Page 111 - 《广西植物》2021年第4期

࿗ 期 张 良 波 等 ᧥ 甜荞 ÞᓣÞІᒦ԰ 基因的克隆与表达分析 ጢ ँ ሕ

ዛ঎ఋၤʢࣼቝ 型花ྉ短花柱长雄蕊ɯଫ ଧ঎۪ᔽႿ 型花ྉ长花柱短雄蕊ɯଫ ࣷ঎ ᤀᡓᤀ໧ 突变体花ྉ长花柱长雄蕊ɯᤥ
ዛ঎ ఋၤʢࣼቝ᥋᤟ᔽҴᔀ ஦᤟ᆍऔᔀʢ औᔽᡷၤ ༁ၤᆍʢᡷ ᡱᔽ༁ᡷᔽ᤟ ᑕႿʛ ᤟ᆍႿ੫ ༁ᡷᑕቝᔀႿଫ ଧ঎ ۪ᔽႿ᥋᤟ᔽҴᔀ ஦᤟ᆍऔᔀʢ औᔽᡷၤ ᤟ᆍႿ੫ ᡱᔽ༁ᡷᔽ᤟ ᑕႿʛ ༁ၤᆍʢᡷ ༁ᡷᑕቝᔀႿଫ ࣷ঎ ᤀᡓᤀ໧ ஦᤟ᆍऔᔀʢ औᔽᡷၤ ᤟ᆍႿ੫ ᡱᔽ༁ᡷᔽ᤟ ᑕႿʛ
᤟ᆍႿ੫ ༁ᡷᑕቝᔀႿ঎
图版 ᧧জ 甜荞的异型花
۪᤟ᑕᡷᔀ ᧧জ ఋʢᔽቝᆍʢᡱၤᔽዹ ஦᤟ᆍऔᔀʢ༁ ᆍ஦ Þᐹ੖ᅳᡓᡥʗࣩቂ ᓣ໧ዞࣩᤀᓣႥᡙࣩቂ

ϓॹԣ 实验方法 ϟ঎԰঎԰ 蛋白同源序列比对与分子系统发生分析জ
ϟ঎԰঎ϟ 甜荞 ÞᓣÞІᒦ԰ 基因克隆জ 称取上述 ऐ 种组织 将 ÞᓣÞІᒦ԰ 基因编码的蛋白序列在 શऊା᧧ 数据库中
各 ϟԡԡ ቝ੫ᖔ用 ጶዶ୩ɟ༁ᡱᔽႿ 植物 ኏શዶ 快速提取试剂 执行 ۪ʢᆍᡷᔀᔽႿ ା᤟ᑕ༁ᡷ 同源搜索比对ᤥ 选取来源于不
盒ྉ艾德莱生物科技ᖔ 北京ɯ 分别提取其总 ኏શዶᖔ 同被子植物类群中的同源序列ᖔ用 ᥘጶ᥈ዶ ጢ঎ԡ 软
操作参照试剂盒说明书上的程序ᤥ 经电泳ܦ紫外 件ᖔ选邻接法ྉ Ⴟᔀᔽ੫ၤᤦᆍࣼʢ ᢼᆍᔽႿᔽႿ੫ᖔશȮɯ 构建分子系统
分光光度计检测 ኏શዶ 的质量和完整性后ᖔ参照 ᓂᔽ 进化 树ᖔ所建树经ϟ ԡԡԡ 次的自展重复 ྉ ᤦᆍᆍᡷ༁ᡷʢᑕᡱ
ᔀᡷ ᑕ᤟঎ྉ԰ԡϟᎮɯ的方法合成第一链 ዹ᧕શዶᖔ根据课题组 ʢᔀᡱ᤟ᔽዹᑕᡷᔀɯ检验ᖔ确定 ÞᓣÞІᒦ԰ 基因的进化分支ᖔ以
前期 分 离 的 Þᐹᓣ໧ᓣࣩÞІᒦ 基因 ྉ ᥈ᔀႿᤦᑕႿҴ 登录号᧥ 及与其他物种的 èВᓂ 同源蛋白的演化关系
᣽ᥘሕऐᤃᤃ԰ᤃ঎ϟɯ的 ዹ᧕શዶ 序列ᖔ引入适宜的酶切位点 ྉఋᑕቝࣼʢᑕ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟϟɯᤥ 同时用 ାᔽᆍጶʛᔽᡷ Ꭾ঎ ԡ঎ ँ 软
设计引 物ᖔ从甜荞 ᤀᡓᤀ໧ 突变体中克隆 ÞᓣÞІᒦ԰ 基 件ᖔ选 ऊ᤟ࣼ༁ᡷᑕ᤟ۼ 程序对 èᔀèВᓂ԰ 转录因子进行结构
因ᖔ۪ऊ኏ 扩增的上ܦ下游引物分别为 èᔀèВᓂ԰è 和 分析和功能预测ᤥ
èᔀèВᓂ԰኏ᤥ 引物ྉ表 ϟɯ合成和 ᧕શዶ 测序均委托生 ϟ঎԰঎ሕ ÞᓣÞІᒦ԰ 基因的表达分析জ 分别提取甜荞

