Page 149 - 《广西植物》2021年第12期
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ϟ 期 段 新 钰 等 ᧥ 基于响应面设计茎段形成层培养猕猴桃幼苗的优化研究 ԡ ँ ሕ
桃ྉዛዞᡙᔠႥᔠʐᔠᐹ ዞ၊ᔠႥᓣႥᔠ ዹጸ̀ᆍႿ੫ᢃᑕႿ੫ᆥɯᤥ 行切片观察ᖔ切片采用徒手切片ᖔ中性红染色观
ϓॹԣ 方法 察ᤥ 当不定芽所形成的幼苗至 ጲ ሕ ዹቝ 时ᖔ将其从
ϟϟ 外植体消毒জ 茎段先用自来水冲洗 ϟጲ ၤ 猕猴桃茎段或茎段切片切下ᖔ转入生根及壮苗培
后ᖔ用滤纸吸干表面水分ᖔ在无菌条件下ᖔ用 Ꭾጢᠮ 养基诱导生根及壮苗ᖔ培养基分别为 ϟᣰ ᥘ୩ 培养
᥋ϟ
的无水乙醇消毒 ሕԡ ༁ᖔ再用 ԡϟጢᠮ 的氯化汞消毒 ऐ 基շશዶዶ ԡሕ ቝ੫ኼᓂ շྉ 蔗糖及琼脂下同ɯሕᠮ糖շ
ቝᔽႿᖔ用无菌蒸馏水冲洗 ጢ 次ᖔ用消毒的滤纸吸干 ԡऐᠮ琼脂ܦϟ ᣰ ᥘ୩ 培养基շ᧧ାዶ ԡሕ ቝ੫ኼᓂ 及 ᥘ୩
᥋ϟ
表面水分后ᖔ将茎段切成长度 ጲሕ ዹቝ 的小段为接 培养基շશዶዶ ԡሕ ቝ੫ኼᓂ ᤥ 每瓶生根培养基分别
᥋ϟ
种外植体ᤥ 接种 ϟԡ 株幼苗ᖔ每隔 ϟԡ ʛ 统计生根数量与根长ᤥ
ϟ 形成层幼苗的诱导জ 茎段接种前ᖔ用镊子剥 实验重复 ሕ 次ᤥ
离猕猴桃幼嫩茎段 的 周 皮ᖔ 将茎段两端各切除 ϓॹᇺ 数据处理
᥋ϟ
ԡϟ ጲ ԡ ዹቝ 后置于防氧化处理液ྉ ሕԡԡ ቝ੫ኼᓂ 数 据 通过软件 ୩۪୩୩ ԡ ϟ 及 ᧕ᔀ༁ᔽ੫Ⴟ᥋ጶᡱᔀʢᡷ
۪۪ɯ处理 ሕԡ ቝᔽႿᖔ随后将处理完毕的茎段置于形 ऐԡᤃ 处理ᤥ
成层干细胞低渗处理培养基ᖔ低渗培养基以 ᥘ୩ 为
基本培养基ᖔ添加 ऐ੫ኼᓂ 琼脂粉ܦጢ ੫ኼᓂ 蔗糖 জ 结果与分析
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及 ሕቝ੫ኼᓂ શዶዶᖔ在黑暗ܦ温度为 ࿗ ጲ ᤃ ቩ 条件
᥋ϟ
下进行培养ᖔ培养时间为 ጢ ጲ ሕԡ ʛᤥ 茎段培养 ጢ ጲ ԣॹϓ 形成层干细胞诱导愈伤及其分化的形态学变化
ሕԡ ʛ 后ᖔ将茎段再次切短ᖔ形成长度为 ጲ࿗ ዹቝ 的 猕猴桃茎段或有绒毛ᖔ或有微小裂纹ᖔ易吸附
小段或 ԡ ጲ ԡሕ ዹቝ 的薄片ᖔ转入形成层干细胞诱 微生物ᖔ造成猕猴桃茎段培养过程中的污染ᖔ撕掉
导愈伤培养基中诱导培养ᤥ 在前期的预备实验 周皮相当于除去了污染源ᤥ 未撕周皮的猕猴桃茎
中ᖔ发现采用 ᖔ࿗᥋᧕ 为生长素ᖔ虽然能提高愈伤诱 段的污染率为 ࿗ጢᠮ ጲ ᤃᠮᖔ而撕掉周皮的污染率为
导率ᖔ但是会严重影响胚性愈伤的诱导及胚状体 ϟጢᠮ ጲ ϟᠮᤥ 但是猕猴桃茎段非常容易发生褐化ᖔ
的形成ܦ分化ᤥ 猕猴桃组培快繁中多采用的植物 褐化茎段会释放酚类物质而影响茎段愈伤的形
激素多为 ᤃ᥋ାዶ 和 શዶዶྉ罗强和刘建林ᖔԡԡँଫ张玉 成ᤥ 将猕猴桃茎段置于抗氧化液处理后ᖔ可有效
