种，鉴定效率为100%，对真假子代的鉴定最为直观有效。引物CC_eSSR162、CC_eSSR165、CC_eSSR171、CC_eSSR270和CC_eSSR292在亲本中的基因型表现为双亲互补型，其中引物CC_eSSR165（AB × CC）、CC_eSSR171（AA × BC）、CC_eSSR270（CC × AB）和CC_eSSR292（AA × BC）扩增出3个等位基因，引物CC_eSSR162（AB × CD）扩增出4个等位基因。引物CC_eSSR162、CC_eSSR165、CC_eSSR171和CC_eSSR270在45个F1子代中扩增出的带型均具双亲特征带，真杂种的鉴定效率均为100%。引物CC_eSSR292在F1子代中有25个子代扩增出基因型为AB或AC，即继承了分别来自双亲（父本AA、母本BC）各1个等位基因，鉴定为真杂种，其余20个样本的基因型（BB、CC）仅继承了母本的等位基因而未出现父本等位基因，鉴定为假子代，因此其鉴定效率为55.56%（表3，图2）。

  • 2.4 杂交子代鉴定结果验证

  • 另外，选取3个非父本的广宁红花油茶个体（G1、G2、G3）和3个非母本的浙江红花油茶个体（Z1、Z2、Z3）检测引物CC_eSSR292对真假子代的鉴定结果。由图3：A可知，引物CC_eSSR292扩增的真子代的基因型为杂合型，能够完美地继承父母本各1个等位基因；由图3：B可知，引物CC_eSSR292扩增的非杂交子代的6个个体并未继承双亲的等位基因，而是扩增出新的等位基因，为假杂种，表明引物CC_eSSR292对杂交子代的鉴定结果可靠。

  • 3 讨论与结论

  • 3.1 杂交子代表型分析

  • 杂交育种的目的是通过杂交获得综合双亲优良性状的杂交子代，是当前培育油茶新品种的重要途径。本研究中，我们选择浙江红花油茶 × 广宁红花油茶的杂交组合进行人工杂交，其中作为母本的浙江红花油茶（GHY26）材料是我们团队筛选出具有亚油酸含量高（7.31%）、果实产量高（平均冠幅产量达2.12 kg·m-2）等优良性状的植株（董乐等，2021），我们期望选育出具有双亲优良性状的高产油茶新品种。

  • 前人以浙江红花油茶作母本获得的杂交子代在表型性状上更偏向于母本特征，如王湘南等（2020）对浙江红花油茶和滇山茶杂交得到的子代进行观测，发现在开花、枝叶及树体生长等表型性状较大程度地遗传到母本的特征。在花瓣数量及花型上，高继银等（2016）培育的浙江红花油茶与杜鹃红山茶杂交子代同样偏向于母本。本研究中，我们得到的F1杂交子代在花和叶片形态等表型性状上与母本浙江红花油茶接近，叶片颜色、大小等特征处于双亲特征之间，叶脉、萼片、柱头、生长势更接近父本广宁红花油茶，与前人的研究结果有所不同。本研究中F1杂交子代较好地结合了双亲的优点，并且父本广宁红花油茶对子代的表型有较大影响，为今后利用父本广宁红花油茶的优点开展浙江红花油茶杂交品种选育提供了依据。至于子代的果实产量和亚油酸含量等特征的倾向性还有待于后续进一步试验验证。

