Page 72 - 《广西植物》2020年第12期

ϟ԰ 期 吴 秋 丽 等 ᧥ 不同产地浙贝母生物碱含量及其合成相关基因表达研究 ϟ Ꭾ ጢ Ꭾ
开化和丽水莲都ᖔ浙北杭州淳安ܦ临安昌化和余杭ᖔ
ϟজ 材料与方法 浙中金华婺城和东阳ᖔ浙江省临近省份江苏南通和
安徽六安ᤥ 不同产地气象和土壤类型基本情况见
ϓॹϓ 材料 表 ϟᤥ 将新鲜采集的一部分材料清洗干净ᖔ切片ᖔ置

植物材料᧥以 ϟϟ 个不同产地的浙贝 ϟ 号ྉ浙贝 于烘箱中低温烘干至恒重ᖔ研磨成粉ᖔ过 ᤃጢ 目筛后
母狭叶品种ɯ盛花期 ሕ 个组织部位ྉ茎ܦ叶和鳞茎ɯ 用于生物碱含量测定ଫ另一部分材料经 ᧕ጶ۪ऊ 处理
以及成熟期鳞茎为材料ᖔ于 ԰ԡϟऐ 年 ሕ 月中旬ܦጢ 月 水洗涤并分装ᖔ放入液氮中速冻后贮存于ͱऐԡ ቩ 超
中旬采自浙东宁波章水ᖔ浙南温州瓯海ᖔ浙西衢州 低温冰箱以用于后续基因表达量的测定ᤥ

表 ϓই 不同产地气象和土壤类型基本情况
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ାᑕ༁ᔽዹ ༁ᔽᡷࣼᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ቝᔀᡷᔀᆍʢᆍ᤟ᆍ੫ᔽዹᑕ᤟ ᑕႿʛ ༁ᆍᔽ᤟ ᡷᢃᡱᔀ༁ ᔽႿ ʛᔽ஦஦ᔀʢᔀႿᡷ ᡱʢᆍʛࣼዹᔽႿ੫ ᑕʢᔀᑕ༁
产地 宁波 温州 衢州 丽水 杭州 金华 南通 六安
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年平均日照时数 ϟ ᎮँᎮ঎Ꭾ ϟ Ꭾԡ࿗঎Ꭾ ϟ ऐԡँ঎ጢ ϟ ᤃऐϟ঎ሕ ϟ Ꭾጢᤃ঎ሕ ϟ ऐऐᤃ঎ँ ԰ ԡऐँ঎԰ ԰ ԰ϟᎮ঎ጢ
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年平均气温 ϟᤃ঎ጢ ϟऐ঎ϟ ϟᎮ঎ሕ ϟऐ঎ϟ ϟᤃ঎ጢ ϟᎮ঎ሕ ϟጢ঎ँ ϟጢ঎ᤃ
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年降水量 ϟጢԡሕ ϟᎮሕ࿗঎Ꭾ ϟᤃऐጢ঎ጢ ϟሕऐϟ঎ሕ ϟ࿗ሕጢ ϟ࿗ሕᤃ঎ऐ ϟϟᎮሕ঎԰ ϟϟ࿗ጢ
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土壤类型 红棕壤 红棕壤 红棕壤 红棕壤 红棕壤 红黄壤 黄棕壤 黄棕壤
୩ᆍᔽ᤟ ᡷᢃᡱᔀ ኏ᔀʛ᥋ᤦʢᆍऔႿ ኏ᔀʛ᥋ᤦʢᆍऔႿ ኏ᔀʛ᥋ᤦʢᆍऔႿ ኏ᔀʛ᥋ᤦʢᆍऔႿ ኏ᔀʛ᥋ᤦʢᆍऔႿ ኏ᔀʛ᥋ᢃᔀ᤟᤟ᆍऔ ɟᔀ᤟᤟ᆍऔ᥋ᤦʢᆍऔႿ ɟᔀ᤟᤟ᆍऔ᥋ᤦʢᆍऔႿ
༁ᆍᔽ᤟ ༁ᆍᔽ᤟ ༁ᆍᔽ᤟ ༁ᆍᔽ᤟ ༁ᆍᔽ᤟ ༁ᆍᔽ᤟ ༁ᆍᔽ᤟ ༁ᆍᔽ᤟

