Page 74 - 《广西植物》2021年第5期
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Ꭾ ࿗ ԡ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
展盆栽试验ᖔ寻找可作为研发微生物肥料的潜在功 为模拟野外自然状态下的接种环境ᖔ试验土壤不
能菌株ᖔ为加快广西石漠化地区植被恢复和生态治 进行灭菌ᖔ以未接种处理作为对照ᤥ
理提供技术支持ᤥ 将筛选纯化的菌株接种至 ᓂା 液体培养基中ᖔ
摇床培养ྉሕԡ ቩ ܦϟऐԡ ʢኼቝᔽႿ ɯ 至对数期ᤥ 用注射
᥋ϟ
ϟজ 材料与方法 器进行灌根接种ᖔ每 ϟጢ ʛ 接种 ϟ 次ᖔ使得接种最终
浓度达到 ϟԡ ऊèВኼ੫ ᖔ以接种等量无菌水为对照
᥋ϟ
ᤃ
ϓॹϓ 样品采集 处理ᤥ 苗木接种 ँԡ ʛ 后分别测定植株叶绿素ܦ地
植物根际土壤ྉ 分别为火龙果ܦ青冈栎ܦ茶条 上地下生物量ܦ养分含量ᤥ
木ܦ蒜头果ܦ降香黄檀和芦竹根际土ɯ 采集自平果 ϓॹጇ 测定方法
县果化镇石漠化治理示范区ᖔ土壤样品装入无菌 用钢卷尺测定植株株高ଫ叶面积仪ྉᓂ᧧᥋ሕԡԡԡዶɯ
袋中运回实验室ᖔ筛出碎石等杂物后在 ࿗ቩ 冰箱 测定叶片面积ଫ植株于 ϟԡጢ ቩ 杀青 ϟԡ ቝᔽႿ 后ᖔऐԡ ቩ
暂存ᖔ用于后续筛选固氮菌株ᤥ 烘干至恒重后测定干重ྉ地上部ܦ根系ɯଫ采用便携
ϓॹԣ 固氮菌株的分离与固氮酶活性测定 式叶绿素测定仪 ୩۪ዶ᧕᥋ጢԡ 测定叶绿素相对值ଫ采
称取 ϟԡ ੫ 土壤样品ᖔ放置盛有 ϟԡԡ ቝᓂ 无菌水 用 ̀ ୩ᨃ ᥋̀ ᨃ 消煮法ܦ钒钼黄比色法ܦ火焰光度法
࿗
的三角瓶中ᖔ振荡 ϟԡ ቝᔽႿྉऐ ቩܦϟᎮԡ ʢኼቝᔽႿ ɯᖔ得 测定植株氮ܦ磷ܦ钾含量ྉ鲍士旦ᖔԡԡԡɯᤥ
᥋ϟ
到根际土壤悬浮液ᤥ 采用梯度稀释法ྉ赵斌和何绍 ϓॹᣤ 数据处理
江ᖔԡԡɯᖔ得到不同稀释度的土悬液ᖔ涂布在固氮 采用 ጶዹᔀ ԡϟԡ 和 ୩۪୩୩ ϟሕ 对数据进行统计
培养基上进行菌株的分离ᖔ并采用平板划线法ྉ赵 分析ଫ利用 ᨃʢᔽ੫ᔽႿ ऐጢ 软件作图ᖔᥘᔀ੫ᑕ ጢԡ 绘制系
斌和何绍江ᖔԡԡɯ 纯化菌株ᤥ 菌株固氮酶的活性 统发育树ᤥ
采用乙炔还原法进行测定ྉ۪ᔽʢᆍቝᢃᆍࣼ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟϟɯᤥ
ϓॹᇺ ϓᣤ ʗᦵટዛ 基因系统发育分析 জ 结果与分析
将筛选的菌株 ᧕શዶ 利用通用引物 Ꭾèᣰ ϟ࿗ँ
进行基于 ϟᤃ୩ ʢ᧕શዶ 的基因扩增ᖔ۪ऊ 反应体系为 ԣॹϓ 广西石漠化地区根际土壤固氮菌筛选及其固
ጢ ဂᓂᖔ其中模板 ᧕શዶ ϟ ဂᓂᖔ引物各 ϟဂᓂᖔġጶ୩ ఋᑕी 氮酶活性