杰ᖔԡϟ࿗ଫ于非ᖔԡϟᎮଫ顾福明等ᖔԡϟऐɯᤥ 因此ᖔ参 防止去皮茎段的氧化ྉ图 ϟ᧥ ዶɯᤥ 在前期预备实验
考吕海燕等ྉԡϟँɯ 的报道ᖔ本实验形成层干细胞 中ᖔ曾对 ϟጢԡܦԡԡܦሕԡԡܦ࿗ԡԡቝ੫ኼᓂ 的 ۪۪ 各处理
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诱导培养基是在 ᥘ୩ 基本培养基基础上进行如下 ሕԡ ቝᔽႿᖔ发现 ԡԡ ጲ ࿗ԡԡ ቝ੫ኼᓂ 都能取得较好抗氧
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调整ᖔ添加 ᤃ੫ኼᓂ 琼脂粉ܦሕጢ ੫ኼᓂ 蔗糖及不同 化效果ᤥ 因此ᖔ实验选择了 ሕԡԡ ቝ੫ኼᓂ 的 ۪۪ 为
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浓度的 શዶዶ 及 ᤃ᥋ାዶᖔ 在 ϟ ऐԡԡ ጲ ԡԡ ᖔ ྉ ጢ ō 抗氧化剂ᖔ并利用 ᧕ᔀ༁ᔽ੫Ⴟ᥋ጶᡱᔀʢᡷ ऐԡᤃ 软件对其处
ɯቩ 下培养ᤥ 同时ᖔ对低渗培养基的处理时间进 理时间进行了优化ᤥ 经形成层干细胞低渗培养基
行了预备实验ᖔ处理时间分别为 ԡܦጢܦϟԡܦϟጢܦԡܦ 培养 ጢ ጲ ሕԡ ʛ 的茎段或茎段切片转入愈伤诱导培
ጢܦሕԡܦሕጢ ʛᖔ结果发现处理时间在 ጢ ʛ 以下ᖔ茎段 养基中进行培养ᖔ培养 ϟԡ ጲ ϟጢ ʛ 后ᖔ可在茎段表面
多以愈伤ͱ器官形成方式形成幼苗ᖔ而 ሕԡ ʛ 以上茎 及 茎段切片上观察 到浅绿色的胚性愈伤
段形成胚状体的频率会大幅下降ᤥ 因此ᖔ在利用 ྉᔀቝᤦʢᢃᆍႿᔽዹ ዹᑕࣼ༁ɯ 凸起ྉ 图 ϟ᧥ ାᖔऊɯᖔ随着凸起愈
᧕ᔀ༁ᔽ੫Ⴟ᥋ጶᡱᔀʢᡷ ऐԡᤃ 软件进行三水平设计培养条件 伤的增大及转绿ᖔ培养 ԡ ጲ ጢ ʛ 后ᖔ胚性愈伤可直
优化选择时ᖔ低渗培养基的处理时间选择 ጢ ጲ ሕԡ 接分化为胚性幼芽从而形成幼苗ྉ图 ϟ᧥᧕ᖔèɯᤥ 从
ʛᤥ 而 શዶዶܦ ᤃ᥋ାዶ 浓度的下限分别 设 为 ሕܦ ԡ 幼芽不定芽的横切片看ᖔ不定芽源于愈伤团内的
᥋ϟ 致密组织ྉ图 ϟ᧥ጶɯᤥ 当幼苗长至 ጲሕ ዹቝ 时就可
ቝ੫ኼᓂ ᖔશዶዶܦᤃ᥋ାዶ 浓度的上限分别设为 ጢܦԡ ጢ
ቝ੫ኼᓂ ᤥ 低渗处理完毕后的茎段或茎段切片转入 将其切下转入生根培养基中培养生根ྉ图 ϟ᧥᥈ɯᤥ
᥋ϟ
愈伤诱导培养基中培养ᖔ经 ԡ ጲ ሕԡ ʛ 培养后茎段 ԣॹԣ 形成层干细胞的愈伤诱导及成苗条件优化
形成层会形成胚性愈伤及胚状体ᖔ并逐步分化为 培养 ԡ ጲ ሕԡ ʛ 后ᖔ猕猴桃茎段开始长出浅绿
不定芽ᤥ 所有处理中ᖔ实验重复 ሕ 次ᤥ 色胚性愈伤ྉ 图 ϟ᧥ାᖔऊɯᖔ各处理组合中胚性愈伤
ϟሕ 愈伤组织来源途径的确定及幼苗生根জ 取 组织的诱导情形见表 ϟᤥ 图 为经 ᧕ᔀ༁ᔽ੫Ⴟ᥋ጶᡱᔀʢᡷ
培养中的猕猴桃茎段及长有愈伤的茎段切片ᖔ进 ऐԡᤃ 分析所得的效应面及等高图ᤥ 从图 可以看
