Page 80 - 《广西植物》2022年第5期

ऐ ԡ ࿗ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗԰ 卷
჆ᑕϟϟᤃᖔ由贵州大学生命科学学院植物生理实验室 数量 ᣰ 外植体总数量ɯ ġϟԡԡᤥ
提供ᤥ 实验 数 据 采 用 ᥘᔽዹʢᆍ༁ᆍ஦ᡷ ጶ଴ዹᔀ᤟ ԰ԡϟԡ 软件和
ϓॹԣ 实验方法 ୩۪୩୩ ԰԰঎ԡ 软件进行分析ᤥ
ϟ঎԰঎ϟ 毛状根诱导জ 烟草无菌苗的获得᧥参考卢锡
锋ྉ԰ԡ԰ԡɯ的方法ᖔ用 Ꭾጢᠮ酒精和 ϟԡᠮ次氯酸钠消 ԰জ 结果与分析
毒获得烟草无菌苗ᤥ
发根农杆菌 ऊጢऐऊϟ 菌种侵染液制备᧥参考卢 ԣॹϓ 毛状根诱导状况及 ۗࣷቴ 鉴定结果
锡锋ྉ԰ԡ԰ԡɯ 方法进行菌液活化ᖔ用 ᥘ୩ 液体培养 发根农杆菌 ऊጢऐऊϟ 可诱导 શऊऐ԰ 和 ჆ᑕϟϟᤃ 两
基ྉ 含 ϟԡԡ ࣼቝᆍ᤟ኼ ᓂ 乙酰丁香酮ɯ 悬浮ᖔ 即侵染 种烟 草叶片产生毛状根ᤥ 用菌液将 શऊऐ԰ 和
᥋ϟ
菌液ᤥ ჆ᑕϟϟᤃ 两种烟草叶片进行侵染ᖔ一周左右叶片伤口
诱导毛状根᧥参考卢锡锋ྉ԰ԡ԰ԡɯ 的方法ᖔ将经 处出现毛状根ᖔϟ԰ ʛ 后 ऊጢऐऊϟ 对 શऊऐ԰ 和 ჆ᑕϟϟᤃ
预培养 ԰ጲሕ ʛ 的烟草叶片ྉ԰ ዹቝ ġ ԰ዹቝɯ放入悬浮 的毛状根诱导率分别为 ጢ࿗঎࿗ᠮ 和 ԰ԡ঎ጢᠮᖔ一周后
菌液ᖔ侵染约 ऐጲϟԡ ቝᔽႿᖔ置于 ᥘ୩ 培养基上ྉ 培养 ྉϟँ ʛɯ增加到 ऐᎮ঎ሕᠮ和 ሕऐ঎ᤃᠮᤥ 诱导出的毛状根
基中蔗糖浓度为 ሕԡ ੫ኼᓂ ɯᖔ黑暗条件下共培养 分枝多ᖔ生长速度快ᖔ可在无激素培养基上正常生
᥋ϟ
԰ጲ ሕ ʛ 后ᖔ转入抑菌培养基ྉ含 ጢԡԡ ቝ੫ኼᓂ 头孢霉 长ྉ图 ϟɯᤥ
᥋ϟ
素ܦϟԡԡ ቝ੫ኼᓂ 特美汀ɯᖔ诱导出毛状根ᤥ 挑选生 经 ۪ऊ኏ 检测ᖔશऊऐ԰ 和 ჆ᑕϟϟᤃ 两种烟草叶片诱
᥋ϟ
长快ܦ长势旺盛且分枝多的毛状根ᖔ用 ϟᣰ ԰ᥘ୩ 培养 导产生的根均为毛状根ᤥ 两种烟草毛状根的 ᧕શዶ
基进行扩繁ᖔ԰ጢ ቩ 暗培养ᖔ供毛状根优化培养阶段 经 ۪ऊ኏ 扩增后ᖔ均检测出特异性扩增产物ᖔ通过与

选用ᤥ 发根农杆菌 ऊጢऐऊϟ 阳性对照和 ᧕શዶ 分子量标记
ϟ঎԰঎԰ 毛状根的优化培养及生长测定জ۪ऊ኏ 检测᧥ ྉᥘɯ比较ᖔ可确定待测毛状根中均含有 ʗᅳᤀଧ 基因
参考胡霄等ྉ԰ԡϟጢɯ 的方法ᖔ使用 ۪ऊ኏ 对 શऊऐ԰ 和 的片段ྉ 约 Ꭾ࿗ϟ ᤦᡱɯ ྉ 图 ԰ɯᖔ结果表明发根农杆菌

჆ᑕϟϟᤃ 两种烟草叶片诱导产生的根进行检测ᤥ 中 ኏ᔽ 质粒的 ʗᅳᤀଧ 基因已整合入 શऊऐ԰ 与 ჆ᑕϟϟᤃ 细
固体优化培养᧥用 ϟᣰ ԰ᥘ୩ 固体培养基培养诱 胞基因组中ᖔʗᅳᤀଧ 基因表达使两种烟草叶片长出

