金樱子果实化学成分及其抗炎活性研究
doi: 10.11931/guihaia.gxzw202603045
邝伟冬 ， 彭媛 ， 赵兴玲 ， 谭建文
华南农业大学 林学与风景园林学院, 广州 510642
基金项目: 广东省林业科技创新项目（2025KJCX013）；广东省基础与应用基础研究基金自然科学基金项目（2023A1515012805）。
Chemical constituents of Rosa laevigata fruits and their anti-inflammatory activities
KUANG Weidong ， PENG Yuan ， ZHAO Xingling ， TAN Jianwen
College of Forestry and Landscape Architecture, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China
摘要
为阐明金樱子（Rosa laevigata）果实的化学成分及其抗炎活性，该研究以其乙醇提取物的乙酸乙酯部位为对象，经硅胶柱色谱及半制备高效液相色谱分离纯化，采用质谱、核磁共振等波谱学方法鉴定所得化合物的结构，并选取所得三萜类化合物，通过脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞一氧化氮（NO）生成抑制实验评价其抗炎活性。结果表明：（1）从乙酸乙酯部位共分离鉴定出19个化合物，分别鉴定为2α,3α,19α-三羟基-28-去甲乌苏-12-烯(1)、蔷薇酸(2)、1α,2β,3β,19α-四羟基乌苏-12-烯-28-酸(3)、2α,3α,19α,23-四羟基乌苏-12-烯-28-酸(4)、2α,3β,19α,23-四羟基乌苏-12-烯-28-酸(5)、刺梨苷F1(6)、hyptaic acid B(7)、银锻苷(8)、知母皂苷B(9)、楝叶吴萸素B(10)、二氢槲皮素(11)、曲霉三唑A(12)、反式油酸甲酯(13)、油酸(14)、10-二十碳烯酸(15)、芥酸酰胺(16)、油酸酰胺(17)、microphyllose A(18)、inotodisaccharide(19)，其中化合物7、9、10、12、13、15-19为首次在蔷薇属植物中分离，化合物1为首次在该种中分离。（2）抗炎测试结果显示，除化合物1以外，其余6个三萜类化合物均能显著抑制NO生成，化合物4、化合物5、化合物6的IC50值分别为（6.76±1.02）、（11.36±0.39）、（11.53±2.08）μmol·L-1，活性优于或接近阳性对照氨基胍盐酸盐。该研究丰富了金樱子果实的化学成分，明确了三萜类为其主要抗炎活性成分，为其抗炎活性的物质基础及进一步开发与利用提供了科学依据。
Abstract
To investigate the constituents of Rosa laevigata fruits and their anti-inflammatory activities, the ethyl acetate fraction of its ethanol extract was separated by silica gel column chromatography and semi-preparative HPLC. The isolated compounds were characterized by MS and NMR. Selected triterpenoids were tested for anti-inflammatory activities by measuring nitrix oxide (NO) production inhibition in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW264.7 macrophages. The results were as follows: (1) Nineteen compounds were isolated and identified from the ethyl acetate fraction, they were 2α,3α,19α-trihydroxy-28-norurs-12-ene (1), euscaphic acid (2), 1α,2β,3β,19α-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid (3), 2α,3α,19α,23-tetraydroxyurs-12-en-28-oic acid (4), 2α,3β,19α,23-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid (5), niga-ichigoside F1 (6), hyptaic acid B (7), tiliroside (8), anemarrhenoside B (9), evofolin B (10), taxifolin (11), aspergillus triazolate A (12), methyl elaidate (13), oleic acid (14), 10-eicosenoic acid (15), erucylamide (16), 9(Z)-octadecenamide (17), microphyllose A (18), inotodisaccharide (19). Among them, compounds 7, 9, 10, 12, 13, 15-19 represented the first occurrence in the genus Rosa, and Compound 1 was reported for the first time from Rosa laevigata. (2) Anti-inflammatory activity tests showed that all tested triterpenoids except Compound 1 significantly inhibited NO production. Compounds 4, 5 and 6 exhibited IC50 values of (6.76±1.02), (11.36±0.39) and (11.53±2.08) μmol·L-1, respectively, with activities superior to or comparable to the positive control aminoquanidine hydrochloride. This study enriches the chemical constituents of R. laevigata fruit, identifies triterpenoids as its primary anti-inflammatory active components, and provides a scientific basis for the material foundation of its anti-inflammatory activity and further development and utilization.