  • 3.2 杂交子代鉴定的SSR引物筛选

  • 浙江红花油茶在表型上与同组内的广宁红花油茶、闪光红山茶（C. lucidissima）相近且在种内存在丰富的表型变异，尤其是叶片形态差异显著，仅仅依据形态特征很难鉴定杂种的真实性（温强等，2015）。另外，由于浙江红花油茶自交不亲和，长期异交，遗传背景高度杂合，因此对其进行杂种鉴定时，宜选择合适且有效的共显性标记才能避免误判。韩国辉等（2010）认为，不同SSR标记对杂交子代的鉴定能力不尽相同，相较于杂合型的SSR标记，纯合型标记的鉴定效率更高，仅用一个标记就可以鉴定出所有的杂交后代。周宁宁等（2017）根据SSR标记在月季杂交子代中的鉴定能力划分为三种类型：第一种是纯合显性标记AA × BB型，杂种鉴定效率能够达到100%；第二种是AB × CC、AA × BC和AB × CD基因型标记，鉴定能力次之；第三种是鉴定能力最差的AA × AB、AB × BB、AB × AC等类型标记。尹宝颖等（2019）对苹果杂交子代进行鉴定，将9个SSR标记分为了完全互补型（AA × BB、AB × CD和AB × CC型）和不完全互补型（AA × AB和AB × BC型）两大类，前者标记的鉴定效率较高，后者标记的鉴定效率较低，需要进一步验证。以上报道均认为AA × BB、AB × CC、AA × BC和AB × CD类型的SSR标记的鉴定效率较高，理论上仅需要1个标记就可以鉴定出所有杂交子代，其中AA × BB和AB × CD型标记的杂种鉴定效果最好，可以大大提高鉴定效率。本研究中用于油茶杂交子代鉴定的8个SSR标记均为完全互补型，其中CC_eSSR152、CC_eSSR174和CC_eSSR296的基因型为AA × BB类型，CC_eSSR162的基因型为AB × CD，这4个标记的杂种鉴定效率同前人的研究结果一致，都达到了100%。不同的是，CC_eSSR165（AB × CC）、CC_eSSR171（AA × BC）和CC_eSSR270（CC × AB）标记的鉴定效率也高达100%，表明油茶杂交子代鉴定的SSR引物筛选范围较大，这为今后开展油茶其他物种杂交子代鉴定等相关研究提供参考。

  • 表2 8对多态性EST-SSR引物信息

  • Table2 Information on eight polymorphic EST-SSR primers

  • 表3 F1子代的基因型信息

  • Table3 Genotype information of F1 hybrid progenies

  • 图2 SSR引物对45个杂交子代鉴定的凝胶电泳图

  • Fig.2 Gel electrophoresis image of SSR primer for identification of 45 hybrid progenies

  • 图3 引物CC_eSSR292的扩增凝胶电泳图

  • Fig.3 Gel electrophoresis image of primer CC_eSSR292

  • 3.3 SSR标记鉴定杂交子代能力分析

  • 韩国辉等（2010）认为对于杂合的显性标记至少要5个父本特异标记才能鉴定出97%的真杂种，我们从32个SSR标记中筛选出8个具有较高杂种鉴定效率的标记，经F1子代群体验证，有7个均能一次性单独鉴定所有杂交子代，无论是筛选效率还是鉴定效率都比较高。杂交子代真假性的鉴定过程中除了考虑最大程度确保鉴定的准确性外，还要考虑试验工作量的问题。雷雨等（2021）从32个SSR标记中各筛选出3个标记对福鼎大白茶 × 保靖黄金茶1号以及安徽1号 × 保靖黄金茶1号茶树的2个杂交子代群体进行子代鉴定，杂种鉴定效率分别为85.42%和79.55%。尹宝颖等（2019）从35个SSR标记中筛选出了9个标记用于鉴定鸡冠和富士苹果F1代，有225株为真杂种，鉴定效率为93%。李文秀等（2021）仅选用3个多态性SSR标记就可以完成35株橡胶树杂交子代的真实性鉴定且这3个标记都具有较高的杂种鉴定效率。本研究中，我们利用8个共显性标记对浙江红花油茶和广宁红花油茶的45株F1子代进行杂种真实性鉴定，其中CC_eSSR152、CC_eSSR162、CC_eSSR165、CC_eSSR171、CC_eSSR174、CC_eSSR270和CC_eSSR296这7个标记的杂交子代鉴定效率高达100%，CC_eSSR292标记的鉴定效率为55.56%。综合SSR标记的鉴定结果，判定45个F1子代都是真杂种。因此，我们选用的8个SSR标记鉴定油茶杂交子代完全可行。同时，针对SSR引物鉴定杂交子代结果的可靠性验证也表明SSR标记适用于油茶杂交子代的鉴定。