জজ 仪器᧥ዶऊ͐В᧧ఋɟ В۪ᓂऊ 系统ྉۼᑕᡷᔀʢ༁ᖔ美国ɯଫ 去溶剂化温度为 ሕԡԡ ቩ ᖔ去溶剂化气流为 ऐԡԡ ᓂኼ
୩ɟશዶ۪ఋ ᥈԰᥋୩ᔽ 质谱仪ྉۼᑕᡷᔀʢ༁ᖔ美国ɯଫऊèᣮँᤃ 荧光 ၤ ᖔ锥孔气流为 ጢԡ ᓂኼၤ ᤥ
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定量 ۪ऊ኏ 仪ྉାᔽᆍ᥋኏ዶ᧕ᖔ美国ɯଫ୩۪͐ 电子分析天平 ϟ঎԰঎ϟ঎԰ 标准曲线绘制জ 分别精密称取对照品贝母
ྉ୩ᑕʢᡷᆍʢᔽࣼ༁ 公司ᖔ德国ɯᤥ 试剂᧥氨水和乙腈为色谱 素甲ԡ঎ԡԡ࿗ ऐ ੫ᖔ贝母素乙ԡ঎ԡԡጢ ԡ ੫ᖔ加甲醇稀释至
纯ଫ标准品贝母素甲ܦ乙购于上海源叶生物科技有 ԰ጢ ቝᓂ 容量瓶中ᖔ再用甲醇稀释成贝母素甲 ँᤃܦ
限公司ଫ۪ऊ኏ 引物由上海生工生物工程有限公司 ࿗ऐܦሕऐ঎࿗ܦϟँ঎԰ܦँ঎ᤃ ቝ੫ኼᓂ ᖔ贝母素乙 ϟԡԡܦጢԡܦ࿗ԡܦ
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合成ᤥ ԰ԡܦϟԡ ቝ੫ኼᓂ 的混合对照品溶液ᖔ摇匀后过 ԡ঎԰԰
ϓॹԣ 方法 ဂቝ 微孔过滤器ᖔ备用ᤥ 按ᥥϟ঎԰঎ϟ঎ϟɼ项色谱及质谱
ϟ঎԰঎ϟ В۪ᓂऊ᥋ᥘ୩ 测定不同产地浙贝母不同组织中 条件对混合对照品溶液进行分析ᖔ以对照品质量浓
生物碱含量 度为横坐标ᖔ峰面积为纵坐标ᖔ建立线性回归方程ᤥ

ϟ঎԰঎ ϟ঎ ϟ 色谱及质谱条件 জ 色谱条件᧥ 采用 ϟ঎԰঎ϟ঎ሕ 样品生物碱含量的提取及测定জ 生物碱提
ᗀ 取参照 ᓂࣼᆍ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ྉ԰ԡϟऐɯ方法并将回流法改为摇床
ዶऊ͐В᧧ఋɟ В۪ᓂऊ ାጶ̀ ዶቝᔽʛᔀྉ԰঎ϟ ቝቝ ġ ϟԡԡ ቝቝᖔ
ϟ঎Ꭾ ဂቝɯ色谱柱ᖔ流动相为 ԡ঎ϟᠮ氨水ྉዶɯ ͱԡ঎ϟᠮ乙 震荡法ྉ 条件为温度 ሕ԰ ቩ ଫ时间为 ϟ԰ ၤଫ转速为
᥋ϟ
腈ྉାɯଫ 梯度洗脱 ྉԡ ጲ ϟ঎ԡ ቝᔽႿᖔሕԡᠮ ዶ ܀ ሕԡᠮ ዶଫ ϟ԰ԡ ʢኼቝᔽႿ ɯᤥ 按ᥥϟ঎԰঎ϟ঎ϟɼ 项色谱及质谱条件对
ϟ঎ԡ ጲ ጢ঎ጢ ቝᔽႿᖔሕԡᠮዶ܀ጢᠮዶଫጢ঎ጢ ጲ ጢ঎ऐ ቝᔽႿᖔጢᠮዶ܀ ϟϟ 个产地浙贝 ϟ 号盛花期 ሕ 个组织部位ܦ成熟期
ሕԡᠮዶɯଫ流速为 ԡ঎԰ ቝᓂኼቝᔽႿ ଫ柱温为 ሕԡ ቩ ଫ样品 鳞茎生物碱ྉ 贝母素甲和贝母素乙ɯ 含量进行测
᥋ϟ
进样量为 ԰ဂᓂᤥ 质谱条件᧥采用电喷雾正离子源 定ᖔ每个样重复 ሕ 次ᤥ
ྉጶ୩᧧ ɯ检测模式ᖔ贝母素甲ܦ贝母素乙的离子质荷 ϟ঎԰঎԰ 浙贝母总 ኏શዶ 提取及反转录জ 按照 ዶᔽʛ᤟ᑕᤦ
շ
比ྉቝ ᣰ झɯ 分别为 ࿗ሕ԰঎ሕጢ 和 ࿗ሕԡ঎ሕሕଫ毛细管电压为 ጶዶ୩ɟ༁ᡱᔽႿ ۪᤟ࣼ༁ ऊᆍቝᡱ᤟ᔀ଴ ۪᤟ᑕႿᡷ ኏શዶ ᣽ᔽᡷ 提取浙贝母

ሕ঎ԡ Ҵ჆ᖔ锥孔电压为 ࿗঎ԡ ჆ᖔ离子源温度为 ϟԡጢ ቩ ᖔ 茎ܦ叶ܦ鳞茎的总 ኏શዶᤥ 采用 શᑕႿᆍ᧕ʢᆍᡱఋᥘ ԰ԡԡԡ 分