金樱子（Rosa laevigata）为蔷薇科（Rosaceae）蔷薇属（Rosa）植物，别称油饼果子、倒挂金钩、刺梨子等，其花、叶、根、果实均可入药。据《本草纲目》所述，金樱子可治疗“脾泄下痢，止小便利，涩精气”。金樱子作为传统中药，性平和、味酸甘，能固精缩尿与涩肠止泻，兼有固崩止带之效。临床上，本品常用于治疗遗精、滑精、遗尿、尿频，以及慢性久泻、久痢等病证。近年研究揭示，其果实还表现出抗氧化、抗炎、降糖降脂等多种生物活性，其中抗炎作用备受关注。已有研究发现，金樱子的醇提物可显著抑制炎症因子释放，减轻动物模型中的急性炎症反应（Zhou et al.，2014；李柯霏，2024；彭松等，2024），但其具体活性物质基础尚不明确。目前，文献报道的针对金樱子化学成分的研究总体还并不充分，已知成分主要包括三萜、黄酮、多糖等（陈泰等，1996），而对具体单体成分的生物活性评价还相对欠缺，限制了对其抗炎机制的深入阐释与相关高附加值产品的开发。为进一步明确金樱子果实中潜在具有抗炎活性的具体化学物质基础，本研究围绕金樱子果实，系统开展了其乙醇提取物乙酸乙酯部位的分离纯化及结构鉴定工作，共鉴定出19个化合物，并选取其中的三萜类单体，采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO生成抑制实验评价其抗炎活性，旨在明确金樱子果实中三萜类成分的抗炎作用，以期为揭示其抗炎物质基础及资源综合利用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
本研究材料于2024年11月，在河源市和平县合水镇河口村进行采集，经华南农业大学林学与风景园林学院谭建文教授鉴定为金樱子的果实，原药材保存于华南农业大学林学与风景园林学院109室。
1.2 仪器和试剂
N-1300 旋转蒸发仪、SB-1100 水浴锅、CA-1116A 冷却水循环装置（日本东京理化公司），超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司），离心浓缩干燥机、移液枪（德国艾本德公司），LRH-250生化培养箱（上海齐欣科学仪器有限公司），Agilent 1260 Infinity高效液相色谱仪（东莞市科桥超声波设备有限公司），二氧化碳培养箱、酶标仪（瑞士Tecan公司），LC-3000半制备型液相色谱（北京创新通恒科技有限公司）；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、95%乙醇、二甲基亚砜（天津市富宇精细化工有限公司），柱层析硅胶（80~100目，200~300目，青岛海洋化工有限公司），氘代氯仿、氘代甲醇、氘代吡啶[上海巴斯夫化学建材（中国）有限公司]，PBS磷酸盐缓冲液（德国西格玛奥德里奇贸易有限公司）
1.3 提取和分离
称取15 kg干燥的金樱子果实，经粉碎机粉碎后，以95%乙醇为溶剂，于室温条件下浸泡提取3次，每次提取持续3 d。每次提取后过滤，合并3次提取液，在减压条件下浓缩至无醇味，得到总浸膏。将总浸膏加入适量水中充分混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次。分出有机相，收集乙酸乙酯萃取液，合并后减压浓缩，最终得到乙酸乙酯部位309.5 g。
该部位采用正相硅胶柱层析（硅胶粒径80~100目）进行初步分离，以二氯甲烷-甲醇混合溶剂作为流动相进行梯度洗脱，合并相似馏分最终得到20个组分（R1-R20）。各组分采用硅胶柱层析、反相中压柱层析（甲醇-水梯度）及重结晶等分离纯化，得到19个化合物。其中，R3重结晶得化合物13（2.4 mg）；R5重结晶得化合物1（300 mg）；R7经反相中压柱（甲醇-水60∶40，V/V）纯化得化合物10（6.8 mg）；R9经反相中压柱（甲醇-水85∶15，V/V）纯化得化合物3（5.2 mg）；R10重结晶得化合物2（123.3 mg）、化合物4（117.1 mg）；R11经反相中压柱（甲醇-水80∶20，V/V）得化合物8（8.1 mg）、化合物11（114.2 mg）、化合物14（5.8 mg）、化合物15（4.5 mg）；R12经反相中压柱（甲醇-水70∶30→95∶5，V/V）得化合物5（7.1 mg）、化合物9（28.5 mg）、化合物12（3.3 mg）；R16经反相中压柱（甲醇-水70∶30→80∶20，V/V）得化合物19（1.5 mg）；R17重结晶得化合物16（1.5 mg）、17（1.5 mg）；R18经反相中压柱（甲醇-水90∶10→70∶30，V/V）得化合物6（180.4 mg）、化合物7（8.2 mg）、化合物18（60.0 mg）。
1.4 抗炎活性测定
本实验选择巨噬细胞RAW264.7作细胞模型，采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）作为本实验的诱导剂，通过检测一氧化氮（nitric oxide，NO）生成量评价化合物的抗炎效果。将细胞以每毫升1.0×106个的密度接种到96孔板（每孔90 μL），培养12 h使其贴壁。取出后，每孔加入10 μL样品，同时以磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）为阴性对照，氨基胍盐酸盐为阳性对照。放入培养箱培养2 h后取出，每孔加入10 μL LPS溶液（10 μg·mL-1）以刺激细胞，另设一组不加药和LPS作为空白对照。将96孔板置于培养箱中继续孵育24 h，使反应充分发生。培养结束后，从每孔中小心吸取60 μL的上清液，转移至另一个96孔板。加等体积Griess试剂，在540 nm波长处测定各孔的吸光度，根据吸光度计算NO浓度，以评价样品的抗炎活性。
2 结果与分析
2.1 结构鉴定
