Page 79 - 《广西植物》2021年第4期

࿗ 期 邓 文 静 等 ᧥ 茉莉酸甲酯对广藿香 Ȯዶ 信号转导途径及倍半萜合成途径关键基因表达的影响 ጢ ᤃ ϟ
化合物的积累ྉ ᣮࣼ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡԡ࿗ଫ ୩ࣼᡷᡷᔽᡱᑕႿᡷᑕ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ኏ఋ èᆍʢ ۪ऊ኏ 试剂盒按说明书进行反转录ᖔ 获得
԰ԡϟϟଫ何雪莹ᖔ԰ԡϟᤃɯᤥ 目前ᖔ对 ᥘᔀȮዶ 处理广藿香 ዹ᧕શዶ 第一链ᤥ
后 Ȯዶ 信号转导途径及倍半萜合成途径相关性的 ϓॹ྽ 基因表达量的测定
研究尚未见报道ᖔ而进一步研究其分子机制对提 根据本课题组广藿香转录组测序得到的
高广藿香倍半萜类化合物的合成与积累具有重要 ȣዛԮ԰ܦ᤹ɔࣷ԰ܦࣷ᧣ᧇϟܦ୒ͅᒦጛܦÞۗۗ୒ 基因序列及 શऊା᧧

价值ᤥ 因此ᖔ本实验用不同浓度 ᥘᔀȮዶ 处理广藿 公布的 ۗ௴୒ 基因序列ᖔ用 ऊቝ୩ࣼᔽᡷᔀऐ 软件设计 ी኏ఋ᥋
香ᖔ 运用实时荧光定量 ۪ऊ኏ ྉ ी኏ఋ᥋۪ऊ኏ɯ 检测 ۪ऊ኏ 引物ྉ 表 ϟɯᤥ 以 ϟऐ୩ ʢ኏શዶ 为内参基因ᖔϟऐ୩
ȣዛԮ԰ܦ᤹ɔࣷ԰ܦࣷ᧣ᧇϟܦۗ௴୒ܦÞۗۗ୒ܦ୒ͅᒦጛ 基因的表达 引物同见表 ϟྉ刘璐等ᖔ԰ԡϟᤃɯᤥ
量ᖔ旨在了解 ᥘᔀȮዶ 对广藿香 Ȯዶ 信号转导途径和 使用 ୩ɟା኏ ᖾ ᥈ʢᔀᔀႿ ۪ʢᔀቝᔽ଴ ۪ʢᆍ ௴ᐹफ ̵୒ ी۪ऊ኏
倍半萜 合 成 途 径 关键基因表达的影响ᖔ 挖掘受 试剂盒ᖔ按照说明书配制 ԰ԡ ဂᓂ 反应体系᧥୩ɟା኏ ᖾ
ᥘᔀȮዶ 调控的基因ᖔ为深入研究广藿香 Ȯዶ 信号转 ᥈ʢᔀᔀႿ ۪ʢᔀቝᔽ଴ ۪ʢᆍ ఋᑕी ̀୩ ۪ʢᔀቝᔽ଴ ϟԡ ဂᓂᖔዹ᧕શዶ ϟ঎ጢ

导途径及倍半萜合成途径的分子机制奠定基础ᤥ ဂᓂᖔ۪ʢᔽቝᔀʢ è ԡ঎ ࿗ ဂᓂᖔ۪ʢᔽቝᔀʢ ኏ ԡ঎ ࿗ဂᓂᖔ ኏શᑕ༁ᔀ ஦ʢᔀᔀ
औᑕᡷᔀʢ Ꭾ঎Ꭾ ဂᓂᤥ ी኏ఋ᥋۪ऊ኏ྉାᔽᆍ᥋኏ᑕʛ ᓂᑕᤦᆍʢᑕᡷᆍʢᔽᔀ༁ᖔ᧧Ⴟዹɯ
ϟজ 材料与方法 反应程序᧥预变性 ँጢ ቩ ܦሕԡ ༁ᖔϟ 个循环ଫ变性 ँጢ

