Page 8 - 《广西植物》2022年第7期
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ϟ ԡ ऐ ԡ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ 卷
使用液 ጢቝᓂ 和氯化亚锡试剂 ϟ 滴ᖔ显色 ϟጢ ቝᔽႿ 后 之后在相同的环境条件下正式培养 ϟ࿗ ʛᤥ 在培养
借助紫外分光光度计在 ᤃऐԡ Ⴟቝ 处测定ᤥ 土壤铵 的第 ϟܦ第 Ꭾܦ第 ϟ࿗ ʛ 分别对培养瓶进行土壤取样ᖔ
շ ͱ ᥋ϟ ᥋ϟ
态氮ྉશ̀ ᥋શɯ和硝态氮ྉશᨃ ᥋શɯ测定᧥称取 ጢԡԡ 测定样品无机氮浓度ᤥ ቴႥ 和 ቴቂྉቝ੫ શ Ҵ੫ ኼʛ ɯ
࿗ ሕ
੫ 风干土放入离心管中ᖔ加入 ጢ ቝᓂܦ ቝᆍኼᓂ 的 计算参照王子龙ྉԡϟɯ 的方法ᖔቴႥྉቝ੫ શ Ҵ੫ ኼ
᥋ϟ
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ऊ 振荡浸提ྉϟԡ ʢኼቝᔽႿ ܦ ၤɯᖔ振荡结束后高 ʛ ɯᢉ 培养后硝态氮ྉશᨃ ᥋શɯ 含量 ͱ 培养前硝态
᥋ϟ
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ͱ
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速离心 ऐ ԡԡԡ ʢኼቝᔽႿ ܦϟጢ ቝᔽႿᖔ静置后过滤ᖔ取两 ͱ ᥋ϟ
᥋ϟ
氮ྉશᨃ ᥋શɯ 含量 ᣰ 培养时间ᤥ ቴቂ ྉቝ੫ શ Ҵ੫ ኼ
ሕ
份滤液ᖔ一份加入盐酸ͱ乙二胺四乙酸二钠缓冲液 ʛ ɯᢉ 培养后无机氮ྉશ̀ ᥋શ շ શᨃ ᥋શɯ 含量ͱ培
ͱ
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用于测定 શᨃ ᥋શᖔ另一份加入苯酚钠 ͱ乙二胺四 ࿗ ሕ
ͱ
ሕ շ ͱ
养前无机氮ྉશ̀ ᥋શ շ શᨃ ᥋શɯ含量 ᣰ 培养时间ᤥ
࿗
ሕ
乙酸二钠缓冲液用于测定 શ̀ ᥋શᖔ二者皆采用连
շ
࿗ 通过平行培养实验测定 શ ᨃ 排放速率ᤥ 所有
续 流 动分析仪 ྉ ୩ቝᑕʢᡷऊၤᔀቝ ԡԡᖔ ዶᥘ୩ ᣰ ዶᔽᑕႿዹᔀᖔ
的聚乙烯瓶都覆盖一层无菌透气的有机膜ᖔ以防
᧧ᡷᑕᢃɯ 测定ᤥ 溶解性有机 碳 ྉ ʛᔽ༁༁ᆍᔀʛ ᆍʢ੫ᑕႿᔽዹ
止水分流失和保持通气ᤥ 使用 ۪ᔽዹᑕʢʢᆍ ᥈ጢԡऐ 型气
