Page 34 - 《广西植物》2021年第7期
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Ꭾ 期 刘 扬 等 ᧥ 黔产钩藤茎ܦ叶化学成分及抗肿瘤活性研究 ϟ ԡ ᤃ ሕ
ᓂ̀ͱԡ ྉᥘጶऊ 公司ɯᖔ低温离心机ྉାጶऊᥘዶશ 公 正丁醇各萃取 ሕ 次ᖔ再减压回收溶剂ᤥ 分别获得
司ɯᖔ细胞培养瓶ྉશጶ୩ఋɯᖔ超净工作台ྉ ఋၤᔀʢቝᆍ 公 石油醚部位浸膏ྉጢԡ ੫ɯᖔ乙酸乙酯部位浸膏 ँϟԡ
司ɯᖔ移液管ྉèᔽ༁ዹၤᔀʢɯᖔ离心管ྉશጶ୩ఋɯᖔ细胞培养皿 ੫ᖔ正丁醇部位浸膏 ሕሕԡԡ ੫ᤥ 称取钩藤叶乙酸乙酯
ྉશጶ୩ఋɯᖔ高压灭菌锅ྉ上海申博化工有限公司ɯᤥ 部位的浸膏ྉँϟԡ ੫ɯᖔ加入适量的有机溶剂ᖔ使其
试剂᧥甲醇ܦ乙醇ܦ石油醚ྉ上海泰坦科技股份 充分溶解ᖔ称 ᤃԡ ጲ ऐԡ 目的硅胶约为 ጢԡԡԡ ੫ 拌样ᖔ
有限公 司ɯᖔ多功能酶标仪 ྉ᥈ᔀႿᔀ 公司ɯᖔఋʢᢃᡱ༁ᔽႿ 称 ሕԡԡ ጲ ࿗ԡԡ 目的硅胶约 ሕҴ੫ 进行柱层析分离ᖔ用
ྉ᥈ᔽᤦᔽዹᆍɯᖔ双抗ྉ 青霉素 շ链霉素ɯᖔᥘఋఋྉ ୩ᔽ੫ቝᑕɯᖔ ྉ氯仿᥋甲醇 ϟԡԡ ᨒ ϟ ܀ ԡᨒ ϟɯ进行梯度洗脱ᤥ 每次
ᥘऊ᧧ ᥈ጶᓂ ऊ۪̀ԡ۪ྉ日本三菱化学公司ɯᤥ 接馏分约为 ऐԡԡ ቝᓂᖔ减压浓缩ᖔ用薄层色谱展开ᖔ
材料由贵州省丹寨县兴仁镇昌昊金煌ྉ 贵州ɯ 将相似组分合并ᤥ 将氯仿的萃取部分总共分成 ϟϟ
中药有限公司种植基地提供ᖔ经贺定翔中药师鉴 段ྉèʢϟ ጲ èʢϟϟɯᤥ 把第 èʢሕ 段ྉሕԡ ੫ɯ 经 ᥘऊ᧧ 柱
定为茜草科ྉ ࣼᤦᔽᑕዹᔀᑕᔀɯ 钩藤属ྉ ІႥዞᐹʗᔠᐹ ୩ዹၤʢᔀᤦɯ 层析ྉ甲醇᥋水 ԡ ᨒ ऐԡ ܀ϟԡԡ ᨒ ԡɯ 洗脱ᖔ共分为 ᤃ
钩藤ྉІႥዞᐹʗᔠᐹ ʗ၊ᡥႥዞ၊ᅳᡓ၊ᡥᤀᤀᐹɯ的茎枝及叶ᤥ 段ᤥ 把 èʢሕ᥋ϟྉऐԡϟ ቝ੫ɯ 段用硅胶柱洗脱ྉ 石油
ϓॹԣ 提取和分离 醚᥋乙酸乙酯 ԡ ᨒ ϟ ܀ ጢᨒ ϟɯᖔ得化合物 ࣽ ྉԡ ԡ
