Page 73 - 《广西植物》2020年第12期

ϟ Ꭾ ጢ ऐ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ԡ 卷
光光度计ྉ ఋၤᔀʢቝᆍ èᔽ༁ၤᔀʢᖔ В୩ዶɯ 测定浙贝母不同 后的 引物见表 ԰ྉ 冯亚斌等ᖔ ԰ԡϟᤃᖔ ԰ԡϟᎮᑕᖔ ᤦɯᤥ

组织部位总 ኏શዶ 浓度以及吸光度比值ྉዶ 和 ी۪ऊ኏ 反应体系为 ԰ԡ ဂᓂᖔ 其中包括᧥԰ ġ ऊၤᑕቝ͐
԰ᤃԡᣰ ԰ऐԡ
ዶ ɯᖔϟ঎԰ᠮ琼脂糖凝胶电泳鉴定其完整性ᤥ 采 ୩ɟା኏ ऊᆍ᤟ᆍʢ ी۪ऊ኏ ᥘᑕ༁ᡷᔀʢ ᥘᔽ଴ ϟԡ ဂᓂܦ上下游引物各
԰ᤃԡ ᣰ ԰ሕԡ
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用 ჆ᑕझᢃቝᔀ ̀ᔽ୩ዹʢᔽᡱᡷ ֒ ͐ ኏ఋ ୩ࣼᡱᔀʢᥘᔽ଴ ஦ᆍʢ ी۪ऊ኏ 试 ԡ঎࿗ ဂᓂܦ模板 ዹ᧕શዶ ԡ঎࿗ ဂᓂܦʛʛ̀ ᨃऐ঎ऐ ဂᓂᤥ ी۪ऊ኏
԰
剂盒将总 ኏શዶ 逆转录合成 ዹ᧕શዶᖔ于ͱ԰ԡ ቩ 保存ᤥ 反应程序᧥ँጢ ቩ 预变性 ሕԡ ༁ଫँጢ ቩ ϟԡ ༁ᖔᤃԡ ቩ ሕԡ
ϟ঎԰঎ሕ 荧光定量 ۪ऊ኏জ 根据本课题组已克隆的浙 ༁ᖔ重复 ࿗ԡ 个循环ଫ۪ऊ኏ 反应之后从 ᤃԡ ቩ 逐渐升
贝母 ̵᤹ᤩቴܦ Þۗ୩ܦ ᦵᣏቴ 和 Ꭻ᤬ዛዞᡙᔠႥ 基因序列采用 温到 ँጢ ቩ 制作溶解曲线ᤥ 以看家基因 Ꭻ᤬ዛዞᡙᔠႥ 作
۪ʢᔽቝᔀʢ ጶ଴ᡱʢᔀ༁༁ ሕ঎ԡ 软件设计并筛选出特异性ܦ稳定 为内参基因ᖔ采用 ԰ ͱ᪵ऊఋ 计算基因的表达量ྉۼࣼ ᔀᡷ
性ܦ重复性好的引物用于荧光定量表达分析ᖔ筛选 ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡϟጢɯᤥ

表 ԣই 浙贝母 ̵᤹ᤩቴܓÞۗ୒ 和 ᦵᣏቴ 基因的实时荧光定量 ۗࣷቴ 引物
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ԰জ ኏ᔀᑕ᤟᥋ᡷᔽቝᔀ ஦᤟ࣼᆍʢᔀ༁ዹᔀႿዹᔀ ीࣼᑕႿᡷᔽᡷᑕᡷᔽ׹ᔀ ۪ऊ኏ ᡱʢᔽቝᔀʢ༁ ஦ᆍʢ ̵᤹ᤩቴᖔ Þۗ୒ ᑕႿʛ ᦵᣏቴ ੫ᔀႿᔀ༁ ᆍ஦ Þʗᔠᡙᔠᤀᤀᐹʗᔠᐹ ᡙ၊ࣩႥᤇᓣʗ੖ᔠᔠ