工生物工程ྉ上海ɯ股份有限公司完成ᤥ ᤀᡓᤀ໧ 突变体的根ܦ茎ܦ叶ܦ花被片ܦ雄蕊ܦ雌蕊和发育
࿗ʛ 幼果的总 ኏શዶᖔ检测其质量与完整性后ᖔ合成
表 ϓই 引物名称及序列 第一链 ዹ᧕શዶᤥ 通过实时荧光定量 ۪ऊ኏ྉ ʢᔀᑕ᤟᥋ᡷᔽቝᔀ
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ۪ʢᔽቝᔀʢ Ⴟᑕቝᔀ༁ ᑕႿʛ ༁ᔀीࣼᔀႿዹᔀ༁ ीࣼᑕႿᡷᔽᡷᑕᡷᔽ׹ᔀ ۪ऊ኏ᖔ ी۪ऊ኏ɯ技术检测 ÞᓣÞІᒦ԰ 基因在

引物名称 引物序列 甜荞上述 Ꭾ 种组织中表达的特异性和表达量的差
۪ʢᔽቝᔀʢ Ⴟᑕቝᔀ ۪ʢᔽቝᔀʢ ༁ᔀीࣼᔀႿዹᔀ ྉጢࣕ܀ሕࣕɯ
异ᤥी۪ऊ኏ 检测所用的基因的上ܦ下游特异性引物
èᔀèВᓂ԰è ጢࣕ᥋ఋऊఋዶ᥈ዶఋఋዶऊዶऊఋఋऊఋऊዶዶዶ᥈ዶఋऊఋዶ᥈ऊ᥋ሕࣕ 分别为 ीèᔀèВᓂ԰è 和 ीèᔀèВᓂ԰኏ྉ 表 ϟɯଫ ी۪ऊ኏ 检
èᔀèВᓂ԰኏ ጢࣕ᥋᥈ዶ᥈ऊఋऊዶఋఋऊఋዶఋዶऊఋऊఋዶऊఋఋ᥈ఋऊఋ᥈ऊ᥈ఋዶ᥋ሕࣕ 测所用的阳性对照内参基因为甜荞的 ÞᓣᐹዞᡙᔠႥ 基因
ीèᔀèВᓂ԰è ጢࣕ᥋᥈ऊऊዶዶዶఋऊ᥈ዶఋఋऊዶ᥈᥈ዶఋऊዶ᥈ዶዶऊ᥋ሕࣕ ྉ᥈ᔀႿᤦᑕႿҴ 登录号᧥ ̀͐ሕँऐऐጢጢ঎ϟɯᖔ检测特异性引
物分别为 ीèᔀᑕዹᡷᔽႿè 和 ीèᔀᑕዹᡷᔽႿ኏ྉ表 ϟɯᤥ ी۪ऊ኏ 在
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୩ᢃ༁ᡷᔀቝ 中进行ᖔ每个样品 ሕ 个生物学重复ᖔ实时荧
ीèᔀᑕዹᡷᔽႿ኏ ጢࣕ᥋ऊऊዶఋऊዶ᥈᥈ዶዶ᥈ऊఋऊዶఋዶ᥈ఋఋऊ᥋ሕࣕ
光定量采用两步法 ۪ऊ኏ 扩增标准程序᧥ँጢ ቩ 预变