​化合物1​   白色粉末，分子式为 C29​H48​O3​。1​H NMR(500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.30(1H, t, J​=3.7 Hz, H-12), 3.94(1H, s, H-2), 3.41(1H, d, J​=9.4 Hz, H-3), 2.50(1H, s, H-18), 1.35(3H, s, H-27), 1.20(3H, s, H-26), 0.99(6H, s, H-23, H-24), 0.93(3H, d, J​=5.7 Hz, H-30), 0.87(3H, s, H-25), 0.79(3H, s, H-29)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 39.47(C-1), 67.17(C-2), 73.60(C-3), 39.38(C-4), 55.10(C-5), 19.28(C-6), 34.07(C-7), 42.74(C-8), 43.10(C-9), 39.03(C-10), 24.91(C-11), 129.36(C-12), 140.10(C-13), 43.10(C-14), 27.30(C-15), 26.61(C-16), 41.26(C-17), 55.10(C-18), 80.12(C-19), 42.50(C-20), 27.06(C-21), 39.47(C-22), 29.58(C-23), 22.44(C-24), 16.60(C-25), 17.54(C-26), 24.71(C-27), 29.23(C-29), 16.87(C-30)。这与文献（Pathak et al.，2004）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为2α​, 3α​, 19α​-三羟基-28-去甲乌苏-12-烯。
​化合物2  ​ 白色粉末，分子式为 C30​H48​O5​。1​H NMR(500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.30(1H, t, J​=3.5 Hz, H-12), 3.93(2H, ddd, J​=12.0, 4.0, 2.9 Hz, H-2, H-3), 1.35(3H, s, H-27), 1.20(3H, s, H-26), 0.99(6H, s, H-23, H-24), 0.93(3H, d, J​=6.0 Hz, H-30), 0.87(3H, s, H-25), 0.80(3H, s, H-29)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 39.29(C-1), 67.00(C-2), 73.48(C-3), 39.21(C-4), 54.98(C-5), 19.12(C-6), 33.91(C-7), 42.57(C-8), 42.92(C-9), 38.91(C-10), 24.75(C-11), 129.11(C-12), 140.00(C-13), 42.32(C-14), 27.17(C-15), 26.49(C-16), 41.09(C-17), 54.98(C-18), 79.95(C-19), 42.57(C-20), 26.92(C-21), 39.29(C-22), 29.44(C-23), 22.28(C-24), 16.44(C-25), 17.42(C-26), 24.54(C-27), 180.63(C-28), 29.07(C-29), 16.70(C-30)。这与文献（刘普等，2006）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为蔷薇酸。
​化合物3​   白色粉末，分子式为 C30​H48​O6​。1​H NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.29(1H, t, J​=3.8 Hz, H-12), 3.64(1H, dd, J​=9.6, 3.3 Hz, H-3), 1.42(1H, d, J​=6.2 Hz, H-18), 1.36(3H, s, H-27), 1.20(3H, s, H-26), 1.01(3H, s, H-23), 0.97(3H, s, H-24), 0.93(3H, d, J​=6.7 Hz, H-30), 0.89(3H, s, H-25), 0.80(3H, s, H-29)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 81.27(C-1), 71.84(C-2), 73.58(C-3), 38.95(C-4), 54.97(C-5), 19.43(C-6), 34.20(C-7), 43.06(C-8), 44.35(C-9), 42.54(C-10), 24.93(C-11), 130.67(C-12), 138.84(C-13), 41.81(C-14), 29.08(C-15), 27.05(C-16), 38.91(C-17), 54.97(C-18), 80.70(C-19), 42.54(C-20), 27.29(C-21), 39.01(C-22), 29.66(C-23), 22.37(C-24), 17.74(C-25), 19.43(C-26), 26.63(C-27), 182.28(C-28), 28.27(C-29), 12.94(C-30)。这与文献（Yong et al.，2015）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为1α​, 2β​, 3β​, 19α​-四羟基乌苏-12-烯-28-酸。