  • 参考文献

    • DONG L, LI T, HUANG WY, et al. , 2021. Selection and comprehensive evaluation of superior individual plant in Camellia chekiangoleosa [J]. J Cent S Univ For Technol, 41(11): 35-45. [董乐, 李田, 黄文印, 等, 2021. 浙江红花油茶优株筛选与综合评价 [J]. 中南林业科技大学学报, 41(11): 35-45. ]

    • DRIDI J, FENDRI M, BRETON CM, et al. , 2018. Characterization of olive progenies derived from a Tunisian breeding program by morphological traits and SSR markers [J]. Sci Hort-Amsterdam, 236: 127-136.

    • GAO JY, LIU XK, ZHAO QM, 2016. Illustrations of the new camellia hybrids that bloom year-round [M]. Hangzhou: Zhejiang Science and Technology Press: 1-581. [高继银, 刘信凯, 赵强民, 2016. 四季茶花杂交新品种彩色图集 [M]. 杭州: 浙江科学技术出版社: 1-581. ]

    • GU ZJ, SUN XF, 1997, A karyomorphological study of seventeen species of Chinese Camellia [J]. Acta Bot Yunnan, 19(2): 159-170. [顾志建, 孙先凤, 1997. 山茶属17个种的核形态学研究 [J]. 云南植物研究, 19(2): 159-170. ]

    • HAN GH, XIANG SQ, WANG WX, et al. , 2010. Identification and genetic diversity of hybrid progenies from Shatian pummelo by SSR [J]. Sci Agric Sin, 43(22): 4678-4686. [韩国辉, 向素琼, 汪卫星, 等, 2010. 沙田柚杂交后代群体的SSR鉴定与遗传多样性分析 [J]. 中国农业科学, 43(22): 4678-4686. ]

    • HE YC, WU MJ, DONG L, et al. , 2020. Analysis of kernel oil content and variation of fatty acid composition of Camellia chekiangoleosa in the main producing areas [J]. Non-Wood For Res, 38(3): 37-45. [贺义昌, 吴妹杰, 董乐, 等, 2020. 主产区浙江红花油茶籽仁含油率及脂肪酸组成变异分析 [J]. 经济林研究, 38(3): 37-45. ]

    • HU WS, HUANG AP, JIANG F, et al. , 2015. Identification and genetic diversity of reciprocal hybrids in Longan (Dimocarpus longan) by SSR [J]. Acta Hortic Sin, 42 (10): 1899-1908. [胡文舜, 黄爱萍, 姜帆, 等, 2015. 龙眼正反交后代的SSR鉴定及遗传多样性分析 [J]. 园艺学报, 42(10): 1899-1908. ]

    • KHAJUDPARN P, PRAJONGJAI T, POOLSAWAT O, et al. , 2012. Application of ISSR markers for verification of F1 hybrids in mungbean（Vigna radiata） [J]. Genet Mol Res, 11 (3): 3329-3338.

    • KHAN H, SIVALINGAM PN, CHAUHAN S, et al. , 2013. Improved crossing technique and identification of true F1 hybrids of Ziziphus mauritiana Lam. by molecular markers [J]. Sci Hort-Amsterdam, 150: 164-171.

    • LI L, 2016. Garden plant genetics and breeding, Chongqing: Chongqing University Press: 157-173. [李凌, 2016. 园林植物遗传育种 [M]. 重庆: 重庆大学出版社: 157-173. ]

    • LI WX , HE JJ, ZHANG HL, et al. , 2021. Identification of F1 hybrids of Hevea brasiliensis by SSR Markers [J]. Chin J Trop Crops, 42(5): 1305-1309. [李文秀, 贺军军, 张华林, 等, 2021. SSR分子标记鉴定橡胶树F1真伪杂种 [J]. 热带作物学报, 42(5): 1305-1309. ]

