Page 35 - 《广西植物》2020年第4期

４ 期 李博园等: 杭白芷根中分泌道发生方式、分布及其挥发油积累过程研究 ４ ７ ３

化学染色使用ꎮ 道的起源将分布在皮层中的分泌道称为中柱鞘起
１.２.２ 石蜡切片法 将不同发育时期杭白芷根分 源分泌道ꎬ次生韧皮部中的分泌道称为韧皮部起
割成 ０.５ ~ １ ｃｍ 的小段ꎬ７０％ＦＡＡ 固定 ３ ~ ５ ｄꎬ梯度 源分泌道ꎬ如图 １ 所示ꎮ
酒精脱水ꎬ石蜡包埋ꎬＬｅｉｃａ ＲＭ ２３３５ 切片机切片ꎬ

厚度 １０ ~ １２ μｍꎬ番红固绿染色ꎬ中性树胶封片ꎬ
Ｌｅｉｃａ ＤＭＢＬ 显微镜观察并拍照ꎮ
１.２.３ 半薄切片 将不同发育时期杭白芷根切成

２ ~ ３ ｍｍ 的 小 块ꎬ首 先 用 ２. ５％ 的 戊 二 醛 固 定 液
(ｐＨ ＝ ７.０ 的磷酸缓冲液配制)预固定 ２４ ｈ(４ ℃ )ꎬ
然后用磷酸缓冲液漂洗 ３ 次ꎬ每次 ２０ ｍｉｎꎬ０.５％的
锇酸(ｐＨ ＝ ７.０ 的磷酸缓冲液配制) 固定 ２ ｈꎬ再用
磷酸缓冲液漂洗 ３ 次ꎬ每次 ２０ ｍｉｎꎬ梯度酒精脱水
(３０％、５０％、７０％各一次ꎬ９０％两次ꎬ１００％三次ꎬ每

次 ２０ ｍｉｎ)ꎬ环氧丙烷过渡ꎬＥｐｏｎ ８１２ 包埋剂包埋ꎬ ＰＥ. 周皮ꎻ Ｃ. 皮层ꎻ ＳＰ. 次生韧皮部ꎻ ＳＸ. 次生木质部ꎻ
ＳＣ. 分泌道ꎮ 黑色箭头示中柱鞘起源分泌道ꎻ白色箭头示
６０ ℃ 烘箱过夜ꎬ最后用 Ｌｅｉｃａ ＥＭ ＵＣ７ 超薄切片机
韧皮部起源分泌道ꎻ标尺 ＝ ２００ μｍꎮ
切片ꎬ切片厚度为 １ ~ ２ μｍꎬ甲苯胺蓝染色后ꎬＬｅｉｃａ ＰＥ. Ｐｅｒｉｄｅｒｍꎻ Ｃ. Ｃｏｒｔｅｘꎻ ＳＰ. Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｐｈｌｏｅｍꎻ ＳＸ. Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ
ｘｙｌｅｍꎻ ＳＣ. Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｃａｎａｌ. Ｂｌａｃｋ ａｒｒｏｗｓ ｓｈｏｗ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｔｈｅ
ＩＣＣ５０ Ｗ 显微镜观察并拍照ꎮ
ｐｅｒｉｃｙｃｌｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｃａｎａｌｓꎻ Ｗｈｉｔｅ ａｒｒｏｗｓ ｓｈｏｗ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ
１. ２. ４ 透 射 电 子 显 微 镜 上 述 材 料 经 Ｌｅｉｃａ ＥＭ
ｏｆ ｔｈｅ ｐｈｌｏｅｍ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｃａｎａｌｓꎻ Ｂａｒ ＝ ２００ μｍ.
ＵＣ７ 超薄切片机切片ꎬ厚度为 ６０ ~ ８０ ｎｍꎬ经醋酸
图 １ 杭白芷根横切面解剖结构
双氧铀和柠檬酸铅双重染色ꎬ日立透射电子显微 Ｆｉｇ. １ Ｃｒｏｓｓ ｓｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｏｏｔ ｏｆ Ａｎｇｅｌｉｃａ
ｄａｈｕｒｉｃａ ｖａｒ. ｆｏｒｍｏｓａｎａ
镜 Ｈ￣７６５０ 观察并拍照ꎮ
１.２.５ 组织化学染色 挥发油显色反应:取冰冻组
织切片ꎬ苏丹Ⅲ染色封片ꎬＬｅｉｃａ ＤＭＢＬ 显微镜观察 根中分泌道由中柱鞘细胞最先发生ꎬ在中柱

拍照ꎬ取半薄切片ꎬ用苏丹黑 Ｂ 饱和溶液染色封 鞘中出现 １ 个原始细胞ꎬ原始细胞体积较小ꎬ形态
完整规则(图版Ⅰ:１)ꎮ 随后原始细胞与邻近的细
片ꎬＬｅｉｃａ ＤＭＢＬ 显微镜观察拍照ꎻ淀粉显色反应:
取石蜡切片和冰冻组织切片ꎬ分别用碘液染色封 胞之间出现小腔隙ꎬ由这 ３ ~ ４ 个细胞即分泌细胞
围绕形成分泌道ꎬ此时分泌细胞体积增大ꎬ呈多边
片ꎬＬｅｉｃａ ＤＭＢＬ 显微镜观察拍照ꎮ
形(图版Ⅰ:２ꎬ３)ꎬ分泌细胞周围的细胞内可见少
１.２.６ 模式示意图制作方法 使用 ＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ
制作分泌细胞、周围细胞以及腔道挥发油转运模 量的淀粉粒ꎮ 随着分泌细胞进一步分裂及邻近细
胞插入ꎬ细胞数量增加ꎬ腔道也随之增大( 图版Ⅰ:
式示意图ꎮ
４)ꎬ此时周围细胞内的淀粉粒数量也明显增加ꎮ
２ 结果与分析 之后ꎬ分泌细胞趋于扁平状ꎬ围绕着较大的椭圆形
腔道(图版Ⅰ:５)ꎬ周围细胞内充满大量淀粉粒ꎬ而

２.１ 杭白芷根中分泌道发生及分布特征 分泌细胞内始终未见淀粉粒分布ꎮ 随着根的次生
杭白芷根次生结构类似于多年生草本双子叶 生长不断进行ꎬ维管形成层的活动明显ꎬ在韧皮部
植物根的特点ꎬ由外向内依次包括周皮、皮层、次 细胞中ꎬ可见 ３ ~ ４ 个相邻细胞的细胞壁变形、分
生韧皮部、次生木质部ꎮ 根中分泌道由中柱鞘细 离ꎬ形成小腔隙(图版Ⅰ:６)ꎬ之后ꎬ由 ４ ~ ５ 个分泌
胞最先发生ꎬ次生结构中分泌道主要分布在韧皮 细胞围绕的腔隙进一步增大( 图版Ⅰ:７)ꎬ随后分
部和皮层中ꎬ属于次生分泌组织ꎮ 成熟分泌道由 泌细胞趋于扁平ꎬ腔道扩大( 图版Ⅰ:８)ꎬ同样ꎬ韧
５ ~ １２ 个分泌细胞围绕较大的腔道组成ꎬ按照分泌 皮部分泌细胞周围的细胞内也具丰富的淀粉粒ꎮ