干燥钩藤的茎 ϟጢԡ Ҵ੫ᖔ粉碎后用浓度为 ँԡᠮ ቝ੫ɯᖔ࣮ྉϟጢ ቝ੫ɯᤥ èʢ࿗ 段ྉᤃԡ ੫ɯ 经硅胶柱梯度
的乙醇ྉ每次 ጢԡ ᓂɯ 加热回流提取 ሕ 次ᖔ合并提取 洗脱ྉ石油醚᥋乙酸乙酯 ϟԡԡ ᨒ ϟ܀ ϟԡ ᨒ ϟɯᖔ共分为
液ᖔ减压蒸馏浓缩除去有机溶剂后得粗提物ᤥ 用 Ꭾ 段ྉèʢ࿗᥋ϟጲ èʢ࿗᥋Ꭾɯᤥ èʢ࿗᥋ጢྉϟጢ ੫ɯ 段经硅胶柱
浓度为 ጢᠮ的盐酸溶解浸膏ᖔ过滤得到滤液ଫ用饱 洗脱ྉ石油醚᥋乙酸乙酯 ϟԡ ᨒ ϟɯᖔ得化合物 ϓԔྉऐԡ
和氢氧化钠溶液调节滤液的 ᡱ̀ᖔ使其至 ᡱ̀ ᢉ ँଫ分 ቝ੫ɯᖔϓϓྉጢԡ ቝ੫ɯᤥ 将 èʢ࿗᥋Ꭾྉᤃԡ࿗ ቝ੫ɯᖔ经甲醇
别用氯仿萃取 ࿗ 次ᖔ合并氯仿层ᖔ减压回收溶剂ᖔ 重结晶ᖔ得化合物 ϓԣྉᤃϟ ቝ੫ɯᤥ èʢᤃ 段ྉጢԡ ੫ɯ 经
得氯仿层 ԡԡԡ ੫ᤥ 取氯仿部位浸膏 ԡԡԡ ੫ᖔ加适 硅胶 柱梯度洗 脱 ྉ 石油醚᥋乙酸乙酯 ጢԡ ᨒ ϟ ܀
量溶剂溶解ᖔ用 ᤃԡ ጲ ऐԡ 目ܦ质量约为 ሕጢԡԡ ੫ 的硅 ϟԡ ᨒ ϟɯᖔ共分为 ँ 段ྉèʢᤃ᥋ϟጲ èʢᤃ᥋ँɯᤥ èʢᤃ᥋࿗ྉϟᤃ
胶拌样ᖔ经 ሕԡԡ ጲ ࿗ԡԡ 目ܦ质量约为 ԡ Ҵ੫ 的硅胶进 ੫ɯ段经 ୩ᔀᡱၤᑕʛᔀ ᓂ̀᥋ԡ 凝胶柱ྉ 甲醇᥋氯仿 ϟᨒ ϟɯ
行柱层析ᖔ用ྉ氯仿᥋甲醇 ϟԡԡ ᨒ ϟ ܀ ԡᨒ ϟɯ 进行梯 洗脱ᖔ 得到化合 物 ϓᇺ ྉ ᤃሕ ቝ੫ɯᤥ èʢᤃ᥋ँ ྉ ऐԡሕ
度洗脱ᤥ 每次接馏分约为 ऐԡԡ ቝᓂᖔ减压浓缩回收 ቝ੫ɯ 段经 ୩ᔀᡱၤᑕʛᔀ ᓂ̀᥋ԡ 凝胶柱 ྉ 甲醇᥋氯仿
溶剂ᤥ 将浓缩后的组分用薄层色谱ྉ ఋᓂऊɯ 展开ᖔ ϟᨒ ϟɯ洗脱ᖔ后经高效液相半制备分离ᖔ得化合物
分别观察组分在紫外灯下的荧光显色和浓度为 ϓྉᤃሕ ቝ੫ɯܦϓጇྉᤃ ቝ੫ɯ 和 ϓᣤྉሕԡ ቝ੫ɯᤥ èʢᎮ 段
ጢᠮ磷钼酸的显色情况ᖔ合并相似的部分ᖔ一共分 ྉᤃԡ ੫ɯ经 ᥘऊ᧧ 柱层析ྉ甲醇᥋水 ሕԡ ᨒ Ꭾԡ܀ ϟԡԡ ᨒ ԡɯ