    • LEI Y, DUAN JH, HUANG FY, et al. , 2021. Identification and genetic diversity of tea F1 hybrids based on SSR markers [J]. J Plant Genetic Resour, 22(3): 748-757. [雷雨, 段继华, 黄飞毅, 等, 2021. 茶树杂交F1真假杂种的SSR鉴定及遗传多样性分析 [J]. 植物遗传资源学报, 22(3): 748-757. ]

    • LIU YX, LI PT, CHI TH, et al. , 2019. Identification and genetic diversity analysis of interspecific F1 hybrids between Chrysanthemum nankingense × C. lavandulifolium [J]. Acta Hortic Sin, 46(8): 1553-1564. [刘颖鑫, 李沛曈, 迟天华, 等, 2019. 菊花脑×甘菊种间F1杂种的鉴定和遗传多样性分析 [J]. 园艺学报, 46(8): 1553-1564. ]

    • LUO XL, ZHU WX, 2010. Processing technology of oil-tea camellia seed oil and comprehensive utilization of Camellia oleifera resources [J]. Chin Oils And Fats, 35(9): 13-17. [罗晓岚, 朱文鑫, 2010. 油茶籽油加工和油茶资源综合利用 [J]. 中国油脂, 35(9): 13-17. ]

    • QIN SY, RONG J, ZHANG WJ, et al. , 2018. Cultivation history of Camellia oleifera and genetic resources in the Yangtze River Basin [J]. Biodivers Sci, 26(4): 384-395. [秦声远, 戎俊, 张文驹, 等, 2018. 油茶栽培历史与长江流域油茶遗传资源 [J]. 生物多样性, 26(4): 384-395. ]

    • SUN PG, CHEN XY, XI RC, et al. , 2012. Research progress on the evaluation of Camellia oleifera germplasm resources [J]. Chin For Sci Technol, 26(3): 1-6. [孙佩光, 陈晓阳, 奚如春, 等, 2012. 油茶种质资源评价研究进展 [J]. 林业科技开发, 26(3): 1-6. ]

    • TIAN QQ, HUANG JJ, WEN Q, et al. , 2021. The current situation and trend of molecular breeding in oil-tea camellia [J]. S Chin For Sci, 49(5): 53-59. [田仟仟, 黄建建, 温强, 等, 2021. 油茶分子育种现状与趋势 [J]. 南方林业科学, 49(5): 53-59. ]

    • TIAN XX, FANG XZ, SUN HZ, et al. , 2018. Analysis of triacylglycerols in different oil-tea camellia cones [J]. For Res, 31(2): 41-47. [田潇潇, 方学智, 孙汉洲, 等, 2018. 不同油茶物种及品种果实中甘油三酯成分分析 [J]. 林业科学研究, 31(2): 41-47. ]

    • WANG XN, CHEN YZ, WANG R, et al. , 2020. The breeding of two new Camellia varieties [J]. J Centr S Univ For Technol, 40(8): 1-6. [王湘南, 陈永忠, 王瑞, 等, 2020. 2个山茶新品种的选育 [J]. 中南林业科技大学学报, 40(8): 1-6. ]

    • WEN Q, YE JS, LEI XL, et al. , 2006. Study on the inter-simple sequence repeat condition of Camellia oleifera [J]. J Centr S For Univ, 26(6): 22-26. [温强, 叶金山, 雷小林, 等, 2006. 油茶ISSR反应体系建立及优化 [J]. 中南林业科技大学学报, 26(6): 22-26. ]

    • WEN Q, ZHU H, YE JS, et al. , 2015. Authentication of Camellia chekiangoleosa and its close species using RPB2 gene sequences [J]. Mol Plant Breed, 13(11): 2559-2565. [温强, 朱恒, 叶金山, 等, 2015. 利用RPB2基因序列甄别浙江红山茶及其近缘种 [J]. 分子植物育种, 13(11): 2559-2565. ]

    • WU XH, SHEN B, HUANG YF, et al. , 2016. Analysis and evaluation of nutrient ingredients in Camellia chekiangoleosa [J]. Non-Wood For Res, 34(3): 130-134. [吴雪辉, 沈冰, 黄永芳, 等, 2016. 红花油茶营养成分分析及评价 [J]. 经济林研究, 34(3): 130-134. ]