导得到的毛状根ᖔ其中设置不同烟草品种ྉશऊऐ԰ 毛状根ᤥ
和 ჆ᑕϟϟᤃɯܦ起始分枝数ྉ 起始 ԡ 分枝和 ϟጲ԰ 分 ԣॹԣ 蔗糖浓度对毛状根生长的影响

枝ɯܦ蔗糖浓度ྉԡܦጢܦϟԡܦϟጢܦ԰ԡܦ԰ጢܦሕԡܦሕጢܦ࿗ԡ ੫ኼ ԰঎԰঎ϟ 固体培养基不同蔗糖浓度对毛状根分枝增
᥋ϟ 长的影响জ 结果表明ᖔશऊऐ԰ 和 ჆ᑕϟϟᤃ 诱导的毛状
ᓂ ɯሕ 个因素ᖔ共 ሕᤃ 个处理ᖔ每个处理 ሕ 组ᖔ每组 ሕ
皿ྉ培养皿直径 ँԡ ቝቝɯᤥ 调节培养基 ᡱ̀ 至 ጢ঎ऐ ጲ 根分枝数量随培养时间而增加ᖔ增加量因蔗糖浓
ᤃ঎ԡᖔ培养时毛状根于 ԰ጢ ቩ 暗培养ᖔ每 ԰ 天统计不 度而异ྉ图 ሕᖔ图 ࿗ɯᤥ 蔗糖浓度为 ԡ 和 ጢ੫ኼᓂ 时ᖔ
᥋ϟ
同起始分枝量毛状根在不同处理的分枝数ᖔ累计 શऊऐ԰ 和 ჆ᑕϟϟᤃ 起始 ԡ 分枝和 ϟጲ԰ 分枝的毛状根
԰ԡ ʛᤥ 分枝增加量均为最低ᖔ在培养 ࿗ʛ 后ᖔ分枝数增加
᥋ϟ
液体优化培养᧥在固体优化培养的基础上ᖔ配 到 ऐ 条趋于停止ଫ 蔗 糖浓度为 ϟԡ ੫ ኼ ᓂ 时ᖔ 除
制 ϟᣰ ԰ᥘ୩ 液体培养基ᖔ其中蔗糖浓度分别为 ϟጢܦ શऊऐ԰ 起始 ϟጲ ԰ 分枝的毛状根在培养 ϟ࿗ ʛ 后ᖔ分
԰ԡܦ԰ጢܦሕԡ ੫ኼᓂ ᖔ࿗ 个处理ᖔ每个处理 ሕ 个重复ᖔ调 枝数增加到 ϟऐ 条趋于停止ᖔ其余处理随培养时间
᥋ϟ
节 ᡱ̀ 至 ጢ঎ऐ ጲ ᤃ঎ԡᖔ每 ϟጢԡ ቝᓂ 锥形瓶装入 ऐԡ ቝᓂ 培 而增加ᤥ 蔗糖浓度为 ϟጢܦ԰ԡܦ԰ጢܦሕԡܦሕጢܦ࿗ԡ ੫ኼᓂ ᥋ϟ
养基ᖔ灭菌冷却备用ᤥ 在超净台中取活力较好的 时ᖔ各处理的毛状根分枝数均随培养时间而增加ᖔ
毛状根置于含有不同蔗糖浓度的培养基中ᖔ԰ጢ ቩ 培养 ԰ԡ ʛ 时ᖔ毛状根分枝数均为最大ᖔ其中 શऊऐ԰
᥋ϟ
避光悬浮培养ᖔ转速为 ϟϟԡ ʢኼቝᔽႿ ᤥ 悬浮培养 ሕԡ 起始 ԡ 分枝ᖔ毛状根分枝数分别达到 ϟऐܦ԰Ꭾܦ԰ᤃܦ
ʛ 后ᖔ 迅速用滤纸擦干ᖔ 测得鲜重 ྉ஦ʢᔀ༁ၤ औᔀᔽ੫ၤᡷᖔ ԰ሕܦϟሕܦϟጢᖔ起始 ϟጲ԰ 分枝ᖔ达到 ሕ԰ܦ԰ँܦᎮϟܦጢ࿗ܦ԰࿗ܦ
èۼɯᖔ然后在 ϟԡ԰ ጲ ϟԡጢ ቩ 烘箱中杀青 ϟԡ ቝᔽႿᖔ把烘 ሕϟᤥ ჆ᑕϟϟᤃ 起始 ԡ 分枝ᖔ毛状根分枝数达到 ԰ँܦ
箱温度降低至 Ꭾԡ ጲ ऐԡ ቩ 烘至恒重ᖔ冷却至室温测 ϟ԰ܦ԰ጢܦऐܦऐܦϟᤃᖔ起始 ϟጲ԰ 分枝ᖔ达到 Ꭾጢܦሕԡܦ࿗ԡܦ

其质量为干重ྉʛʢᢃ औᔀᔽ੫ၤᡷᖔ᧕ۼɯᤥ ԰ጢܦ԰࿗ܦ԰ጢᤥ
毛状根诱导率ྉᠮɯ ᢉ ྉ 产生毛状根的外植体 蔗糖浓度显著影响 શऊऐ԰ 和 ჆ᑕϟϟᤃ 诱导的毛