成 ँ 段ྉèʢϟ ጲ èʢँɯᤥ 第 èʢ 段ྉጢԡ ੫ɯ经 ᥘऊ᧧ 柱 后ᖔ再通过反复硅胶柱梯度洗脱ྉ 石油醚᥋乙酸乙
层析ྉ甲醇᥋水 ԡ ᨒ ऐԡ ܀ ϟԡԡ ᨒ ԡɯ 洗脱分为 ᤃ 段ᤥ 酯 ԡ ᨒ ϟ܀ ԡᨒ ϟɯ和 ୩ᔀᡱၤᑕʛᔀ ᓂ̀᥋ԡ 凝胶柱ྉጢԡᠮ
èʢ᥋ϟྉጢԡጢ ቝ੫ɯ反复经过硅胶柱梯度洗脱ྉ 石油 甲醇ɯ分离以及半制备高效液相分离ᖔ得化合物 ϓ᎒
醚᥋乙酸乙酯 ϟԡ ᨒ ϟ ܀ ϟᨒ ϟɯᖔ得化合物 ϓྉᤃԡ ቝ੫ɯ ྉጢϟ ቝ੫ɯܦϓࣽྉԡሕ ቝ੫ɯܦϓ࣮ྉऐ ቝ੫ɯᤥ
和 ԣྉᎮԡ ቝ੫ɯᤥ 将 èʢ᥋ᤃྉ࿗ԡሕ ቝ੫ɯ进行重结晶后 ϓॹᇺ 抗肿瘤活性实验
得化合物 ᇺྉጢԡ ቝ੫ɯᤥ 将 èʢ᥋ጢྉϟሕ ੫ɯ 部分经过 采用 ᥘఋఋ 法测定钩藤茎ܦ叶中化合物对人白
反复硅胶柱层析及半制备高效液相色谱分离后得 血病细胞株 ጢᤃܦ̀ጶᓂ 的增殖抑制作用ᤥ 选用对
化合 ྉሕ ቝ੫ɯ和 ጇྉᤃԡ ቝ੫ɯᤥ 将 èʢሕྉ࿗ԡ ੫ɯ 经 数期细胞ᖔ选用 ϟԡᠮ小牛血清的 ۪ᥘ᧧ϟᤃ࿗ԡ 培养基
୩ᔀᡱၤᑕʛᔀ ᓂ̀᥋ԡ 凝胶柱ྉ甲醇᥋水 ϟᨒ ϟɯܦ硅胶柱梯 配制细胞悬液ᤥ 接种于 ँᤃ 孔板ᖔ使每孔细胞 为
度洗脱ྉ石油醚᥋乙酸乙酯 ऐᨒ ϟ ܀ ᨒ ϟɯ 的过程ᖔ ऐ ԡԡԡ个ᖔ将 ँᤃ 孔板置于 ጢᠮ ऊᨃ 培养箱中ᖔ过夜ᖔ
再经过半制备高效液相分离ᖔ 得化合物 ᣤ ྉϟጢ ሕ 待细胞完全适应环境ᤥ 将待测化合物用 ᧕ᥘ୩ᨃ 配
ቝ੫ɯ和 ᎒ྉ࿗ԡ ቝ੫ɯᤥ 成 ጢ 个浓度梯度的培养基ᤥ 阳性对照用紫杉醇ᖔ
干燥钩藤的叶 Ꭾጢ Ҵ੫ᖔ粉碎后ᖔ用 ँԡᠮ 的乙醇 阿霉素ᖔ长春新碱ᖔ顺铂和 ጢ᥋氟尿嘧啶配置成等浓
ྉ每次 ጢ ᓂɯ 回流提取 ሕ 次ᖔ合并提取液ᤥ 减压蒸 度梯度ᤥ 阴性对照为等体积 ԡጢᠮ ᧕ᥘ୩ᨃ 的培养
馏浓缩除去有机溶剂后得粗提物ᖔ将得到的总浸 基ᖔ每组设 ጢ 个复孔ᤥ 加药后ᖔ培养 ࿗ऐ ၤᤥ 离心去
᥋ϟ
膏加入适量的水混悬ᤥ 依次用石油醚ܦ乙酸乙酯ܦ 除上清液ᖔ加入 ጢቝ੫ኼቝᓂ ᥘఋఋ 的培养基ᤥ 在 ሕᎮ ቩᖔ
