Page 31 - 《广西植物》2022年第5期

ጢ 期 王 利 国 等 ᧥ 两种栽培型广藿香内生真菌群落组成变化 Ꭾ ጢ ጢ
御以及次级代谢产物的合成具有关键调控作用 中随机选取茎枝 ጢ 段ᖔ摘取叶后用水洗净ᖔ茎剪成
ྉȮᔽᑕ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟᤃɯᤥ 广藿香作为广东省道地药材ᖔ 长度 ጢዹቝᖔ 叶剪成 ԰঎ጢ ዹቝ ġ ԰঎ጢ ዹቝ 的组织块ᤥ 组
目前已从牌香筛选出有活性的内生真菌并对其化 织块置于含 Ꭾጢᠮ乙醇的烧杯中浸泡 ሕቝᔽႿܦ无菌水
学成分 ྉ 王沫等ᖔ԰ԡϟᤃᑕɯܦ 抗青枯病 ྉ 谢华蓉等ᖔ 冲洗 ሕ 次后ᖔ置于加入 ఋऔᔀᔀႿ᥋԰ԡ 的 ԡ঎ϟᠮ 升汞浸
԰ԡϟᎮɯܦ抗肿 瘤 ྉ 王沫 等ᖔ԰ԡϟᤃᤦɯܦ 抗逆性 ྉ 吴瑕ᖔ 泡ᖔ茎浸泡 ԰ቝᔽႿᖔ叶浸泡 ሕቝᔽႿᤥ 浸泡期间不断搅
԰ԡϟሕɯ等进行了相关研究ᖔ由于未考虑广藿香栽培 动ᖔ让组织块与杀菌液充分接触ᖔ取出用无菌水冲
型差异以及广藿香生长期不同ᖔ因此分离出的活 洗 ሕ 次ᖔ每次 ԰ቝᔽႿܦ用无菌滤纸吸干水分ᖔ无菌条
性内生真菌差异较大ᤥ 牌香和湛香作为广东省栽 件下将组织块剪成大小约 ԡ঎ጢ ዹቝ ġ ԡ঎ጢ ዹቝ 备用ᤥ
培面积最大的 ԰ 种广藿香ᖔ其成分差异明显ᖔ由于 ϓॹԣ 培养和分离
活性成分形成机理尚未明确ᖔ因此影响了广藿香 分阶段从处理后的组织块中随机选取 ϟ԰ԡ 个
品种的选育ᤥ 广藿香药物成分多属于倍半萜类ᖔ 贴于 ۪᧕ዶ 和利马豆ྉᓂାዶɯ 平板中ᖔᓂାዶ 配置参照
合成过程遵循类异戊二烯代谢途径中的甲羟戊酸 左豫虎ྉ԰ԡԡ࿗ɯ的方法ᤥ 以各组织块正反面滚动或
ྉᥘ჆ዶɯ 途径ᤥ 彭淑萍等 ྉ ԰ԡ԰ϟ ɯ 研究地黄 平铺培养基表面 ԰ቝᔽႿ 后取出为对照ᖔ平板置于 ԰ጢ
ྉቴᓣ၊ቂᐹႥႥᔠᐹ ੖ᤀࣩᡙᔠႥᅳ໧ᐹɯ 茉莉酸合成发现ᖔ丙二烯氧 ቩ 恒温恒湿下暗培养ᖔ隔天观察ᖔ当组织块周围有
化物合酶ྉᑕ᤟᤟ᔀႿᔀ ᆍ଴ᔽʛᔀ ༁ᢃႿᡷၤᑕ༁ᔀᖔ ዶᨃ୩ɯ和 ϟ԰ͱ氧代 菌丝长出时ᖔ将其挑出培养ᖔ单孢分离纯化ᖔ纯化
植二烯 酸 还 原 酶 ྉ ϟ ԰᥋ᆍ଴ᆍᡱၤᢃᡷᆍʛᔽᔀႿᆍᑕᡷᔀ ʢᔀʛࣼዹᡷᑕ༁ᔀᖔ 后的菌株编号后接种于试管中ᖔ԰ ጲ ጢ ቩ 下冷藏保
ᨃ۪኏ɯ基因的表达受内生真菌调控ᖔ不同器官基因 存ᖔ用于菌株的分类鉴定ᤥ 实验重复 ሕ 次ᤥ
表达量不同ᤥ 前期中药种质资源与分子鉴定研究 ϓॹᇺ 内生真菌鉴定

团队 ྉ۪᧧ɯ 对广东省和云 南 省 阳 春 砂 ྉ ዛቂᅳቂࣩቂ 按照魏景超ྉϟँᎮँɯ的β真菌鉴定手册ଭ进行形
צᔠᤀᤀᅳ໧ࣩቂɯ内生真菌多样性研究发现ᖔ生长环境影响 态学鉴定ᤥ 形态学鉴定主要包括菌落形态ܦ菌丝