​化合物4​   白色粉末，分子式为 C30​H48​O6​。1​H NMR(500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.31(1H, t, J​=3.4 Hz, H-12), 3.88(1H, s, H-2), 3.61(1H, d, J​=2.7 Hz, H-3), 3.55(1H, d, J​=10.8 Hz, H-23a), 3.40(1H, d, J​=11.0 Hz, H-23b), 2.58(1H, td, J​=13.2, 4.7 Hz, H-18), 2.51(1H, s, H-19), 1.36(3H, s, H-27), 1.20(3H, s, H-26), 1.02(3H, d, J​=4.4 Hz, H-24), 0.94(3H, d, J​=6.6 Hz, H-30), 0.80(6H, d, J​=7.8 Hz, H-25, H-29)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 39.14(C-1), 67.25(C-2), 73.62(C-3), 39.05(C-4), 55.13(C-5), 19.11(C-6), 33.70(C-7), 42.75(C-8), 44.19(C-9), 42.52(C-10), 24.92(C-11), 129.28(C-12), 140.08(C-13), 42.21(C-14), 27.31(C-15), 26.62(C-16), 41.14(C-17), 55.13(C-18), 78.76(C-19), 43.10(C-20), 27.08(C-21), 39.14(C-22), 71.33(C-23), 29.58(C-24), 16.60(C-25), 17.58(C-26), 24.73(C-27), 182.02(C-28), 29.58(C-29), 17.23(C-30)。这与文献（刘普等，2006）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为2α​, 3α​, 19α​, 23-四羟基乌苏-12-烯-28-酸。
​化合物5​   白色粉末，分子式为 C30​H48​O6​。1​H NMR(500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.30(1H, t, J​=3.7 Hz, H-12), 3.70(1H, td, J​=10.6, 4.7 Hz, H-3β), 3.51(1H, d, J​=11.1 Hz, H-23a), 3.27(1H, d, J​=11.0 Hz, H-23b), 2.57(1H, td, J​=13.4, 4.7 Hz, H-18), 2.51(1H, s, H-19), 1.20(3H, s, H-27), 1.03(3H, d, J​=4.6 Hz, H-30), 1.00~0.88(6H, m, H-29, H-26), 0.79(3H, d, J​=14.2 Hz, H-24), 0.70(3H, s, H-25)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 39.53(C-1), 73.95(C-2), 78.66(C-3), 39.38(C-4), 55.46(C-5, C-18), 19.57(C-6), 33.90(C-7), 43.08(C-8), 48.25(C-9), 39.35(C-10), 24.93(C-11), 129.56(C-12), 140.53(C-13), 43.43(C-14), 29.93(C-15), 27.65(C-16), 48.58(C-17), 82.84(C-19), 44.47(C-20), 27.42(C-21), 38.95(C-22), 70.05(C-23), 14.20(C-24), 17.85(C-25), 17.90(C-26), 25.22(C-27), 182.00(C-28), 29.02(C-29), 16.94(C-30)。这与文献（赵晶等，2008）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为2α​, 3β​, 19α​, 23-四羟基乌苏-12-烯-28-酸。
​化合物6​   黄色粉末，分子式为 C36​H58​O11​。1​H NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.24~5.19(1H, m, H-12), 5.14(1H, d, J​=8.1 Hz, H-1′), 3.57(2H, dd, J​=11.5, 4.8 Hz, H-23a, H-23b), 1.26(3H, s, CH3​), 1.07(3H, s, CH3​), 0.89(3H, s, CH3​), 0.82(3H, d, J​=3.1 Hz, H-29), 0.62(3H, d, J​=15.1 Hz, H-30), 0.52(3H, s, CH3​)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 39.53(C-1), 69.80(C-2), 78.67(C-3), 43.94(C-4), 56.50(C-5), 19.43(C-6), 33.12(C-7), 41.25(C-8), 51.63(C-9), 38.95(C-10), 24.93(C-11), 129.56(C-12), 140.08(C-13), 46.43(C-14), 25.65(C-15), 27.65(C-16), 50.36(C-17), 55.19(C-18), 84.76(C-19), 50.33(C-20), 27.42(C-21), 38.95(C-22), 80.81(C-23), 22.88(C-24), 17.90(C-25), 17.85(C-26), 25.40(C-27), 184.73(C-28), 35.56(C-29), 16.94(C-30), 103.22(C-1′), 76.59(C-2′), 86.74(C-3′), 85.87(C-4′), 81.41(C-5′), 62.34(C-6′)。这与文献（Li et al.，2009）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为刺梨苷F1。
