Page 131 - 《广西植物》2022年第11期
P. 131
ϟϟ 期 林佳琦等᧥ 矮化香蕉及其野生型 ᤩዛሕᅳଝ 基因的结构特点和表达分析 ϟ ँ ሕ
表达特点与香蕉茎杆矮化的关系是揭示香蕉矮化 延伸 ϟԡ ቝᔽႿᖔ࿗ ቩ 保存ᤥ 扩增产物经 ϟᠮ琼脂糖凝
变异分子机制的重要内容ᖔ对于挖掘调控香蕉株 胶电泳检测正确后ᖔ使用 ୩ᑕႿ۪ʢᔀᡱ 柱式 ᧕શዶ 胶回
高关键基因及其应用具有重要的研究意义ᤥ 在矮 收试剂盒将目的片 段 回 收 纯 化ᖔ 将回收产物与
化变异的香蕉突变体苗期ᖔ其假茎 ᥈ዶϟ 和 ᥈ዶሕ 含 ۪Вऊ᧧᥋ାࣼႿᡷ 克隆载体相连接后ᖔ送至上海生工生
量显著低于野生型亲本ᖔ并且外源 ᥈ዶሕ 和吲哚᥋ሕ᥋ 物公司测序ᤥ
乙酸ྉᔽႿʛᆍᔀ᥋ሕ᥋ᑕዹᔀᡷᔽዹᖔ᧧ዶዶɯ能使其株高恢复到野生 ϟ ᤩዛሕᅳଝ 基因表达分析জ 利用 ीఋ᥋۪ऊ 分析
型高度ྉ 陈晶晶等ᖔԡϟ࿗ᤦɯᤥ 但是ᖔ香蕉的矮化变 ᤩዛሕᅳଝ 基因在矮化突变体及野生型香蕉不同组织
异是否与 ᤩዛሕᅳଝ 基因的结构和表达水平改变有 中的表达模式ᤥ 分别采集矮化香蕉和野生型香蕉
关ᖔ目前尚未见有研究报道ᤥ 第 ϟԡ 片ܦ第 ϟጢ 片ܦ第 ԡ 片ܦ第 ጢ 片叶龄期嫩叶及
本研究以威廉斯 ାᤃ 矮化突变体及其野生型 对应 时期的假茎ᖔ 液氮速冻后提取 શዶଫ 利用
亲本为材料ᖔ通过 ఋ᥋۪ऊ 技术克隆得到矮化香蕉 ۪ʢᔽቝᔀ୩ዹʢᔽᡱᡷ ఋᥘ ఋ ʢᔀᑕ੫ᔀႿᡷ ᔽᡷ औᔽᡷၤ ੫᧕શዶ ጶʢᑕ༁ᔀʢ
及其野生型亲本 ᤩዛሕᅳଝ 基因的全长 ዹ᧕શዶ 序列ᖔ并 将 શዶ 转化为 ዹ᧕શዶᖔ 并根据克隆得到的矮化
利用 ीఋ᥋۪ऊ 技术对 ᤩዛሕᅳଝ 基因在不同组织中的 香蕉和野生型香蕉的 ᤩዛሕᅳଝ 全长 ዹ᧕શዶ 序列设计
表达差异进行分析ᤥ 拟探讨以下问题᧥ྉϟɯ 矮化香 特异性引物ᖔ 此引物序 列 为 ᥈ዶሕᆍ᥋ीè᧥ ጢࣕ᥋
蕉和野生型香蕉 ᥈ዶሕᆍ 蛋白同源性ܦ理化性质分 ऊఋ᥈᥈ዶఋऊዶऊ᥈ऊऊऊఋऊዶዶ᥈ऊఋऊ᥋ሕࣕ和 ᥈ዶሕᆍ᥋ी᧥ጢࣕ᥋
析ଫྉɯ矮化香蕉和野生型香蕉 ᥈ዶሕᆍ 氨基酸序列 ఋऊዶዶऊఋ᥈ऊዶዶऊዶऊ᥈᥈ऊ᥈᥈ዶऊዶ᥋ሕࣕᖔ扩增片段长 度
的结构差异分析ଫྉሕɯ ᤩዛሕᅳଝ 基因在矮化香蕉及野 为 ԡሕ ᤦᡱଫ以香蕉 ዛዞᡙᔠႥ 作为内参基因ᖔ在 ᥈ᔀႿାᑕႿҴ
生型香蕉不同组织中的表达水平差异分析ᤥ 本研 登 录号为 ዶାԡԡ࿗ϟᖔ 引物序列为 ዶዹᡷᔽႿ᥋è᧥ ጢࣕ᥋
究结果旨在为揭示香蕉矮化突变的分子机制与筛 ᥈ऊऊዶఋዶऊዶ᥈ఋ᥈ऊऊዶዶఋऊఋዶऊ᥈ዶ᥈᥈᥋ሕࣕ 和 ዶዹᡷᔽႿ᥋᧥
选优良矮化香蕉株系奠定基础ᤥ ጢࣕ᥋ዶఋ᥈ఋऊዶऊ᥈ዶዶऊዶዶఋఋఋऊऊऊ᥈ऊఋऊዶ᥋ሕࣕᖔ 扩增片
段长度为 ϟጢᎮ ᤦᡱᖔ进行基因的表达定量分析ᤥ 采
ϟজ 材料与方法 用 ᣮВႿᔽᔀʢ༁ᑕ ୩ɟା ᥈ʢᔀᔀႿèᑕ༁ᡷ ी۪ऊ ᥘᔽ 染料说
