Page 170 - 《广西植物》2021年第7期

Ꭾ 期 颜桢灵等᧥ 柑橘内生真菌的分离鉴定及其发酵产物对柑橘溃疡病菌的抑制活性 ϟ ϟ ँ ँ
ྉ԰ጢԡ ቝᓂɯ中ᖔ置于恒温摇床上ᖔྉ԰ऐōϟɯቩ ܦϟጢԡ ʢኼ 对于有活性的内生真菌发酵物ᖔ进一步测定其最
ቝᔽႿ 震荡培养ᤥ 培养 ሕጲጢ ʛ 后ᖔ即可得到发酵种 低抑制浓度ྉᥘ᧧ऊɯᖔ配制系列梯度浓度药液ᖔ按照
᥋ϟ
子液ᤥ 取 ጢቝᓂ 种子液接种于事先准备好的大米 如上方法操作ᖔ以病原菌不生长的最小浓度为最
固体培养基ᖔ放置培养箱中ᖔྉ԰ऐōϟɯቩ 培养 ᤃԡ ʛᤥ 低抑制浓度ᤥ
将发酵好的产物进行干燥ܦ粉碎处理ᖔ用适量
乙酸乙酯浸泡提取 ሕ 次ᖔ真空抽滤ᖔ合并 ሕ 次提取 ԰জ 结果与分析
滤液ᖔ用旋转蒸发仪浓缩蒸干ᖔ即得到内生真菌发
酵产物的乙酸乙酯粗提物ᤥ ԣॹϓ 柑橘内生真菌的定殖率和分离率
ϓॹᣤ 抑菌活性测定 从不同柑橘品种的叶片和枝条中总共分离得
采用带毒平板涂布法ྉ 慕立义ᖔϟँँ࿗ɯᖔ用丙 到 Ꭾ԰ 株内生真菌ྉ 表 ϟɯᤥ 其中ᖔ从温州蜜柑中分
酮将样品溶解配制成药液ᖔ将药液与热熔冷却至 离得到 ጢԡ 株ᖔ包括叶片 ࿗ԡ 株ܦ枝条 ϟԡ 株ᤥ 从桂林
ጢԡ ጲ ጢጢ ቩ 的牛肉膏培养基按 ϟᨒ ँ 混合均匀后ᖔ倒 采集的沙糖桔中分离得到 Ꭾ 株ᖔ包括叶片 ࿗ 株ܦ枝
入 ᤃዹቝ 培养皿ྉ每皿 ጢቝᓂɯᖔ对照组以丙酮纯溶剂 条 ሕ 株ᤥ 从梧州采集的沙糖桔中分离得到 ϟጢ 株ᖔ
代替药液ᤥ 待凝固后ᖔ吸取 ጢԡ ဂᓂ 柑橘溃疡病菌 包括叶片 ԰ 株ܦ枝条 ϟሕ 株ᤥ 不同采集地的柑橘抗
悬浮液ྉ浓度约 ϟԡ ጲϟԡ ዹ஦ࣼኼቝᓂ ɯ 至培养基表 病品种的不同组织中内生真菌数量变化有所不
Ꭾ
᥋ϟ
ᤃ
面ᖔ用无菌涂布棒涂布均匀ᤥ 每处理设 ሕ 个重复ᖔ 同ᖔ采自桂林的柑橘抗病品种的叶片中内生真菌
置于ྉ԰ऐōϟɯቩ 恒温培养 Ꭾ԰ ၤᖔ观察和记录细菌生 数量均高于枝条ᖔ而在采自梧州的柑橘抗病品种
长情况ᖔ以ᥥ շɼ代表有菌生长ᖔᥥ ͱɼ 代表无菌生长ᤥ 中ᖔ则为叶片中内生真菌数量低于枝条ᤥ

表 ϓই 不同柑橘样品叶片和枝条中分离内生真菌数量
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ શࣼቝᤦᔀʢ ᆍ஦ ᡷၤᔀ ᔀႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔽዹ ஦ࣼႿ੫ᔽ ᔽ༁ᆍ᤟ᑕᡷᔀʛ ஦ʢᆍቝ ᡷၤᔀ ᤟ᔀᑕ׹ᔀ༁ ᑕႿʛ ᡷऔᔽ੫༁ ᆍ஦ ʛᔽ஦஦ᔀʢᔀႿᡷ ዹᔽᡷʢࣼ༁ ዹࣼ᤟ᡷᔽ׹ᑕʢ༁