ዹᑕʢᤦᆍႿᖔ᧕ᨃऊɯ测定᧥称取 ԡԡ ੫ 风干土样于带盖的
体浓度分析仪ྉ۪ᔽዹᑕʢʢᆍ ᥈ԡऐ ጶႿᔽʢᆍႿቝᔀႿᡷᖔ ۪ᔽዹᑕʢʢᆍ
᥋ϟ
ϟጢԡ ቝᓂ 塑料瓶中ᖔ加入 ᤃԡ ቝᓂܦጢ ੫ኼᓂ 偏磷酸钠ᖔ
᧧Ⴟዹᖔ ऊዶᖔ В୩ዶɯ 在培养期的第 ϟܦ第 ሕܦ第 ጢܦ第 Ꭾ
以转速为 ϟԡ ʢኼቝᔽႿ 往复振荡 ϟऐ ၤᖔ振荡悬浮物
᥋ϟ
和第 ϟ࿗ 天测定 શ ᨃ 排放速率ྉ马芬等ᖔԡϟጢɯᤥ 在
放置于 ᤃԡ ቩ 环境下烘干 ࿗ऐ ၤᖔ借助 ఋᨃऊ 自动分析
测量 શ ᨃ 排放速率前密封乙烯培养罐 ϟ ၤᖔશ ᨃ
仪ྉఋᨃऊ᥋ᓂऊ۪̀ᖔ୩ၤᔽቝᑕʛझࣼᖔȮᑕᡱᑕႿɯ 测定 ᧕ᨃऊᤥ 总溶
᥋ϟ ᥋ϟ
排放速率ྉဂ੫ኼҴ੫ ኼʛ ɯ 通过 ϟ ၤ 密闭期中 શ ᨃ
解性 氮 ྉ ᡷᆍᡷᑕ ʛᔽ༁༁ᆍᔀʛ Ⴟᔽᡷʢᆍ੫ᔀႿᖔ ఋ᧕શɯ 测定᧥ 称取
浓度的变化计算ᤥ
ጢԡԡ ੫ 风干土于 ጢԡ ቝᓂ 带盖的塑料瓶中ᖔ加入 ጢ
ϟሕ ሕ 土壤微生物 શè᥈༁ 功能基 因 测 定 জ 利用
᥋ϟ
ቝᓂܦ ϟ ቝᆍ ኼ ᓂ 氯化钾溶液ᖔ 以转速为 ϟऐԡ ʢ ኼ
᥈ᔀᆍऊၤᔽᡱ ጢԡ 功能微阵列系统对微生物 શè᥈༁ 的综
ቝᔽႿ ᖔ往复振荡 ϟၤᖔ振荡悬浮物静置 ϟԡ ቝᔽႿ 后过滤
᥋ϟ
合序列进行测定分析ᖔ该系统是一个分析微生物
于 ጢԡ ቝᓂ 容量瓶中ᖔ取 ऐቝᓂ 滤液加入 ϟԡ ቝᓂ 过硫酸
群落功能基因的高通量平台ᤥ᥈ᔀᆍऊၤᔽᡱ ጢ ԡ 包含
钾氧化剂氧化 ϟጢ ቝᔽႿᖔ采用连续流动自动分析仪测
શጢᎮԡԡԡ 个寡核苷酸探针ᖔ覆盖了 શሕᎮሕ 基因家族
定 ఋ᧕શ 浓度ᤥ 溶解性有机 氮 ྉ ʛᔽ༁༁ᆍᔀʛ ᆍʢ੫ᑕႿᔽዹ
中ϟ࿗࿗ ԡԡԡ多个基因序列ᖔ可以检测比 ी۪ऊ 更广
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Ⴟᔽᡷʢᆍ੫ᔀႿᖔ᧕ᨃશɯ以 ఋ᧕શ ᗵ ྉશ̀ ᥋શ շ શᨃ ᥋શɯ计算
࿗ ሕ
ྉ吉恒宽等ᖔԡԡɯᤥ 称取 ࿗ԡᠮ田间持水量的新鲜土 泛的基因类型ᖔ现已用于不同的微生物功能和生
壤 Ꭾԡԡ ੫ 于 ऐԡ ቝᓂ 的烧杯中ᖔ将烧杯放入真空干燥 物地球化学过程ྉ卢慧等ᖔԡϟऐɯᤥ
器中ᖔ同时放入装满氯仿的同规格烧杯ᖔ采用熏蒸 将每个处理的土壤样品解冻后ᖔ称取 ԡጢԡ ੫ 土