​化合物7​   白色粉末，分子式为C30​H48​O6​。1​H NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.19(1H, t, J​=3.7 Hz, H-12), 3.64~3.55(1H, m, H-3), 3.41(1H, d, J​=11.1 Hz, H-23a), 3.26(1H, d, J​=9.5 Hz, H-2), 3.17(1H, d, J​=11.0 Hz, H-23b), 2.41(1H, s, H-18), 1.25(3H, s, CH3​), 1.10(3H, s, CH3​), 0.93(3H, d, J​=4.6 Hz, H-30), 0.83(3H, d, J​=6.6 Hz, H-29), 0.70(3H, s, CH3​), 0.60(3H, s, CH3​)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 39.04(C-1), 73.60(C-2), 78.28(C-3), 39.00(C-4), 55.11(C-5), 19.22(C-6), 33.55(C-7), 42.73(C-8), 48.21(C-9), 39.00(C-10), 24.88(C-11), 129.21(C-12), 140.19(C-13), 43.09(C-14), 27.30(C-15), 26.61(C-16), 47.90(C-17), 55.11(C-18), 69.71(C-19), 44.13(C-20), 27.07(C-21), 41.07(C-22), 66.38(C-23), 13.86(C-24), 16.60(C-25), 17.50(C-26), 24.76(C-27), 182.44(C-28), 29.59(C-29), 17.55(C-30)。这与文献（Zhou et al.，1992）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为hyptaic acid B。
​化合物8​   黄色粉末，分子式为 C30​H26​O13​。1​H NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​: 8.04~7.96(2H, m, H-2′, H-6′), 7.40(1H, d, J​=15.9 Hz, H-7″), 7.30(2H, d, J​=8.5 Hz, H-3″, H-5″), 6.80(4H, dd, J​=11.0, 8.5 Hz, H-3′, H-5′, H-2″, H-6″), 6.30(1H, s, H-8), 6.14~6.02(2H, m, H-6, H-8″), 5.23(1H, d, J​=7.5 Hz, H-1''')。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 158.24(C-2), 135.01(C-3), 179.18(C-4), 162.74(C-5), 99.95(C-6), 166.08(C-7), 94.72(C-8), 159.10(C-9), 105.33(C-10), 122.54(C-1′), 132.02(C-2′), 116.61(C-3′), 161.33(C-4′), 116.61(C-5′), 132.02(C-6′), 103.84(C-1″), 75.53(C-2″), 77.82(C-3″), 71.53(C-4″), 75.61(C-5″), 64.13(C-6″), 126.89(C-1'''), 131.00(C-2'''), 116.85(C-3'''), 161.01(C-4'''), 116.85(C-5'''), 131.00(C-6'''), 146.38(C-7'''), 114.54(C-8'''), 168.62(C-9''')。这与文献（Chen et al.，2009）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为银锻苷。
​化合物9​   白色粉末，分子式为 C37​H62​O6​。1​H NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.33(1H, d, J​=5.5 Hz, H-5), 4.37(1H, d, J​=7.8 Hz, H-1′), 3.81(1H, dd, J​=10.9, 2.9 Hz, H-6′a), 3.70(1H, dd, J​=13.0, 5.0 Hz, H-6′b), 0.98(3H, s, CH3​), 0.89(3H, d, J​=6.4 Hz, CH3​), 0.82(3H, d, J​=7.5 Hz, CH3​), 0.81~0.79(3H, m, CH3​), 0.78(3H, d, J​=6.8 Hz, CH3​), 0.66(3H, s, CH3​)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 37.69(C-1), 30.06(C-2), 77.00(C-3), 39.05(C-4), 40.20(C-5), 29.97(C-6), 28.62(C-7), 34.35(C-8), 50.66(C-9), 36.55(C-10), 21.46(C-11), 32.32(C-12), 42.73(C-13), 56.48(C-14), 24.65(C-15), 26.45(C-16), 57.20(C-17), 12.15(C-18), 19.99(C-19), 46.31(C-20), 19.22(C-21), 122.44(C-22), 140.80(C-23), 23.44(C-24), 29.56(C-25), 19.57(C-26), 19.03(C-27), 101.57(C-1′), 74.04(C-2′), 76.42(C-3′), 70.72(C-4′), 77.00(C-5′), 62.21(C-6′)。这与文献（van Khany et al.，2019）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为知母皂苷B。
