Page 16 - 《广西植物》2020年第12期
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ϟ 期 刘 华 等 ᧥ 毛梗豨莶乙酸乙酯部位化学成分及生物活性研究 ϟ Ꭾ ԡ ϟ
公司ɯᤥ 试剂᧥ᓂ̀᥋ԡ 羟丙基葡聚糖凝胶ྉ ୩ᔀᡱၤᑕʛᔀ 膏ɯܦା ྉ 石油醚萃取部位ɯܦऊ ྉ 乙酸乙酯萃取部
ᓂ̀᥋ԡᖔ瑞典 ᥈ጶ ̀ᔀᑕᡷၤዹᑕʢ 公司ɯଫ柱色谱及薄层色 位ɯܦ᧕ྉ正丁醇萃取部位ɯ 和 ጶྉ 水部位ɯᤥ 筛选结
谱用硅胶ྉԡԡ 目ᖔ青岛海洋化工厂产品ɯଫᨃ᧕୩ 柱色 果如图 ϟ 所示ᤥ
谱填料ྉጢԡ ဂቝᖔ日本 ɟᥘऊ 公司ɯଫ提取分离用试剂 由图 ϟ 可知ᖔ经 ఋ୩Ի 诱导的 ̀ఋँ 细胞的存活
均为分析纯ᖔ制备 ۪̀ᓂऊ 用甲醇为色谱纯ྉ西陇化 率仅有 ँᠮᖔ诱导成 Ⴟᔀዹʢᆍᡱᡷᆍ༁ᔽ༁ 的 ̀ఋँ 细胞在加
工股份有限公司ɯଫ水为三蒸水ᤥ 入 ାྉ石油醚萃取部位ɯܦ᧕ྉ正丁醇萃取部位ɯ 和 ጶ
ऊᔀ ఋᔽᡷᔀʢ᥋᥈ᆍ 细胞活性 检测试剂盒购于 ྉ水部位ɯ配成的样品后的存活率并未得到改善ᤥ
۪ʢᆍቝᔀ੫ᑕ 公司ᖔ肿瘤坏死因子 ఋશè᥋ም 通过大肠杆菌 但是ᖔዶྉ总浸膏ɯ已将存活率提高到 ࿗ጢᠮᖔऊྉ 乙酸
表达系统表达并纯化得到ଫ促凋亡化 合 物 ୩ቝᑕዹ 乙酯萃取部位ɯ的存活率高达 ᎮᎮᠮᖔ远高于未加样
ቝᔽቝᔀᡷᔽዹ 和 ऊᑕ༁ᡱᑕ༁ᔀ 抑制剂 झ᥋ዶ᧕ቝҴ 由北京生命 品的 ँᠮ 的存活率ᤥ 这 个结果说明毛梗豨莶对
科学研究所化学中心合成ᤥ Ⴟᔀዹʢᆍᡱᡷᆍ༁ᔽ༁ 有抑制作用ᖔ而乙酸乙酯萃取部位为其
ϓॹԣ 方法 活性部位ᤥ
ϟϟ 提取与分离জ 取干燥毛梗豨莶全草 ጢ Ҵ੫ᖔ粉
碎后用 ँጢᠮ乙醇回流提取 ࿗ 次ᖔ每次 ሕၤᤥ 合并提
取液ᖔ减压回收溶剂得总浸膏 ϟ Ҵ੫ᤥ 加蒸馏水混
悬ᖔ依次用石油醚ܦ乙酸乙酯ܦ正丁醇萃取ᖔ得到五
个萃取部位ᖔ分别取各组分浸膏 ԡ ቝ੫ 用 ᧕ᥘ୩ᨃ 配
制成 ԡ ቝ੫ኼቝᓂ 储存液ᖔ编号ᖔ于ͱԡ ቩ 保存ᖔ备
᥋ϟ
筛选用ᤥ
ϟ ऊᔀ ఋᔽᡷᔀʢ᥋᥈ᆍ 细胞活性检测方法জ 三磷酸腺
苷ྉዶʛᔀႿᆍ༁ᔽႿᔀ ఋʢᔽ᥋۪ၤᆍ༁ᡱၤᑕᡷᔀᖔ ዶఋ۪ɯ 是活性细胞新
陈 代 谢的一个指标ᤥऊఋ᥈ 法是通过 ऊᔀ ఋᔽᡷᔀʢ᥋
᥈ᆍ 活细胞检测试剂盒萤光素酶的荧光发光值反 图中数据是使用 ऊᔀ ఋᔽᡷᔀʢ᥋᥈ᆍ 试剂盒测定的 ዶఋ۪ 水平ᖔ反
