Page 169 - 《广西植物》2021年第7期
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ϟ ϟ ँ ऐ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
柑橘青霉病具有高效稳定的防治效果ᖔ以其无菌 ϓॹᇺ 内生真菌的鉴定
发酵滤液单独施用 ऐ 和 ጢᤃ ʛ 时ᖔ对柑橘青霉病的 主要采用形态学和分子生物学的方法对内生
᥋ϟ 真菌进行鉴定ᤥ 形态学鉴定主要以不同培养基
防效与 ϟԡԡ ဂ੫ኼቝᓂ 的抑霉唑相当ᤥ۪ᔀႿᑕ ᔀᡷ ᑕ
ྉԡϟᎮɯ从柑橘中筛选获得一株内生真菌 ࣩ᤹ዞᅳʐᅳʗ ྉ۪᧕ዶܦऊᥘዶܦશ᥈ዶɯ对分离得到的内生真菌进行培
༁ᡱ ᓂ᥈ᥘèϟጢ࿗ 产生的挥发性物质对柑橘黑斑病原 养ᖔ观察菌落形态ܦ颜色ܦ边缘形状ܦ生长速率ܦ基
菌菌丝和孢子具有显著抑制活性ᖔ并且能有效控 质颜色等ᖔ以及其显微镜结构特征ྉ 如菌丝有无分
制离体叶片组织病斑形成ᤥ 隔ܦ分支ᖔ分生孢子形态ܦ大小ᖔ产孢结构特征等ɯᖔ
柑橘中含有丰富的内生真菌资源ྉ શᔽዹᆍᔀᡷᡷᔽᖔ 结合β真菌鉴定手册ଭྉ 魏景超ᖔϟँᎮँɯܦ相关文献ܦ
ԡϟँɯᖔ并且不同柑橘品种中内生真菌的组成可能 实验室已知菌种进行鉴定ᤥ 分子鉴定主要通过内
不同ᤥ 任建国ྉԡԡᤃɯ研究广西主要柑橘品种对柑 生真菌的 ʢ᧕શዶ᥋᧧ఋ୩ 序列对其进行鉴定ᤥ 以真菌
橘溃疡病的抗性ᖔ发现无核沙糖桔和温州蜜柑均 通用引物 ᧧ఋ୩ϟྉጢࣕ᥋ఋऊऊ᥈ఋዶ᥈᥈ఋ᥈ዶዶऊऊఋ᥈ऊ᥈᥈᥋ሕࣕɯ
为抗病品种ᤥ 吴思梦ྉԡϟऐɯ 研究发现从抗病品种 和 ᧧ఋ୩࿗ ྉ ጢࣕ᥋ఋऊऊఋऊऊ᥈ऊఋఋዶఋఋ᥈ዶఋዶఋ᥈ऊ᥋ሕࣕɯ 扩增
温州蜜柑中分离的拮抗内生细菌的数量较感病品 菌株 ᧧ఋ୩ 碱基序列ᖔ委托北京六合华大基因科技有
种纽荷尔脐橙多ᖔ且感病品种纽荷尔脐橙中同时 限公司武汉分公司进行检测纯化及测序ᤥ 所获的
存在拮抗细菌和感病协同菌ᤥ 但是ᖔ有关柑橘抗 测序结果与 ᥈ᔀႿାᑕႿҴ 中的序列进行 ାᓂዶ୩ఋ 比对ᖔ
病品种中内生真菌的组成与其对柑橘抗溃疡病菌 选 择相似度最高的菌 株ᖔ 以 ᥘጶ᥈ዶ ᣮ 软件
的作用关系ᖔ以及柑橘抗病品种中的内生真菌能 શᔀᔽ੫ၤᤦᆍʢ᥋ᢼᆍᔽႿᔽႿ੫ྉશȮɯ构建系统发育树ᖔ进行同源性
否产生抑制柑橘溃疡病菌的活性产物等方面的研 分析ᖔ进行自展次数为 ϟ ԡԡԡ 的置信度检测ᖔ根据
究尚未见报道ᤥ 本研究旨在从柑橘抗病品种温州 系统发育树中的组群关系对菌株进行分类ᤥ