​化合物10​   黄色油状，分子式为 C17​H18​O6​。1​H NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​: 7.59(1H, s, H-2), 7.53(1H, s, H-6′), 6.89(1H, s, H-5), 6.73(1H, s, H-5′), 4.74(1H, s, H-8), 4.23(1H, s, H-7), 3.60~3.57(2H, m, H-9), 3.51(3H, s, 3-OCH3​), 3.51(3H, s, 3′-OCH3​)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 122.54(C-1), 112.73(C-2), 56.44（C-3）, 147.30(C-4), 116.61(C-5), 130.48(C-6), 199.91(C-7), 65.92(C-8), 72.85(C-9), 126.01(C-1′), 131.20(C-2′), 145.95(C-3′), 153.26(C-4′), 113.07(C-5′), 116.89(C-6′), 56.72(3-OCH3​), 56.54(3′-OCH3​)。这与文献（李怡欢等，2024）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为楝叶吴萸素B。
​化合物11  ​ 黄色粉末，分子式为 C15​H12​O7​。1​H NMR(500 MHz, CD3​OD) δ​: 6.97(1H, d, J​=2.0 Hz, H-2′), 6.85(1H, dd, J​=8.1, 2.1 Hz, H-6′), 6.81(1H, d, J​=8.1 Hz, H-5′), 5.91(2H, dd, J​=16.8, 2.1 Hz, H-6, H-8), 4.51(1H, d, J​=11.4 Hz, H-2)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 85.47(C-2), 74.02(C-3), 198.73(C-4), 169.23(C-5), 97.68(C-6), 165.68(C-7), 96.65(C-8), 164.87(C-9), 102.14(C-10), 130.22(C-1′), 116.41(C-2′), 147.49(C-3′), 146.67(C-4′), 116.21(C-5′), 121.23(C-6′)。这与文献（彭中灿等，2021）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为二氢槲皮素。
​化合物12​   淡黄色油状物，分子式为 C12​H21​N3​O2​。1​H NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​: 8.09(1H, s, H-5), 4.32~4.20(2H, m, H-7), 0.95(3H, t, J​=7.5 Hz, H-15), 0.91~0.87(3H, m, H-14)。13​C NMR(126 MHz, CDCl3​) δ​: 165.87(C-1′), 134.14(C-3), 129.38(C-5), 67.68(C-7), 38.81(C-8), 30.47(C-9), 29.59(C-10), 28.88(C-11), 23.88(C-12), 22.85(C-13), 13.92(C-14), 10.98(C-15)。这与文献（李小辉等，2022）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为曲霉三唑A。
​化合物13​   无色油状物，分子式为 C19​H36​O2​。1​H NMR(500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.34(2H, td, J​=5.0, 1.2 Hz, H-9, H-10), 3.65(3H, s, -OCH3​), 2.31(2H, t, J​=7.4 Hz, H-2), 2.04(4H, dq, J​=12.6, 6.7 Hz, H-8, H-11), 1.60(2H, t, J​=7.3 Hz, H-3), 1.33~1.28(16H, m, -(CH2​)n-), 0.90(3H, t, J​=6.9 Hz, H-18)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 176.01(C-1), 34.81(C-2), 26.02(C-3), 30.24(C-4), 30.34(C-5), 30.44(C-6), 30.60(C-7), 28.12(C-8), 130.90(C-9), 130.78(C-10), 28.09(C-11), 30.76(C-12), 30.84(C-13), 30.17(C-14), 30.60(C-15), 33.06(C-16), 23.73(C-17), 14.43(C-18), 51.95(-OCH3​)。这与文献（杨孟妮等，2016）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为反式油酸甲酯。