ఋᥘ
映出 ዶఋ۪ 含量的高低ᖔ直接反映细胞的数量及细 映 ̀ఋँ 细胞诱导坏死后用不同的样品刺激后存活 ϟ ၤ 的
̀ఋँ 细胞数量ᤥ ᦵ᤹᧣ 二甲亚砜ଫ ௴ఋશè᥋ምଫ ୩ቝᑕዹଫ
胞状态ᖔ非常适合高通量筛选ܦ细胞增殖和细胞毒
Ԯ झ᥋ዶ᧕ଫ ዛ 总浸膏ଫ ଧ 石油醚萃取部位ଫ ࣷ 乙酸乙酯
性分析ᤥ 萃取部位ଫ ᦵ 正丁醇萃取部位ଫ ጛ 水萃取部位ᤥ
ϟሕ 活性筛选জ̀ఋँྉ 人直肠癌ɯ 细胞模型ᖔ首 ఋၤᔀ Ⴟࣼቝᤦᔀʢ ᆍ ༁ࣼʢᔽᔽႿ੫ ̀ఋँ ዹᔀ༁ औᔽᡷၤ ᡷၤᔀ ᔽႿʛᔽዹᑕᡷᔀʛ ༁ᡷᔽቝࣼᔽ ᆍʢ
ϟ ၤ औᑕ༁ ʛᔀᡷᔀʢቝᔽႿᔀʛ ᤦᢃ ቝᔀᑕ༁ࣼʢᔽႿ੫ ዶఋ۪ ᔀᔀ༁ ࣼ༁ᔽႿ੫ ᡷၤᔀ ऊᔀ
᥋ϟ
先经 ఋ୩Իྉ 终浓度分别为 ԡ Ⴟ੫ኼቝᓂ ఋશè᥋ምܦϟԡԡ ఋᔽᡷᔀʢ᥋᥈ᆍ Ҵᔽᡷ ᦵ᤹᧣ ᧕ᔽቝᔀᡷၤᢃ༁ࣼᆍᔽʛᔀଫ ௴ఋશè᥋ምଫ ୩ቝᑕዹଫ
Ⴟቝᆍኼቝᓂ ୩ቝᑕዹ 和 ԡ Ⴟቝᆍኼቝᓂ झ᥋ዶ᧕ 诱导过 Ԯ झ᥋ዶ᧕ଫ ዛ ऊʢࣼʛᔀ ᔀᡷʢᑕዹᡷ༁ଫ ଧ ۪ᔀᡷʢᆍᔀࣼቝᔀᡷၤᔀʢ ᔀᡷʢᑕዹᡷଫ
᥋ϟ
᥋ϟ
ࣷ ጶᡷၤᢃ ᑕዹᔀᡷᑕᡷᔀ ᔀᡷʢᑕዹᡷଫ ᦵ શ᥋ᤦࣼᡷᢃ ᑕዹᆍၤᆍ ᔀᡷʢᑕዹᡷଫ ጛ ۼᑕᡷᔀʢ
᥋ϟ
夜后ᖔ产生 Ⴟᔀዹʢᆍᡱᡷᆍ༁ᔽ༁ᤥ 然后ᖔ将配成 ԡ ቝ੫ኼቝᓂ
ᔀᡷʢᑕዹᡷ
的样 品加入到经 ఋ୩Ի 处 理 诱 导 成 细 胞坏死的
图 ϟজ 毛梗豨莶草各萃取部位筛选结果
̀ఋँ 细胞模型中ᖔሕᎮ ቩ 恒温培养箱放置过夜ᤥ 最 èᔽ੫ ϟজ ୩ዹʢᔀᔀႿᔽႿ੫ ʢᔀ༁ࣼᡷ༁ ᆍ ᔀᡷʢᑕዹᡷᔽᆍႿ ᡱᑕʢᡷ༁ ᆍ
后ᖔ用 ऊᔀ ఋᔽᡷᔀʢ᥋᥈ᆍ ྉ ۪ʢᆍቝᔀ੫ᑕɯ 试剂盒检测细胞 ᔠᓣᓣᤇᓣዞҧᔠᐹ ᤀᐹᤇʗᓣዞᓣႥ
ዶఋ۪ 水平以确定细胞存活率ᤥ 细胞存活率高的组
ԣॹԣ 活性部位化学分离结果
分ᖔ说明对 ఋ୩Ի 介导的细胞坏死有抑制作用ᤥ
取活性组分乙酸乙酯萃取部位浸膏ྉᤃԡ ੫ɯᖔ
জ 结果与分析 加水混悬后ᖔ与 ϟԡԡ ੫ 的 ϟԡԡ ጲ ԡԡ 目硅胶干法上
柱ᖔ依次以石油醚 ᨒ 乙酸乙酯 ϟጢ ᨒ ϟ ጲ ԡ ᨒ ϟ 梯度洗
ԣॹϓ 活性部位筛选结果 脱ᤥ 洗脱后的流份经 ఋᓂऊ 合并ᖔ得到 èʢ᥋ᑕ ጲ èʢ᥋ᢼ 等
将 ᧕ᥘ୩ᨃ 配成的 ጢ 份储存液编号为 ዶྉ 总浸 ϟԡ 个组分ᤥ 各组分分别以开放型 ᨃ᧕୩ 柱色谱法