着两地阳春砂内生真菌的群落组成ᖔ推断出ᥥ 土壤 特征ܦ分生孢子梗形态ܦ孢子形态ܦ产孢结构及产
环境ͱ内生真菌定殖共生ͱ宿主成分积累ɼ 形成模 孢方式等ᤥ 不产孢的菌株参考 ୩ࣼᡷᡷᆍႿྉϟँऐԡɯ 的方
式ྉ肖晶晶等ᖔ԰ԡ԰ԡɯᤥ 牌香和湛香因长期种植于 法ᖔ首先进行促孢培养ᖔ产孢后按上述方法进行鉴
不同地理区域ᖔ其外观形态及内生真菌群落组成 定ᤥ 分子鉴定参考 ାᑕʢႿᔀᡷᡷ ᪲ ̀ࣼႿᡷᔀʢྉϟँऐᎮɯ和 ጶ᤟᤟ᔽ༁
发生了明显变化ᤥ 为此ᖔ本研究以牌香和湛香为 ྉϟँऐऐɯ的方法确定所获菌株的分类地位ᤥ 总 ᧕શዶ
材料ᖔ探究 ԰ 种广藿香不同生长期内生真菌的群 提取选用改良的十六烷基三甲基溴化铵ྉऊఋዶାɯ
落组成以及种群的动态变化ᖔ为深入了解内生真 法 ྉ 王桂 娥ᖔ ԰ԡϟጢ ɯᖔ 引物对为 ᧧ఋ୩ϟ ྉ ጢࣕ᥋
菌在广藿香药物合成机理中的作用奠定基础ᤥ ఋऊऊ᥈ఋዶ᥈᥈ఋ᥈ዶዶऊऊఋ᥈ऊ᥈᥈᥋ሕࣕɯ 和 ᧧ఋ୩࿗ ྉ ጢࣕ᥋
ఋऊऊఋऊऊ᥈ऊఋఋዶఋఋ᥈ዶఋዶఋ᥈ऊ᥋ሕࣕɯᖔ扩 增 产物用 ϟᠮ
ϟজ 材料与方法 的琼脂糖凝胶电泳检测ᖔ合格后送广州擎科生物
有限公司测序ᤥ 所获序列与 શऊା᧧ 上的已知序列
ϓॹϓ 样品采集与处理 进行比对ᖔ根据序列的相似度和覆盖率ᖔ接合菌株
牌香采自广州市萝岗区ྉ现黄埔区萝岗镇ɯ 广 的形态学特征确定其分类地位ᤥ
州市香雪制药股份有限公司广藿香 ᥈ዶ۪ 基地ଫ湛 ϓॹ྽ 数据处理
香采自湛江市遂溪县乌塘镇广藿香种植合作社ᖔ 定殖率常用来衡量植物中内生真菌的丰度ᖔ
按照苗期ܦ分枝期和成株期 ሕ 个生长阶段采样ᤥ 而相对分离频率ྉᔽ༁ᆍ᤟ᑕᡷᔽᆍႿ ஦ʢᔀीࣼᔀႿዹᢃᖔ ᧧èɯ则用来衡
牌香采样时间为苗期ྉጢ 月 ϟԡ 日ᖔ۪ᣮ᥋ϟɯܦ分枝期 量植物中某一类内生真菌的优势度ᤥ 分别按此公
ྉᎮ 月 ϟ࿗ 日ᖔ۪ᣮ᥋԰ɯܦ成株期ྉऐ 月 ԰ԡ 日ᖔ۪ᣮ᥋ሕɯଫ湛 式计算᧥定殖率 ᢉ ྉ 内生真菌感染的组织块数 ᣰ 总
香采样时间为苗期ྉጢ 月 ԰ϟ 日ᖔԻᣮ᥋ϟɯܦ分枝期ྉᎮ 组织块数ɯ uϟԡԡᠮଫ相对分离频率 ᢉ ྉ 分离到的某
月 ጢ 日ᖔԻᣮ᥋԰ɯ和成株期ྉऐ 月 Ꭾ 日ᖔԻᣮ᥋ሕɯᖔ各采样 属或 种的菌株数 ᣰ 分 离 到的总菌株数ɯ uϟԡԡᠮ
ሕԡ 株ᤥ 采样方式按照 ጢ 点取样法随机挖取健康植 ྉɟࣼᑕႿ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟϟɯᤥ
株带回ᖔ剪短分装于密封袋中冰箱保存ᤥ 材料经 利用 ୩۪୩୩ ԰ϟ঎ ԡ 软 件 的皮尔森相关系数
广州中医药大学贺红教授鉴定为广藿香ᤥ 从材料 ྉ۪ᔀᑕʢ༁ᆍႿ ዹᆍʢʢᔀ᤟ᑕᡷᔽᆍႿ ዹᆍᔀ஦஦ᔽዹᔽᔀႿᡷɯ 法对 ԰ 种广藿香内