​化合物14​   无色油状，分子式为 C18​H34​O2​。1​H NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​: 5.34(2H, t, J​=4.8 Hz, H-9, H-10), 2.21(2H, t, J​=7.6 Hz, H-2), 2.01(4H, p, J​=6.0 Hz, H-8, H-11), 1.43(2H, m, H-3), 1.26(20H, m, -(CH2​)n-), 0.88(3H, t, J​=7.0 Hz, H-18)。13​C NMR(126 MHz, CDCl3​) δ​: 167.88(C-1), 36.07(C-2), 25.68(C-3), 29.92(C-4), 29.84(C-5), 29.74(C-6), 29.67(C-7), 27.86(C-8), 131.06(C-9), 130.06(C-10), 27.36(C-11), 29.62(C-12), 29.46(C-13), 29.38(C-14), 29.38(C-15), 32.05(C-16), 22.83(C-17), 14.26(C-18)。这与文献（姬志强等，2015）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为油酸。
​化合物15​   白色晶状固体，分子式为 C20​H38​O2​。1​H NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​: 5.34(2H, t, J​=4.5 Hz, H-10, H-11), 2.25~2.15(2H, m, H-2), 2.00(4H, q, J​=6.9 Hz, H-9, H-12), 1.62(2H, t, J​=7.3 Hz, H-3), 1.25(24H, s, H-4-H-8, H-13-H-17), 0.87(3H, s, H-20)。13​C NMR(126 MHz, CDCl3​) δ​: 179.50(C-1), 36.09(C-2), 25.66(C-3), 29.90(C-4), 29.83(C-5), 29.79(C-6), 29.68(C-7), 29.45(C-8), 27.34(C-9), 130.04(C-10), 130.01(C-11), 27.34(C-12), 29.61(C-13), 29.65(C-14), 29.68(C-15), 29.49(C-16), 30.43(C-17), 32.06(C-18), 22.82(C-19), 14.25(C-20)。这与文献（Duquesno et al.，2008；邹惠亮等，2016）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为10-二十碳烯酸。
​化合物16​   白色针状粉末，分子式为 C22​H43​NO。1​H NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.34(2H, m, J​=4.4, 1.2 Hz, H-13, H-14), 2.19(2H, m, H-2), 2.03(4H, q, J​=6.3 Hz, H-12, H-15), 1.60(2H, s, H-3), 1.30(28H, d, J​=5.0 Hz, H-4-H-11, H-16–H-21), 0.91(3H, d, J​=3.7 Hz, H-22)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 179.02(C-1), 36.37(C-2), 26.75(C-3), 30.66(C-4), 30.58(C-5), 30.58(C-6), 30.58(C-7), 30.30(C-8), 30.30(C-9), 30.30(C-10), 30.16(C-11), 27.93(C-12), 130.68(C-13, C-14), 27.93(C-15), 30.16(C-16), 30.30(C-17), 30.30(C-18), 30.58(C-19), 32.90(C-20), 23.57(C-21), 14.27(C-22)。这与文献（李坤平等，2014）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为芥酸酰胺。
​化合物17​   白色粉末，分子式为 C18​H35​NO。1​H NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.34(2H, t, J​=4.6 Hz, H-9, H-10), 2.19(2H, t, J​=7.6 Hz, H-2), 2.03(4H, q, J​=6.9 Hz, H-8, H-11), 1.60(2H, t, J​=7.5 Hz, H-3), 1.30(20H, d, J​=5.6 Hz, H-4-H-7, H-12-H-17), 0.91(3H, d, J​=6.9 Hz, H-18)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 179.34(C-1), 36.55(C-2), 26.93(C-3), 30.84(C-4), 30.76(C-5), 30.66(C-6), 30.64(C-7), 28.11(C-8), 130.85(C-9, C-10), 28.11(C-11), 30.61(C-12), 30.48(C-13), 30.34(C-14), 30.66(C-15), 33.08(C-16), 23.75(C-17), 14.46(C-18)。这与文献（Xie et al.，2017）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为油酸酰胺。