    • XU J, HUANG LD, XU Y, et al. , 2009. Identifying hybrids of golden camellia using SSR molecular markers [J]. J Fudan Univ (Nat Sci), 48(5): 668-673. [徐晶, 黄连冬, 徐颖, 等, 2009. 用SSR分子标记鉴定金花茶杂交种 （英文） [J]. 复旦学报(自然科学版), 48(5): 668-673. ]

    • YANG D, HU X, LIU Z, et al. , 2010. Intergeneric hybridizations between Opisthopappus taihangensis and Chrysanthemum lavandulifolium [J]. Sci Hort-Amsterdam, 125(4): 718-723.

    • YANG ZL, LI JY, FAN ZQ, 2004. A preliminary study on the cross-compatibility among Sect. Camellia species and C. japonica cultivars in the genus Camellia [J]. Non-Wood For Res, 17(5): 680-684. [杨志玲, 李纪元, 范正琪, 2004. 山茶属红山茶组物种间及其与品种杂交亲和性研究初报 [J]. 林业科学研究, 17(5): 680-684. ]

    • YE S, WANG Y, HUANG D, et al. , 2013. Genetic purity testing of F1 hybrid seed with molecular markers in cabbage (Brassica oleracea var. capitata) [J]. Sci Hort-Amsterdam, 155 (2): 92-96.

    • YIN BY, ZHANG Y, SUN FL, et al. , 2019. Identification and genetic diversity of apple F1 hybrids based on SSR markers [J]. J Hebei Agric Univ, 42(5): 46-51. [尹宝颖, 张媛, 孙福来, 等, 2019. 苹果F1群体的SSR鉴定与遗传多样性分析 [J]. 河北农业大学学报, 42(5): 46-51. ]

    • YUSUKE S, 1988. Studies on the flower colours in the genus Camellia, with special reference to the phylogenies of the genus [J]. Bull Fac Agric Kagosh Univ, 38: 9-62.

    • ZHOU NN, LI SB, LI YB, 2017. Hybrids identification and genetic analysis in diploid roses population (F1) using SSR markers [J]. Acta Hortic Sin, 44(1): 151-160. [周宁宁, 李淑斌, 李远波, 等, 2017. 二倍体月季F1群体的SSR鉴定与遗传分析 [J]. 园艺学报, 44(1): 151-160. ]

    • ZHOU S, ZHU JH, XIAO JZ, et al. , 2001. Distant crossing trial with oil tea camellia [J]. Non-Wood For Res, 19(1): 20-25. [周盛, 朱金惠, 肖景治, 等, 2001. 油茶远缘杂交育种试验 [J]. 经济林研究, 19(1): 20-25. ]

    • ZHOU WC, HOU J, GUO W, et al. , 2015. Identification of the true hybrids for Populus deltoides by using SSR markers [J]. J Nanjing For Univ (Nat Sci Ed), 39(3): 45-49. [周文才, 侯静, 郭炜, 等, 2015. 基于SSR标记的美洲黑杨杂交子代的鉴定 [J]. 南京林业大学学报(自然科学版), 39(3): 45-49. ]

    • ZHOU WC, XIAO XY, SHEN JL, et al. , 2019. Review on germplasm resources and breeding strategy for Camellia chekiangoleosa [J]. S Chin For Sci, 47(6): 20-24. [周文才, 肖相元, 沈敬理, 等, 2019. 浙江红花油茶种质资源述评及育种策略 [J]. 南方林业科学, 47(6): 20-24. ]

  • 基本信息

    中图分类号: Q943
    文献标识码: A
    DOI: 10.11931/guihaia.gxzw202305015
    文章编号: 1000-3142(2024)07-1269-09

    基金信息

    国家重点研发计划项目（2021YFD1000402）；
    国家自然科学基金（32201592，31860179）；
    江西省重点研发计划项目（20201BBF61003， 20224BBF61027）；
    江西省林业厅林业创新项目(YCYJZX[2023]131，YCYJZX[2023]111，202221)；
    江西省林业科学院基础研究与人才科研专项(2022511001)；
    江西省林业科学院博士启动项目(2021521001)；

    引用信息

    周文才，田仟仟，李田，等, 2024. 浙江红花油茶 × 广宁红花油茶杂交子代的表型性状及其SSR分子鉴定 [J]. 广西植物， 44(7): 1269-1277.