明书进行操作ᖔीఋ᥋۪ऊ 流程第一步为 ँጢ ቩ ሕ
ϓॹϓ 材料 ቝᔽႿଫ第二步为 ँጢ ቩ ጢ ༁ᖔᤃԡ ቩ ሕ࿗ ༁ᖔ࿗ԡ 个循环ଫ第
以威廉斯 ାᤃ 矮化突变体及其野生型亲本为试 三步熔解曲线的绘制为 ँጢ ቩ ϟጢ༁ᖔᤃԡቩ ϟቝᔽႿᖔँጢ
验材料ᖔ均采自于广西大学农学院农科基地温网 ቩϟጢ ༁ᤥ 每个反应重复 ሕ 次ᖔ结果采用 ͱσσऊఋ 方法
室ᤥ 选取长势一致ܦ无病虫害的矮化突变体及其亲 计算基因的相对表达量ᤥ
本香蕉树各 株ᖔ分别采集香蕉生长发育前期嫩叶ܦ ϟሕ 序列分析জ 利用 શऊା᧧ 数据库的 ାᑕ༁ᡷᡱ 进行
假茎样品用于基因克隆及表达分析ᤥ 所有材料采 ᥈ዶሕᆍ 氨基酸序列相似性分析ଫ通过 ጶ۪ዶ୩ᢃ 在线
集后立即放入液氮中冻存ᖔͱऐԡ ቩ冰箱保存备用ᤥ 软件ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ औᔀᤦ ᔀᡱᑕ༁ᢃ ᆍʢ੫ ᣰ ᡱʢᆍᡷᡱᑕʢᑕቝɯ 对 ᥈ዶሕᆍ
ϓॹԣ 方法 蛋白的分子质量ܦ等电点ܦ蛋白质稳定性等理化性
ϟϟ ᤩዛሕᅳଝ 基因克隆与测序জ 采用 ఋ᧧ዶશ᥈ጶશ 多 质进 行 分 析和预测ଫ 利用 ୩ᔽ੫Ⴟᑕ۪ ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ औऔऔ
糖多酚植物总 શዶ 提取试剂盒ᖔ提取香蕉幼嫩叶 ዹᤦ༁ ʛᡷࣼ ʛҴ ᣰ ༁ᔀʢᔽዹᔀ༁ᣰ ୩ᔽ੫Ⴟᑕ۪ ɯ 和 ఋᥘ̀ᥘᥘ ୩ᔀʢᔀʢ
片中的总 શዶᤥ 按照 ᥘ᥋ᥘࣼᓂ 第一链 ዹ᧕શዶ 合成 ԡ ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ औऔऔ ዹᤦ༁ ʛᡷࣼ ʛҴ ᣰ ༁ᔀʢᔽዹᔀ༁ᣰ ఋᥘ̀ᥘᥘɯ
试剂盒说明书将完整度较好ܦ纯度较高的 શዶ 反 分析 ᥈ዶሕᆍ 氨基酸序列的跨膜结构和信号肽ᤥ
转成 ዹ᧕શዶ 第一链ᖔ以 ዹ᧕શዶ 为模板ᖔ根据 શऊା᧧ 上
发表的 ࣩ᤹ᐹ ᐹዞࣩቂᔠႥᐹᡙᐹ ༁ࣼᤦ༁ᡱ ቂᐹᤀᐹዞዞᓣႥᔠ 的 ᤩዛሕᅳଝ জ 结果与分析
编码基因的 ᨃèྉ ᣮᥘᡸԡԡँሕँऐሕᎮϟɯ 设计 ϟ 对特
异引 物ᖔ 此引物序 列 为 ᥈ዶሕᆍ᥋è᧥ ጢࣕ᥋ ԣॹϓ 香蕉矮化突变体与野生型 ᤩዛᇺᅳଝ 基因的序列
ዶఋ᥈ዶዶఋऊऊऊዶዶఋऊऊዶዶऊ᥈ዶऊ᥋ሕࣕᖔ ᥈ዶሕᆍ᥋᧥ ጢࣕ᥋ 比对分析
ఋఋዶዶऊዶዶऊዶዶዶఋऊऊऊఋఋऊ᥈᥋ሕࣕᤥ 采用高保真 ᡷᑕी 酶 以矮化香蕉和野生型香蕉嫩叶的 ዹ᧕શዶ 为模
进行 ఋ᥋۪ऊ 扩增ᖔ۪ऊ 反应程序᧥ँጢ ቩ ሕ ቝᔽႿଫँጢ 板ᖔ利用 ᡱʢᔽቝᔀʢ ጢԡ 软件设计 ᤩዛሕᅳଝ 基因的特异性
ቩ ϟጢ ༁ᖔጢጢ ቩ ϟጢ ༁ᖔᎮ ቩ ጢ ቝᔽႿᖔሕጢ 个循环ଫᎮ ቩ 引物进行 ۪ऊ 扩增ᤥ 扩增产物通过 ϟᠮ琼脂糖凝