​化合物18​   白色泡沫状粉末，分子式为C25​H50​N6​O15​。1​H NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​: 5.12(1H, d, J​=3.8 Hz, H-1″), 4.49(1H, d, J​=7.8 Hz, H-1′), 4.01(1H, m, CH), 3.85(1H, d, J​=2.1 Hz, CH), 3.80~3.76(3H, m, CH×3), 3.72~3.69(1H, m, CH), 3.67(1H, q, J​=2.3 Hz, CH), 3.66~3.63(2H, m, CH×2), 3.51~3.47(1H,m, CH), 3.37(2H, td, J​=9.4, 2.9 Hz, CH×2), 3.15(1H, dd, J​=9.1, 7.8 Hz, CH)。13​C NMR(126 MHz, CD3​OD) δ​: 97.40(C-1), 75.80(C-2), 77.30(C-3), 70.30(C-4), 77.30(C-5), 61.50(C-6), 92.70(C-7), 72.40(C-8), 72.80(C-9), 70.40(C-10), 71.00(C-11), 61.70(C-12), 98.50(C-13), 69.60(C-14), 73.50(C-15), 83.40(C-16), 63.40(C-17), 63.40(C-18), 102.40(C-19), 76.20(C-20), 82.40(C-21), 57.00(C-22), 82.40(C-23), 64.80(C-24), 63.40(C-25)。这与文献（Aboussafy et al.，2019；Jega et al.，2021）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为microphyllose A。
图 1 化合物1-19的结构式
Fig. 1 Structures of compounds 1-19
​化合物19​   黄色油状，分子式为 C12​H22​O11​。1​H NMR (500 MHz, DMSO) δ​: 4.84(6H, d, J​=7.2 Hz, H-1, H-1′), 4.26(2H, s, H-6, H-6′), 3.54(1H, d, J​=4.6 Hz, CH), 3.13~3.01(5H, m, CH), 2.88(1H, t, J​=8.4 Hz, CH)。13​C NMR(126 MHz, DMSO) δ​: 96.93(C-1), 70.61(C-2), 72.39(C-3), 70.32(C-4), 71.99(C-5), 63.09(C-6), 92.25(C-1′), 76.78(C-2′), 73.10(C-3′), 74.87(C-5′), 61.23(C-6′)。这与文献（王宁辉，2015）中的数据基本一致，故鉴定该化合物为inotodisaccharide。
2.2 抗炎活性研究
本实验对所获的三萜类化合物进行了抗细胞毒活性研究，使用CCK8法测试化合物对RAW264.7细胞存活率的影响，结果表明化合物在给药量≤50 μmol·L-1时，所有化合物均无显著细胞毒性。因此，选择50 μmol·L-1为最大无毒浓度并进行后续实验。
对7个三萜类化合物（1-7）进行抗炎活性评价，结果见表1。除化合物1以外，其余6个化合物均能显著抑制LPS诱导NO生成。其中，化合物4、化合物5和化合物6的IC50分别为（6.76±1.02）、（11.36±0.39）、（11.53±2.08）μmol·L-1，具有显著的抗炎活性。化合物4、化合物5的IC50值与阳性对照氨基胍盐酸盐的相近，也有着明显的抗炎活性。化合物7的IC50值为（22.53±2.55）μmol·L-1，具有较好的抗炎活性。本实验发现金樱子果实中极大部分的三萜类化合物均具有较为明显的抗炎活性，为该果实的药效物质基础与作用机制研究提供了依据。
3 讨论与结论
金樱子为传统涩肠止泻中药，历代本草记载其外用可消肿解毒，现代研究证实其粗提物具有抗炎活性，但活性单体的物质基础尚不清楚。本研究从金樱子果实中共分离鉴定出19个化合物，其中10个为首次在蔷薇属中报道。抗炎活性评价显示，除化合物1以外，其余6个三萜类均能显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO生成，并且化合物4、化合物5、化合物6的活性优于或接近阳性对照氨基胍盐酸盐。本研究结果明确了三萜类成分是金樱子果实中抗炎活性的主要物质基础，填补了粗提物研究中单体活性成分不明的空白。值得注意的是，化合物1（2α, 3α, 19α-三羟基-28-去甲乌苏-12-烯）在50 μmol·L-1浓度下未呈现明显NO抑制活性。与其他活性三萜相比，其结构差异在于C-28位为去羧基结构，提示三萜的C-28羧基可能对维持抗炎活性具有重要作用，缺失该基团会导致活性丧失。已有研究也表明，乌苏烷型三萜酸的抗炎作用往往依赖于C-28羧基与靶点的结合（Eyong et al.，2015）。这一发现为后续基于金樱子三萜的结构优化提供了方向，但其具体机制仍需深入研究。
表 1 化合物的抗炎活性结果
Table 1 Anti-inflammatory activity results of compounds
本研究首次报道了金樱子果实中多个三萜单体的抗炎活性，结果与金樱子粗提物及总三萜部位的抗炎药效报道一致，进一步验证了三萜类是金樱子抗炎作用的关键活性组分。本研究为金樱子的传统抗炎功效提供了现代科学依据，也为开发基于金樱子三萜的天然抗炎产品奠定了基础。
图 1 化合物1-19的结构式
Fig. 1 Structures of compounds 1-19
表 1 化合物的抗炎活性结果
Table 1 Anti-inflammatory activity results of compounds
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