    ZHOU WC, TIAN QQ, LI T， et al., 2024. Phenotypic traits and SSR molecular identification of hybrid progenies of Camellia chekiangoleosa × C. semiserrata [J]. Guihaia， 44(7): 1269-1277.

    稿件历史

    收稿日期: 2023-12-22

  • 参考文献

    • DONG L, LI T, HUANG WY, et al. , 2021. Selection and comprehensive evaluation of superior individual plant in Camellia chekiangoleosa [J]. J Cent S Univ For Technol, 41(11): 35-45. [董乐, 李田, 黄文印, 等, 2021. 浙江红花油茶优株筛选与综合评价 [J]. 中南林业科技大学学报, 41(11): 35-45. ]

    • DRIDI J, FENDRI M, BRETON CM, et al. , 2018. Characterization of olive progenies derived from a Tunisian breeding program by morphological traits and SSR markers [J]. Sci Hort-Amsterdam, 236: 127-136.

    • GAO JY, LIU XK, ZHAO QM, 2016. Illustrations of the new camellia hybrids that bloom year-round [M]. Hangzhou: Zhejiang Science and Technology Press: 1-581. [高继银, 刘信凯, 赵强民, 2016. 四季茶花杂交新品种彩色图集 [M]. 杭州: 浙江科学技术出版社: 1-581. ]

    • GU ZJ, SUN XF, 1997, A karyomorphological study of seventeen species of Chinese Camellia [J]. Acta Bot Yunnan, 19(2): 159-170. [顾志建, 孙先凤, 1997. 山茶属17个种的核形态学研究 [J]. 云南植物研究, 19(2): 159-170. ]

    • HAN GH, XIANG SQ, WANG WX, et al. , 2010. Identification and genetic diversity of hybrid progenies from Shatian pummelo by SSR [J]. Sci Agric Sin, 43(22): 4678-4686. [韩国辉, 向素琼, 汪卫星, 等, 2010. 沙田柚杂交后代群体的SSR鉴定与遗传多样性分析 [J]. 中国农业科学, 43(22): 4678-4686. ]

    • HE YC, WU MJ, DONG L, et al. , 2020. Analysis of kernel oil content and variation of fatty acid composition of Camellia chekiangoleosa in the main producing areas [J]. Non-Wood For Res, 38(3): 37-45. [贺义昌, 吴妹杰, 董乐, 等, 2020. 主产区浙江红花油茶籽仁含油率及脂肪酸组成变异分析 [J]. 经济林研究, 38(3): 37-45. ]

    • HU WS, HUANG AP, JIANG F, et al. , 2015. Identification and genetic diversity of reciprocal hybrids in Longan (Dimocarpus longan) by SSR [J]. Acta Hortic Sin, 42 (10): 1899-1908. [胡文舜, 黄爱萍, 姜帆, 等, 2015. 龙眼正反交后代的SSR鉴定及遗传多样性分析 [J]. 园艺学报, 42(10): 1899-1908. ]

    • KHAJUDPARN P, PRAJONGJAI T, POOLSAWAT O, et al. , 2012. Application of ISSR markers for verification of F1 hybrids in mungbean（Vigna radiata） [J]. Genet Mol Res, 11 (3): 3329-3338.

    • KHAN H, SIVALINGAM PN, CHAUHAN S, et al. , 2013. Improved crossing technique and identification of true F1 hybrids of Ziziphus mauritiana Lam. by molecular markers [J]. Sci Hort-Amsterdam, 150: 164-171.