蜜柑和沙糖桔中分离纯化并鉴定内生真菌ᖔ明确 ϓॹ 内生真菌的多样性指数统计分析方法
其内生真菌组成ᖔ并通过离体抗菌活性的评估ᖔ探 内生真菌的多样性指数统计分析主要参考徐
究柑橘内生真菌产抗柑橘溃疡病菌活性成分的潜 祥林等ྉԡϟँɯܦऊၤᆍऔʛၤᑕʢᢃ ᪲ ᑕࣼ༁ၤᔽҴྉԡϟጢɯ 的方
力ᖔ为其后期应用于柑橘溃疡病的防治提供依据ᤥ 法ᤥ 具体如下ᤥ
相对频率ྉʢᔀᑕᡷᔽᔀ ʢᔀीࣼᔀႿዹᢃᖔቴÞɯ᧥分离到某种
ϟজ 材料与方法 属内生真菌的菌株数量占分离到的所有总菌株数
量的百分数ᖔ即 ቴÞྉᠮɯ ᢉ ྉ 某种属内生真菌菌株
ϓॹϓ 柑橘样品及柑橘内生真菌的分离
数量 ᣰ 分离到的所有内生真菌总菌株数ɯ ġϟԡԡᤥ
健康柑橘叶片和枝条于 ԡϟᤃ 年 ϟϟ 月ᖔ分别采 多样性指数ྉ ̵ࣕɯ᧥根据 ୩ၤᑕႿႿᆍႿ᥋ۼᔀᔽႿᔀʢ 指数
自广西桂林市柑橘研究所ྉ 温州蜜柑ɯܦ广西桂林 ҧ
公式计算ᖔ即 ̵ࣕ ᢉͱኮۗᔠġႿۗᔠᖔ式中᧥ ҧ 为某种植物
市二塘乡骆家寨ྉ沙糖桔ɯܦ广西梧州市苍梧县ྉ 沙 ᔠ ᢉ ϟ
或组织中内生真菌种类的总数ଫۗᔠ 为某种属内生
糖桔ɯᤥ 每个地点随机选取 ጢ 株健康柑橘植株ྉሕ
年以上株龄ɯᖔ共 ϟጢ 株ᤥ 在柑橘植株上选取 ࿗ 条 真菌的菌株数量占分离到的所有总菌株数量的百
颜色为暗绿色ܦ枝径粗约为 ԡ࿗ ዹቝܦ带有深绿色叶 分数ᤥ
相似性系数ྉࣷɯ是根据 ୩ᆍʢᔀႿ༁ᆍႿ 系数公式计
片的枝条ᖔ用枝剪从枝条基部上方约 ሕዹቝ 处剪断ᖔ
将剪取的枝叶做好标记ᖔ总共采集 ᤃԡ 份样品ᤥ 装 算ᖔ即 ࣷ ᢉ ᢝᣰྉᐹշᤇɯᤥ 式中᧥ᢝ 是两种组织中具有
至保鲜袋中带回实验室ᖔ立即进行内生真菌的分 的相同内生真菌种类数ଫᐹ 是一种组织中内生真菌
离纯化ᤥ 柑橘样品叶片和枝条中的内生真菌分离 的种类数ଫᤇ 是另一组织中内生真菌的种类数ᤥ 相
纯化 参 照 ᓂᆍࣼ ᔀᡷ ᑕ ྉ ԡϟሕ ɯܦ 王利娟和贺新生 似性系数可以比较两种组织之间内生真菌种类组
ྉԡԡᤃɯ的方法ᤥ 成的相似程度ᤥ
ϓॹԣ 柑橘溃疡病菌 ϓॹጇ 内生真菌的发酵培养及粗提物制备
柑橘溃疡病菌为广西师范大学珍稀濒危动植 无菌条件下ᖔ用打孔器ྉ直径 ࿗ቝቝɯ 在已经活
物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室化 化好的菌落边缘处打孔ᖔ取 ሕ 块菌饼接入含有马
学生态实验室于 ԡϟᎮ 年 ϟ 份分离和保存的菌种ᤥ 铃薯葡萄糖液体培养基ྉ ۪᧕ାᖔϟጢԡ ቝᓂɯ 的锥形瓶