抽真空装置抽为真空状态ᖔ在ͱԡԡᎮ ᥘ۪ᑕ 真空下使 壤样本中使用 ۪ᆍऔᔀʢ୩ᆍᔽ 试剂盒ྉ ᥘᆍାᔽᆍᖔऊᑕʢ༁ᤦᑕʛᖔ
氯仿剧烈沸腾 ጢቝᔽႿᖔ重复该步骤直至氯仿熏蒸完 В୩ዶɯ 进行 ᧕શዶ 提取ᤥ 各样点土壤取 ሕ 组平行样
品ᤥ᧕શዶ 纯度和数量分别使用分光光度计和截面
全ଫ将熏蒸土壤转移至塑料瓶中ᖔ加入 ϟԡԡ ቝᓂܦԡጢ
ቝᆍኼᓂ 硫酸钾溶液振荡ྉጢ ቩܦሕԡԡ ʢኼቝᔽႿ ɯ浸提 读取系统ྉèᓂВᨃ༁ᡷᑕʢ ᨃ۪ఋ᧧ᥘዶᖔ ାᥘ᥈ ᓂᑕᤦᡷᔀዹၤᖔ ȮᔀႿᑕᖔ
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ሕԡ ቝᔽႿᖔ悬浮物过滤ᖔ取两份 ϟԡ ቝᓂ 滤液ᖔ一份加入 ᥈ᔀʢቝᑕႿᢃɯ检测ᤥ 将检测合格的 ᧕શዶ 样品进行荧光
ϟԡ ቝᓂ 六偏磷酸钠溶液用于测定微生物生物量碳 标记ܦ芯片杂交ܦ芯片扫描与成像ྉᓂᔽ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟᎮɯᤥ
ྉቝᔽዹʢᆍᤦᔽᑕ ᤦᔽᆍቝᑕ༁༁ ዹᑕʢᤦᆍႿᖔᥘାऊɯᖔ另一份置于消煮 基因芯片实验每组皆进行 ሕ 个重复ᤥ
管中ᖔ加入 ጢቝᓂ 浓硫酸消化ᖔ回流 ሕၤᖔ用于测定微 基因芯片具体步骤如下ᖔ采用 ऊᢃ᥋ሕ 荧光染料随
生物生物量氮ྉቝᔽዹʢᆍᤦᔽᑕ ᤦᔽᆍቝᑕ༁༁ Ⴟᔽᡷʢᆍ੫ᔀႿᖔᥘାશɯᖔ二 机引物标记ᖔ采用 ͐᧧ዶ 纯化试剂盒ྉ͐᧧ዶ᥈ጶશ ͐В᧧ऊ
者均采用 ఋᨃऊ 自动分析仪测定ᤥ ۪ࣼʢᔽᔽዹᑕᡷᔽᆍႿ ᔽᡷᖔ ᆍዹၤᔀ શᔽቝᤦᔀ᥈ᔀႿ ᧧Ⴟዹᖔ В୩ዶɯ纯化荧
ϟሕ 土壤净氮转化和 શ ᨃ 排放速率测定জ 净氮 光标记后的 ᧕શዶᖔ并将标记成功的 ᧕શዶ 样品采用
转化 分为净氮硝化速率 ྉ ቴႥɯ 和净氮矿化 速 率 干 燥 旋转仪 ྉ ୩ᑕᑕႿᡷ ୩ऊԡԡᖔ ఋၤᔀʢቝᆍ ୩ᑕᑕႿᡷᖔ
ྉቴቂɯᖔ皆通过培养 ϟ࿗ ʛ 的土壤样品测定ᤥ 简而言 ̀ᆍᤦʢᆍᆍҴᖔ શɟᖔ В୩ዶɯ 在 ࿗ጢ ቩ 条件下干燥 ࿗ጢ ቝᔽႿᤥ
之ᖔ每个样本采用 ࿗ԡԡԡ ੫ 土壤置于 ጢԡԡ ቝᓂ 的聚 接着在标记浓缩后的 ᧕શዶ 样品加入 ϟԡ ဂᓂ 杂交缓
乙烯瓶ྉ高 ऐዹቝᖔ直径 ᤃዹቝɯ 中ᖔ保持 ᤃԡᠮ的土壤 冲液ྉ࿗ԡᠮ甲酰胺ܦԡϟᠮ十二烷基硫酸钠ܦϟԡ ဂ੫ 未
含水率ᖔ在 ጢ ቩ 的恒温黑暗培养箱中预培养 ᤃʛᖔ 标记的 ᧕શዶܦ ġ୩୩ऊɯᖔ待完全溶解后 ँԡ ቩ 变性 ጢ