    • LI L, 2016. Garden plant genetics and breeding, Chongqing: Chongqing University Press: 157-173. [李凌, 2016. 园林植物遗传育种 [M]. 重庆: 重庆大学出版社: 157-173. ]

    • LI WX , HE JJ, ZHANG HL, et al. , 2021. Identification of F1 hybrids of Hevea brasiliensis by SSR Markers [J]. Chin J Trop Crops, 42(5): 1305-1309. [李文秀, 贺军军, 张华林, 等, 2021. SSR分子标记鉴定橡胶树F1真伪杂种 [J]. 热带作物学报, 42(5): 1305-1309. ]

    • LEI Y, DUAN JH, HUANG FY, et al. , 2021. Identification and genetic diversity of tea F1 hybrids based on SSR markers [J]. J Plant Genetic Resour, 22(3): 748-757. [雷雨, 段继华, 黄飞毅, 等, 2021. 茶树杂交F1真假杂种的SSR鉴定及遗传多样性分析 [J]. 植物遗传资源学报, 22(3): 748-757. ]

    • LIU YX, LI PT, CHI TH, et al. , 2019. Identification and genetic diversity analysis of interspecific F1 hybrids between Chrysanthemum nankingense × C. lavandulifolium [J]. Acta Hortic Sin, 46(8): 1553-1564. [刘颖鑫, 李沛曈, 迟天华, 等, 2019. 菊花脑×甘菊种间F1杂种的鉴定和遗传多样性分析 [J]. 园艺学报, 46(8): 1553-1564. ]

    • LUO XL, ZHU WX, 2010. Processing technology of oil-tea camellia seed oil and comprehensive utilization of Camellia oleifera resources [J]. Chin Oils And Fats, 35(9): 13-17. [罗晓岚, 朱文鑫, 2010. 油茶籽油加工和油茶资源综合利用 [J]. 中国油脂, 35(9): 13-17. ]

    • QIN SY, RONG J, ZHANG WJ, et al. , 2018. Cultivation history of Camellia oleifera and genetic resources in the Yangtze River Basin [J]. Biodivers Sci, 26(4): 384-395. [秦声远, 戎俊, 张文驹, 等, 2018. 油茶栽培历史与长江流域油茶遗传资源 [J]. 生物多样性, 26(4): 384-395. ]

    • SUN PG, CHEN XY, XI RC, et al. , 2012. Research progress on the evaluation of Camellia oleifera germplasm resources [J]. Chin For Sci Technol, 26(3): 1-6. [孙佩光, 陈晓阳, 奚如春, 等, 2012. 油茶种质资源评价研究进展 [J]. 林业科技开发, 26(3): 1-6. ]

    • TIAN QQ, HUANG JJ, WEN Q, et al. , 2021. The current situation and trend of molecular breeding in oil-tea camellia [J]. S Chin For Sci, 49(5): 53-59. [田仟仟, 黄建建, 温强, 等, 2021. 油茶分子育种现状与趋势 [J]. 南方林业科学, 49(5): 53-59. ]

    • TIAN XX, FANG XZ, SUN HZ, et al. , 2018. Analysis of triacylglycerols in different oil-tea camellia cones [J]. For Res, 31(2): 41-47. [田潇潇, 方学智, 孙汉洲, 等, 2018. 不同油茶物种及品种果实中甘油三酯成分分析 [J]. 林业科学研究, 31(2): 41-47. ]

    • WANG XN, CHEN YZ, WANG R, et al. , 2020. The breeding of two new Camellia varieties [J]. J Centr S Univ For Technol, 40(8): 1-6. [王湘南, 陈永忠, 王瑞, 等, 2020. 2个山茶新品种的选育 [J]. 中南林业科技大学学报, 40(8): 1-6. ]

    • WEN Q, YE JS, LEI XL, et al. , 2006. Study on the inter-simple sequence repeat condition of Camellia oleifera [J]. J Centr S For Univ, 26(6): 22-26. [温强, 叶金山, 雷小林, 等, 2006. 油茶ISSR反应体系建立及优化 [J]. 中南林业科技大学学报, 26(6): 22-26. ]

    • WEN Q, ZHU H, YE JS, et al. , 2015. Authentication of Camellia chekiangoleosa and its close species using RPB2 gene sequences [J]. Mol Plant Breed, 13(11): 2559-2565. [温强, 朱恒, 叶金山, 等, 2015. 利用RPB2基因序列甄别浙江红山茶及其近缘种 [J]. 分子植物育种, 13(11): 2559-2565. ]