ቩܦጢ ༁ᖔ退火及延伸 ᤃԡ ቩ ܦሕԡ ༁ᖔ࿗ԡ 个循环ᤥ 空白
ϓॹϓ 材料 对照用水代替 ዹ᧕શዶ 模板ᖔ每个样品设三个技术重
选择广东省四会市广藿香植株ᖔ将扦插苗移 复ᖔ复孔间 ࣷᡙ 值的 ୩ఋ᧕ጐԡ঎԰ᤥ
栽至广东药科大学中药学院种植 ϟԡ 个月ᖔ株高约
ँԡ ዹቝᤥ 经广东药科大学中药学院严寒静教授鉴 表 ϓই फቴ௴᤬ۗࣷቴ 引物序列
定为 唇形科刺蕊草 属 植 物 广 藿 香 ྉ ۗᅳ੖ᅳ໧ᡙᓣቂᅳႥ ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ी኏ఋ᥋۪ऊ኏ ᡱʢᔽቝᔀʢ ༁ᔀीࣼᔀႿዹᔀ༁
基因 引物名称 引物序列
ዞᐹᤇᤀᔠႥɯᤥ
᥈ᔀႿᔀ ۪ʢᔽቝᔀʢ Ⴟᑕቝᔀ ۪ʢᔽቝᔀʢ ༁ᔀीࣼᔀႿዹᔀ
ϓॹԣ 用 ᤹ᓣȣዛ 处理广藿香植株
ȣዛԮ԰ ȮዶԻ԰᥋è ऊऊऊዶ᥈ऊఋ᥈ዶऊዶዶఋऊఋఋऊఋዶऊ
选取长势相近且良好的广藿香 ϟᤃ 株ᖔ随机分
ȮዶԻ԰᥋኏ ዶዶఋ᥈ऊऊዶऊఋ᥈ऊఋऊఋ᥈ఋఋఋऊऊ
为两组ᖔ分别是实验组和对照组ᖔ设 ሕ 个生物学重
᤹ɔࣷ԰ ᥘɟऊ԰᥋è ऊऊఋዶዶఋऊ᥈ऊ᥈ఋఋऊዶఋऊዶ᥈ዶऊ
复ᤥ 以 ϟቝᓂ 无水乙醇为溶剂ᖔ配制 ԡ঎ϟԡ ቝቝᆍ᤟ኼ ᥘɟऊ԰᥋኏ ᥈ఋ᥈ऊዶ᥈ዶዶ᥈ዶዶ᥈᥈ఋ᥈ዶዶ᥈ዶ᥈
ᓂ ᥘᔀȮዶ 溶液ᖔ用小喷瓶均匀喷施在广藿香叶片表 ࣷ᧣ᧇϟ ऊᨃ᧧ϟ᥋è ఋఋዶ᥈ዶ᥈ఋዶ᥈ዶ᥈ऊ᥈ఋ᥈᥈᥈᥈ऊఋ
᥋ϟ
面ᖔ直至水滴滴落ᖔ立即用透明塑料膜将植株覆 ऊᨃ᧧ϟ᥋኏ ऊ᥈ዶ᥈ዶऊ᥈ఋዶ᥈ዶऊ᥈᥈ऊऊዶዶዶఋ

盖ᖔϟ঎ጢ ၤ 后移除塑料膜ᤥ 分别于处理后的 ԡܦ԰ܦᤃܦ ୒ͅᒦጛ ୩͐ᓂጶ᥋è ᥈ዶ᥈ዶऊ᥈ऊ᥈ఋఋऊ᥈ఋ᥈ఋዶዶఋዶ᥈
ϟ԰ܦ԰࿗ܦ࿗ऐܦᎮ԰ ၤ 摘取叶片ᖔ用锡纸包裹放入液氮中 ୩͐ᓂጶ᥋኏ ऊऊऊఋऊఋ᥈ዶ᥈ऊዶఋऊዶዶఋऊఋఋऊ
Þۗۗ୒ è۪۪୩᥋è ዶ᥈᥈ఋऊऊऊఋዶዶ᥈᥈ఋఋ᥈᥈ఋዶఋ᥈
速冻 ԡ঎ጢ ၤ 后ᖔ放入ͱऐԡ ቩ 冰箱保存ᖔ用于总 ኏શዶ
提取ᤥ 以 ϟቝᓂ 无水乙醇按照同倍数稀释后喷施 è۪۪୩᥋኏ ᥈᥈ዶዶऊఋऊऊዶऊऊఋऊዶఋఋ᥈ዶዶऊ
ۗ௴୒ ۪ఋ୩᥋è ዶఋఋऊዶ᥈ఋऊऊ᥈ዶዶऊዶऊఋఋ᥈ዶ᥈
于广藿香为对照组ᤥ
᥋ϟ ۪ఋ୩᥋኏ ᥈ዶዶऊዶ᥈᥈᥈ఋ᥈ዶዶ᥈᥈ఋዶऊዶዶऊ
ԡ঎԰ጢ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ᥘᔀȮዶ 溶液处理方法同上ᤥ
ϓॹᇺ 广藿香总 ቴટዛ 提取及 ዞᦵટዛ 第一链合成 ϟऐ୒ ϟऐ୩᥋è ఋऊዶዶऊऊዶఋዶዶዶऊ᥈ዶఋ᥈ऊऊ᥈ዶऊऊ
ϟऐ୩᥋኏ ఋఋఋऊዶ᥈ऊऊఋఋ᥈ऊ᥈ዶऊऊዶఋዶऊఋऊऊ
使用 ఋ኏᧧ ᡱࣼʢᔀ ኏ᔀᑕ੫ᔀႿᡷ 和 ኏શዶ ᡱʢᔀᡱ ۪ࣼʢᔀ ۪᤟ᑕႿᡷ
试剂盒ᖔ按照说明书提取广藿香总 ኏શዶᖔ用 ϟᠮ琼
脂糖凝胶电泳检测其完整性ᖔ超微量紫外分光光 ϓॹጇ 数据分析
ͱ ᪵᪵ ࣷᡙ
度计 В჆԰࿗ጢԡ 测定其浓度和纯度ᖔ将 ኏શዶ 放入ͱऐԡ 采用 ԰ 法计算基因相对表达量ྉ ᓂᔽ׹ᑕҴ ᪲
ቩ 冰箱保存ᤥ 从冰箱取出 ኏શዶᖔ测定其浓度和纯 ୩ዹၤቝᔽᡷᡷ੫ᔀႿᖔ ԰ԡԡϟ ɯᤥ ᪵ࣷᡙ 处理 ᢉ ࣷᡙ 处理 ͱ ࣷᡙ 内参ྉ处理ɯ ଫ
度ᖔ计算用于反转录的 ኏શዶ 量ᖔ使用 ጛצᅳ ᤹᤬᤹ᒦႬ ᪵ࣷᡙ 对照 ᢉ ࣷᡙ 对照 ͱࣷᡙ 内参ྉ对照ɯ ଫ᪵᪵ࣷᡷ ᢉ ᪵ࣷᡙ 处理 ͱ᪵ࣷᡙ 对照 ଫ