菌株数量
经纬度 શࣼቝᤦᔀʢ ᆍ஦ ᡷၤᔀ ᔽ༁ᆍ᤟ᑕᡷᔀ༁
宿主 采集地 总计
ᓂᆍႿ੫ᔽᡷࣼʛᔀ ᑕႿʛ
̀ᆍ༁ᡷ ऊᆍ᤟᤟ᔀዹᡷᔽᆍႿ ᡱ᤟ᑕዹᔀ ఋᆍᡷᑕ᤟
᤟ᑕᡷᔽᡷࣼʛᔀ 叶片 枝条
ᓂᔀᑕ஦ ఋऔᔽ੫
温州蜜柑 广西桂林七星区 ϟϟԡ๼ϟँࣕ࿗࿗× ጶ ࿗ԡ ϟԡ Ꭾ԰
ࣷᔠᡙʗࣩ໧ ࣩႥ໧၊ᔠࣩ ᥘᑕʢዹ঎ ͐ᔽ଴ᔽႿ੫ ᧕ᔽ༁ᡷʢᔽዹᡷᖔ ᥈ࣼᔽ᤟ᔽႿᖔ ᥈ࣼᑕႿ੫଴ᔽ ԰ጢ๼ϟᤃࣕϟሕ× શ
沙糖桔 广西桂林象山区 ϟϟԡ๼ϟᤃࣕሕᤃ× ጶ ࿗ ሕ
ࣷॹ ʗᓣᡙᔠዞࣩᤀᐹᡙᐹ ା᤟ᑕႿዹᆍ ዹ׹঎ ୩ၤᑕᡷᑕႿ੫ᢼࣼ ᣮᔽᑕႿ੫༁ၤᑕႿ ᧕ᔽ༁ᡷʢᔽዹᡷᖔ ᥈ࣼᔽ᤟ᔽႿᖔ ᥈ࣼᑕႿ੫଴ᔽ ԰ጢ๼ϟϟࣕጢ× શ
沙糖桔 广西梧州苍梧县 ϟϟϟ๼ϟࣕϟऐ× ጶ ԰ ϟ ሕ
ࣷॹ ʗᓣᡙᔠዞࣩᤀᐹᡙᐹ ା᤟ᑕႿዹᆍ ዹ׹঎ ୩ၤᑕᡷᑕႿ੫ᢼࣼ ऊᑕႿ੫औࣼ ऊᆍࣼႿᡷᢃᖔ ۼࣼझၤᆍࣼᖔ ᥈ࣼᑕႿ੫଴ᔽ ԰ሕ๼԰ँࣕ࿗ᤃ× શ

ԣॹԣ 柑橘内生真菌的鉴定 ྉዛࣩʗᓣᅳᤇᐹ໧ᔠʐᔠࣩቂɯܦ枝孢属ྉࣷᤀᐹʐᅳ໧ᡓᅳʗᔠࣩቂɯܦ刺盘孢属
根据菌株菌落形态ܦ颜色ܦ生长速度ܦ边缘形 ྉࣷᅳᤀᤀᓣᡙᅳᡙʗᔠዞ၊ࣩቂɯܦ 棒孢属 ྉ ࣷᅳʗᡥႥᓣ໧ᡓᅳʗᐹɯܦ 弯孢 霉 属
状ܦ基质颜色以及显微结构ᖔ将菌株归为 ԰ 门ྉ子囊 ྉ ࣩࣷʗצࣩᤀᐹʗᔠᐹ ɯܦ 间座壳属 ྉ ᦵᔠᐹᡓᅳʗᡙ၊ᓣɯܦ 附球菌 属
菌门和担子菌门ɯܦϟ࿗ 属ྉ表 ԰ɯᤥ 其中担子菌门仅 ྉጛᡓᔠዞᅳዞዞࣩቂɯܦ 镰刀菌 属 ྉ Þࣩ໧ᐹʗᔠࣩቂɯܦ 小球腔菌属
含 ϟ 科 ϟ 属ᖔ其余均归为子囊菌门ᤥ 选取 ሕԡ 株代表 ྉ ᒦᓣᡓᡙᅳ໧ᡓ၊ᐹᓣʗᔠᐹ ɯܦ 炭垫菌属 ྉ ટᓣቂᐹႥᔠᐹ ɯܦ 黑孢属
菌株进行分子鉴定ᖔ将其 ᧧ఋ୩ 序列在 ᥈ᔀႿାᑕႿҴ 中进 ྉટᔠ੖ʗᅳ໧ᡓᅳʗᐹɯܦ球座菌属 Џᤩࣩᔠ੖Ⴅᐹʗʐᔠᐹ ྉۗ၊ᡥᤀᤀᅳ໧ᡙᔠዞᡙᐹɯ૒ܦ
行 ାᓂዶ୩ఋ 比对ᖔ选取相似度最高的已知属种的序 裂褶菌属ྉ୒ዞ၊ᔠऊᅳᡓ၊ᡥᤀᤀࣩቂɯᤥ
列ᖔ采用 ᥘጶ᥈ዶ ᣮ 软件以 શȮ 法构建系统进化树ྉ图 分子鉴定结果与形态鉴定基本一致ᤥ 其中ᖔ
ϟɯᖔ分析其同源性ᤥ 基于 ᧧ఋ୩ 序列的 ାᓂዶ୩ఋ 比对结 在系统进化树中ᖔ内生真菌 ᓂȮԻ᥋Ȯ᥋࿗ܦۼԻᥘ᥈᥋ɟ᥋԰࿗
果与系统进化同源性分析ᖔ结合形态学特征ᖔሕԡ 株 和 ۼԻᥘ᥈᥋ɟ᥋࿗ 所聚集的分支包含 ᤩࣩᔠ੖Ⴅᐹʗʐᔠᐹ
内生鉴定结果及 ᥈ᔀႿାᑕႿҴ 序列号如表 ሕ 所示ᖔ包含 ቂᐹႥ੖ᔠஏᓣʗᐹᓣྉ有性型ɯ和 ۗ၊ᡥᤀᤀᅳ໧ᡙᔠዞᡙᐹ ዞᐹᡓᔠᡙᐹᤀᓣႥ໧ᔠ໧ྉ无性
ϟ࿗ 个属᧥ 链格孢属 ྉ ዛᤀᡙᓣʗႥᐹʗᔠᐹ ɯܦ 短梗霉属 型ɯᤥ 对于菌株 ᓂȮԻ᥋Ȯ᥋࿗ 和 ۼԻᥘ᥈᥋ɟ᥋԰࿗ᖔ 它们的分