    • WU XH, SHEN B, HUANG YF, et al. , 2016. Analysis and evaluation of nutrient ingredients in Camellia chekiangoleosa [J]. Non-Wood For Res, 34(3): 130-134. [吴雪辉, 沈冰, 黄永芳, 等, 2016. 红花油茶营养成分分析及评价 [J]. 经济林研究, 34(3): 130-134. ]

    • XU J, HUANG LD, XU Y, et al. , 2009. Identifying hybrids of golden camellia using SSR molecular markers [J]. J Fudan Univ (Nat Sci), 48(5): 668-673. [徐晶, 黄连冬, 徐颖, 等, 2009. 用SSR分子标记鉴定金花茶杂交种 （英文） [J]. 复旦学报(自然科学版), 48(5): 668-673. ]

    • YANG D, HU X, LIU Z, et al. , 2010. Intergeneric hybridizations between Opisthopappus taihangensis and Chrysanthemum lavandulifolium [J]. Sci Hort-Amsterdam, 125(4): 718-723.

    • YANG ZL, LI JY, FAN ZQ, 2004. A preliminary study on the cross-compatibility among Sect. Camellia species and C. japonica cultivars in the genus Camellia [J]. Non-Wood For Res, 17(5): 680-684. [杨志玲, 李纪元, 范正琪, 2004. 山茶属红山茶组物种间及其与品种杂交亲和性研究初报 [J]. 林业科学研究, 17(5): 680-684. ]

    • YE S, WANG Y, HUANG D, et al. , 2013. Genetic purity testing of F1 hybrid seed with molecular markers in cabbage (Brassica oleracea var. capitata) [J]. Sci Hort-Amsterdam, 155 (2): 92-96.

    • YIN BY, ZHANG Y, SUN FL, et al. , 2019. Identification and genetic diversity of apple F1 hybrids based on SSR markers [J]. J Hebei Agric Univ, 42(5): 46-51. [尹宝颖, 张媛, 孙福来, 等, 2019. 苹果F1群体的SSR鉴定与遗传多样性分析 [J]. 河北农业大学学报, 42(5): 46-51. ]

    • YUSUKE S, 1988. Studies on the flower colours in the genus Camellia, with special reference to the phylogenies of the genus [J]. Bull Fac Agric Kagosh Univ, 38: 9-62.

    • ZHOU NN, LI SB, LI YB, 2017. Hybrids identification and genetic analysis in diploid roses population (F1) using SSR markers [J]. Acta Hortic Sin, 44(1): 151-160. [周宁宁, 李淑斌, 李远波, 等, 2017. 二倍体月季F1群体的SSR鉴定与遗传分析 [J]. 园艺学报, 44(1): 151-160. ]

    • ZHOU S, ZHU JH, XIAO JZ, et al. , 2001. Distant crossing trial with oil tea camellia [J]. Non-Wood For Res, 19(1): 20-25. [周盛, 朱金惠, 肖景治, 等, 2001. 油茶远缘杂交育种试验 [J]. 经济林研究, 19(1): 20-25. ]

    • ZHOU WC, HOU J, GUO W, et al. , 2015. Identification of the true hybrids for Populus deltoides by using SSR markers [J]. J Nanjing For Univ (Nat Sci Ed), 39(3): 45-49. [周文才, 侯静, 郭炜, 等, 2015. 基于SSR标记的美洲黑杨杂交子代的鉴定 [J]. 南京林业大学学报(自然科学版), 39(3): 45-49. ]

    • ZHOU WC, XIAO XY, SHEN JL, et al. , 2019. Review on germplasm resources and breeding strategy for Camellia chekiangoleosa [J]. S Chin For Sci, 47(6): 20-24. [周文才, 肖相元, 沈敬理, 等, 2019. 浙江红花油茶种质资源述评及育种策略 [J]. 南方林业科学, 47(6): 20-24. ]