ᥘᑕ༁ᡷᔀʢᥘᔽ ϟጢ ဂᓂᖔ超纯水 ँጢ ဂᓂᤥ ۪ऊ 反应程序᧥ 从石漠化乡土植物根际土壤样品中共分离纯
ँ࿗ ቩ预变性 ቝᔽႿᖔँ࿗ቩ变性 ሕԡ ༁ᖔጢጢ ቩ退火 ሕԡ ༁ᖔ 化得到具有固氮 能 力 的 菌 株 ᤃ 株ᖔ 分别标记为
Ꭾ ቩ延伸 ϟቝᔽႿᖔሕጢ 个循环ᤥ۪ऊ 产物纯化后交由 ᥈શ᥋ᓂԻܦ ᥈શ᥋Ȯᣮ̀ఋܦ ᥈શ᥋୩ఋ᥈᥋ϟܦ ᥈શ᥋୩ఋ᥈᥋ܦ ᥈શ᥋͐᥈ᓂ
上海生工生物工程股份有限公司进行测序ᖔ将测序 和 ᥈શ᥋ऊఋᥘᤥ 部分菌株在培养基中的生长情况如
结果 在 શऊା᧧ ྉ શᑕᡷᔽᆍႿᑕ ऊᔀႿᡷᔀʢ ᆍʢ ାᔽᆍᡷᔀዹၤႿᆍᆍ੫ᢃ 图 ϟ 所示ᤥ 通过 ϟᤃ୩ ʢ᧕શዶ 基因序列分析ᖔ结果表
ᔽႿᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿɯ中进行同源序列比较分析ᤥ 明分离得到的石漠化地区固氮菌株共分为三类ᖔ
ϓॹ 盆栽试验 其中᧥᥈શ᥋ᓂԻܦ᥈શ᥋Ȯᣮ̀ఋ 和 ᥈શ᥋୩ఋ᥈᥋ϟ 属于根瘤菌
试验在广西植物研究所温室大棚中进行ᖔ供 属ྉቴ၊ᔠऊᅳᤇᔠࣩቂɯଫ᥈શ᥋୩ఋ᥈᥋ 和 ᥈શ᥋͐᥈ᓂ 属于中华根
试植物 为 ࿗ 种 石 漠化地区造林苗木幼苗᧥ 香樟 瘤菌 属 ྉ ᔠႥᅳʗ၊ᔠऊᅳᤇᔠࣩቂɯଫ ᥈શ᥋ऊఋᥘ 属于黄杆菌属
ྉࣷᔠႥႥᐹቂᅳቂࣩቂ ዞᐹቂᡓ၊ᅳʗᐹɯܦ任豆ྉԮᓣႥᔠᐹ ᔠႥᔠႥᔠɯܦ喜 ྉÞᤀᐹצᅳᤇᐹዞᡙᓣʗᔠࣩቂɯྉ图 ɯᤥ
树ྉ ࣷᐹቂᡓᡙᅳᡙ၊ᓣዞᐹ ᐹዞࣩቂᔠႥᐹᡙᐹɯ 以及台湾相思ྉ ዛዞᐹዞᔠᐹ 固氮酶活性测定如表 ϟ 所示ᖔ各菌株固氮酶活
ዞᅳႥஏࣩᐹɯᤥ 供试土壤采集自平果县果化镇石漠化 性差 异 较 大ᖔऊ ̀ 的产生量介于 ϟጢँ ϟ ጲ ࿗ԡጢ ࿗
࿗
治理示范区ᖔ为碳酸岩发育土壤ᖔ基本理化性质如 Ⴟቝᆍኼ ቝᓂ ኼၤ 之间ᤥ᥈શ᥋ᓂԻܦ ᥈શ᥋Ȯᣮ̀ఋ 和 ᥈શ᥋
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下᧥有机 质 Ꭾ ሕጢ ੫ኼ Ҵ੫ ᖔ 全氮 ϟ ऐ ੫ ኼ Ҵ੫ ᖔ 全磷 ୩ఋ᥈᥋ϟ 的固氮酶活性高于另外 ሕ 株ᖔ分别为 ሕᤃऐऐܦ
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ԡᤃԡ ੫ኼ Ҵ੫ ᖔ全钾 ᤃ ੫ ኼ Ҵ੫ ᖔ 碱解氮 Ꭾ ቝ੫ ኼ ሕጢ࿗ऐ 以及 ࿗ԡጢ࿗ Ⴟቝᆍኼቝᓂ ኼၤ ᖔ测序结果表明
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Ҵ੫ ᖔ速效磷 ࿗ँ ቝ੫ኼҴ੫ ᖔ速效钾 ࿗Ꭾऐ ቝ੫ኼҴ੫ ᤥ 这 ሕ 株固氮菌属于根瘤菌属ྉቴ၊ᔠऊᅳᤇᔠࣩቂɯᤥ