基因 正向引物ྉጢࣕ܀ሕࣕɯ 反向引物ྉጢࣕ܀ሕࣕɯ
᥈ᔀႿᔀ èᆍʢऔᑕʢʛ ᡱʢᔽቝᔀʢ ኏ᔀ׹ᔀʢ༁ᔀ ᡱʢᔽቝᔀʢ
̵᤹ᤩቴ ऊዶ᥈ఋ᥈᥈ऊዶዶఋ᥈ዶዶ᥈ዶऊ᥈᥈ ᥈ዶ᥈᥈ऊዶዶዶఋऊዶ᥈ఋ᥈᥈ఋዶఋ᥈ఋ
Þۗ୒ ఋఋఋऊ᥈ऊऊዶ᥈ዶऊዶఋऊዶ᥈ऊዶ ᥈᥈ዶఋఋఋዶఋఋऊዶዶऊ᥈ዶ᥈᥈ఋ᥈
ᦵᣏቴ ఋ᥈᥈ዶఋऊఋऊ᥈ऊऊఋዶఋ᥈ऊఋ᥈ऊఋ ऊऊዶ᥈ऊ᥈ዶዶ᥈᥈ዶఋ᥈ዶዶऊ᥈ዶऊऊ
Ꭻ᤬ዛዞᡙᔠႥ ऊዶఋዶዶఋऊऊዶ᥈ዶ᥈ऊऊዶऊዶఋዶ ఋ᥈ऊऊዶዶఋऊఋዶऊ᥈ዶ᥈᥈᥈ఋఋ

ϟ঎԰঎࿗ 数据分析জ 采用 ୩۪୩୩ ୩ᡷᑕᡷᔽ༁ᡷᔽዹ༁ ԰ϟ঎ԡ 软件进 贝母素乙的含量均高于贝母素甲ᖔ且此趋势在叶中
行统计分析ᖔ并使用 ጶ଴ዹᔀ᤟ ԰ԡϟԡ 绘制柱状图ᤥ 要明显高于茎和鳞茎ᤥ
在 ϟϟ 个产地浙贝 ϟ 号成熟期新鳞茎中ᖔ总生
԰জ 结果与分析 物碱含量存在显著差异ྉۗጐԡ঎ԡጢɯᖔ其中瓯海ܦ六安
产地浙贝母生物碱含量较高ᖔ丽水ܦ开化ܦ昌化ܦ南
ԣॹϓ 不同产地对浙贝母盛花期及成熟期生物碱积 通ܦ婺城ܦ章水产地总生物含量稍低ᖔ淳安ܦ余杭ܦ

累量的影响 东阳产地总生物碱含量处于最低水平ଫ其贝母素
采用 В۪ᓂऊ᥋ᥘ୩ 法测定 ϟϟ 个产地浙贝 ϟ 号盛花 甲的含量均高于贝母素乙ଫ值得注意的是ᖔ瓯海和
期 ሕ 个组织ྉ茎ܦ叶和鳞茎ɯ及成熟期鳞茎中生物碱 莲都产地成熟期新鳞茎生物碱含量高于盛花期新

ྉ贝母素甲和贝母素乙ɯ 的含量ᖔ结果如图 ϟ 所示ᤥ 鳞茎ᖔ但其他 ँ 个产地却呈现相反的趋势ᤥ
在 ϟϟ 个不同产地浙贝 ϟ 号盛花期 ሕ 个组织部位及 ԣॹԣ 不同产地对浙贝母盛花期及成熟期生物碱合
成熟期鳞茎中均含生物碱ᖔ不同产地浙贝 ϟ 号盛花 成相关基因表达的影响

期同一组织部位的总生物碱含量ྉ贝母素甲与贝母 以 ϟϟ 个产地浙贝 ϟ 号盛花期的茎ܦ叶ܦ鳞茎及
素乙含量之和ɯ 存在显著差异ྉۗጐԡ঎ԡጢɯᖔ茎中总生 成熟期鳞茎为材料ᖔ采用实时荧光定量 ۪ऊ኏ 方法
物碱含量最高的为章水ᖔ叶中总生物碱含量最高的 检测了 ̵᤹ᤩቴܦÞۗ୒ 和 ᦵᣏቴ 基因在不同产地ܦ不同
为六安ᖔ鳞茎中总生物碱含量最高的为开化ᖔ而叶 组织部位ܦ不同发育阶段的表达差异水平ᖔ基因表
中总生物碱含量最低的为淳安ᖔ茎和鳞茎的总生物 达结果如图 ԰ 所示ᤥ ̵᤹ᤩቴܦÞۗ୒ 和 ᦵᣏቴ 基因在
碱含量最低均为莲都ଫ不同产地各组织部位生物碱 ϟϟ 个不同产地浙贝 ϟ 号的盛花期 ሕ 个组织部位及
含量存在相同的趋势ᖔ其中鳞茎中总生物碱含量最 成熟期鳞茎中均有表达ᖔ̵᤹ᤩቴ 和 Þۗ୒ 基因表达
高ᖔ其次为茎ᖔ叶中总生物碱含量最低ଫ在茎ܦ叶和 趋势大体相同ᖔ其中以盛花期鳞茎中表达量最高ᖔ

新鳞茎 ሕ 个组织部位中ᖔ除瓯海ܦ开化和淳安茎外ᖔ 其次成熟期鳞茎ᖔ叶和茎的表达量最低ଫᦵᣏቴ 基因