Page 23 - 《广西植物》2020年第12期

ϟ Ꭾ ԡ ऐ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ԡ 卷
ϟ঎԰঎ጢ 大孔树脂纯化拟草果总黄酮的工艺优化জ 以 ϟ঎԰঎ጢ঎ጢ 洗脱液浓度对树脂解吸率的影响জ 量取
不同类型树脂对拟草果总黄酮的吸附率和解吸率 ሕጢ ቝᓂ 湿体积的 ۪̀᥋԰ԡ 树脂 ࿗ 份ᖔ 分别装柱ଫ 按
为评价指标ᖔ通过静态吸附和解吸附试验筛选出 ϟ঎԰঎ጢ঎ϟ 项配制 ԡ঎ጢ ቝ੫ኼቝᓂ 的上样液 ጢ԰ጢ ቝᓂᖔ以
᥋ϟ
最适合拟草果总黄酮纯化的树脂类型ᖔ并采用单 ࿗ቝᓂኼቝᔽႿ 流速上样ᖔ上样完成后先用 ሕጢԡ ቝᓂ
᥋ϟ
因素试验考察不同的上样条件和洗脱条件ᖔ对拟 ྉϟԡ ା჆ɯ 蒸馏水洗脱ᖔ再以 ԰ቝᓂኼቝᔽႿ 的洗脱流
᥋ϟ
草果总黄酮的纯化工艺进行优选ᤥ 速用浓度分别为 ሕԡᠮܦጢԡᠮܦᎮԡᠮܦँԡᠮ的乙醇依次
ϟ঎԰঎ጢ঎ϟ 静态吸附和解吸附试验筛选最优大孔树 洗脱 ϟԡ ା჆ᤥ 分别收集不同浓度乙醇洗脱下来的
脂জ 取按 ϟ঎԰঎࿗ 项下预处理好的三种大孔树脂ᖔ分 流出液ᖔ浓缩后测定其总黄酮含量并计算解吸率ᤥ
别以蒸馏水洗去乙醇ᖔ抽滤并吸干其表面水分后 ϟ঎԰঎ጢ঎ᤃ 洗脱液流速对树脂吸附率的影响জ 量取
各称取 ሕ঎ԡ ੫ᖔ精密称定ᖔ分别置于 ሕ 个 ԰ጢԡ ቝᓂ 锥 ሕጢ ቝᓂ 的 ۪̀᥋԰ԡ 树脂 ࿗ 份ᖔ分别装柱ଫ取 ԡ঎ጢ ቝ੫ኼ
形瓶中ଫ另取 ϟ঎԰঎ϟ 项下适量母液蒸干ᖔ用水溶解 ቝᓂ 的上样液 ጢ԰ጢ ቝᓂᖔ以 ࿗ቝᓂኼቝᔽႿ 流速上样ᖔ上
᥋ϟ
᥋ϟ
᥋ϟ 样完成后先用 ϟԡ ା჆ 蒸馏水洗脱ᖔ再用 Ꭾԡᠮ乙醇
混匀ᖔ配制成 ԡ঎ँᎮጢ ቝ੫ኼቝᓂ ܦᤃԡ ቝᓂ 的上样液各 ሕ
份ᖔ加入上述装有三种树脂的锥形瓶中ᖔ置全温振 ϟԡ ା჆ 分别以 ϟܦ԰ܦሕܦ࿗ ቝᓂኼቝᔽႿ 的流速洗脱ᖔ分
᥋ϟ
荡培养箱中ᖔሕԡ ቩ ܦϟ԰ԡ ʢኼቝᔽႿ 震荡吸附 ԰࿗ ၤᖔ待 别收集不同洗脱流速下的洗脱液ᖔ测定总黄酮含
᥋ϟ
大孔树脂吸附饱和后ᖔ过滤并吸取一定体积的上 量并计算解吸率ᤥ
清液ᖔ按 ϟ঎԰঎ሕ 项方法测定其总黄酮浓度ᖔ以此推 ϟ঎԰঎ጢ঎Ꭾ 洗脱液用量的工艺考察জ 量取 ሕጢ ቝᓂ 湿体
算树脂对总黄酮的吸附率ଫ过滤后大孔树脂放入 积的 ۪̀᥋԰ԡ 树脂ᖔ湿法装柱ଫ取 ԡ঎ጢ ቝ੫ኼቝᓂ 的上样
᥋ϟ
᥋ϟ
԰ጢԡ ቝᓂ 锥形瓶中ᖔ加入 ጢԡ ቝᓂ ँጢᠮ乙醇溶液进行 液 ጢ԰ጢ ቝᓂᖔ以 ࿗ቝᓂኼቝᔽႿ 流速上样ᖔ蒸馏水洗脱
᥋ϟ
解吸附ᖔ于 ԰࿗ ၤ 后吸取一定体积的乙醇溶液ᖔ测定 后ᖔ以 ጢ԰ጢ ቝᓂܦᎮԡᠮ乙醇和 ԰ቝᓂኼቝᔽႿ 的洗脱流速
其中的总黄酮含量ᖔ计算树脂对总黄酮的解吸率ᤥ 连续洗脱ᖔ分批收集洗脱液ᖔ每 ሕጢ ቝᓂྉϟ ା჆ɯ 为 ϟ
ϟ঎԰঎ጢ঎ ԰ 上样液质量浓度对动态吸附性 能 的 影 份ᤥ 以洗脱体积ྉା჆ɯ为横坐标ᖔ每份洗脱液中的总
响জ 按每份 ሕጢ ቝᓂ 的湿体积量取 ۪̀᥋԰ԡ 型大孔树 黄酮含量ྉቝ੫ኼቝᓂ ɯ为纵坐标绘制洗脱曲线ᤥ
᥋ϟ
脂共 ᤃ 份ᖔ湿法装柱ଫ按 ϟ঎԰঎ጢ঎ϟ 项分别配制浓度为 ϟ঎԰঎ጢ঎ऐ 验证试验জ 根据 ϟ঎԰঎ጢ঎԰ ጲ ϟ঎԰঎ጢ঎Ꭾ 单因素
᥋ϟ
ԡ঎԰ܦԡ঎ሕܦԡ঎࿗ܦԡ঎ጢܦԡ঎ᤃܦԡ঎Ꭾ ቝ੫ኼቝᓂ 的上样液 ϟԡԡ 试验确定的最佳上样和洗脱条件ᖔ以树脂对拟草
ቝᓂᖔ以 ϟቝᓂኼቝᔽႿ 的流速上样ᤥ 分别收集流出 果总黄酮的保留率为考察指标进行平行试验ྉ Ⴅ ᢉ
᥋ϟ
液ᖔ蒸干后用甲醇溶解并定容至 ጢԡ ቝᓂᖔ测定流出 ሕɯᖔ验证试验的可重复性ᤥ
液的总黄酮浓度ᖔ计算不同浓度上样液中总黄酮 ϟ঎԰঎ᤃ 抗炎活性试验জ 鼠源神经小胶质 ା჆԰ 细胞ᖔ

在 ۪̀᥋԰ԡ 树脂中的吸附率ᤥ 采用 ᧕ᥘጶᥘ 高糖培养基ྉ含 ϟԡᠮ èା୩ᖔϟᠮ青霉素和
ϟ঎԰঎ጢ঎ሕ 上样流速对总黄酮吸附率的影响জ 按每份 ϟᠮ链霉素ɯᖔ于 ሕᎮ ቩᖔ含 ጢᠮ ऊᨃ ᖔ饱和湿度条件下
԰
ሕጢ ቝᓂ 湿体积量取 ۪̀᥋԰ԡ 型大孔树脂共 ࿗ 份ᖔ分别 的细胞培养箱中培养ᤥ 细胞为贴壁生长ᖔ根据细胞

装柱ᖔ按 ϟ঎԰঎ጢ঎ϟ 项配制 ࿗ 份浓度均为 ԡ঎ጢ ቝ੫ኼ 生长情况换液ᖔ以 ԡ঎԰ጢᠮ胰酶消化传代ᖔ试验前将细
᥋ϟ
ᤃ
ቝᓂ ܦϟԡԡ ቝᓂ 的上样液ᖔ 分别 以 ϟܦ ԰ܦ ሕܦ ࿗ ቝᓂ ኼ 胞接种于 ϟ԰ 孔板ᖔ接种细胞数每 ϟቝᓂ 为 ϟԡ 个ᖔ孵
ቝᔽႿ 的流速上样ᖔ按 ϟ঎԰঎ጢ঎԰ 项收集流出液并测定 育 ᤃጲँ ၤ 后换液加入 ᓂ۪୩ 或 ᧕ᥘ୩ᨃᖔ԰ ၤ 后加入 ϟԡ
᥋ϟ
其总黄酮浓度ᖔ 考 察不同上样流速对总黄酮在 ဂቝᆍ᤟ኼᓂ 浓度的化合物孵育 ԰࿗ ၤᖔ收集细胞上清进
᥋ϟ
۪̀᥋԰ԡ树脂中吸附率的影响ᤥ 行 ऊାዶ 检测ᤥ 每个样本设 ሕ 个复孔ᤥ
ϟ঎԰঎ጢ঎࿗ 上样体积的考察জ 量取 ሕጢ ቝᓂ 湿体积的
᥋ϟ
۪̀᥋԰ԡ树脂装柱ଫ按 ϟ঎԰঎ጢ঎ϟ 项配制 ԡ঎ጢ ቝ੫ኼቝᓂ 的 ԰জ 结果与分析
上样液 Ꭾԡԡ ቝᓂ ྉ԰ԡ ା჆ɯᖔ以 ࿗ቝᓂኼቝᔽႿ 的流速连
᥋ϟ
续上样ᖔ按 ԰ጲሕ ା჆ 的柱体积收集流出液共 ँ 份ᖔ测 ԣॹϓ 静态吸附和解析附试验筛选最优大孔树脂

定每份流出液中的总黄酮浓度ᖔ计算泄露百分数ᤥ 表 ϟ 展示三种不同型号的大孔树脂对拟草果