Page 112 - 《广西植物》2022年第7期

ϟ ϟ ऐ ࿗ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗԰ 卷
ጢဂᓂ 进样分析ᤥ 质控ྉ ीࣼᑕ᤟ᔽᡷᢃ ዹᆍႿᡷʢᆍ᤟ᖔ͐ऊɯ 样本为 ྉ԰ԡ঎ԡɯ对筛出的变量进行两组独立样本 ᡙ 检验ᖔ挑
所有血浆样本混合后取 ϟԡԡ ဂᓂᖔ同法处理ᤥ 选 ۗ ጐԡ঎ ԡጢ 的代谢物ᤥ ᣽ጶ᥈᥈ ᡱᑕᡷၤऔᑕᢃ ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ
ϟ঎࿗঎ሕ 数据采集জ 样品采用 ዶ੫ᔽ᤟ᔀႿᡷ ϟ԰ँԡ ᧧Ⴟ஦ᔽႿᔽᡷᢃ 超 औऔऔ঎Ҵᔀ੫੫঎ᢼᡱ ᣰ ɯ数据库对血浆样品差异代谢物作通
高效 液相色谱系统 ྉВ۪̀ᓂऊ ɯ 配合 ጶ୩᧧ 源ᖔ 路富集分析ᖔ用独立样本 ᡙ 检验比较给药前后试验
ዶऊ͐В᧧ఋɟ В۪ᓂऊାጶ̀ ̀᧧ᓂ᧧ऊ 色谱柱ྉϟԡԡ ቝቝ ġ ԰঎ϟ 组的差异ᤥ
ቝቝᖔϟ঎Ꭾ ဂቝɯ 在正负离子模式下进行数据采集ᤥ
柱温 ԰ጢ ቩ ଫ流速 ԡ঎ጢ ቝᓂኼቝᔽႿ ଫ进样量 ԰ဂᓂଫ流动 ԰জ 结果与分析
᥋ϟ
᥋ϟ
相组成 ዶ 为水 շ ԰ጢ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ 乙酸铵 շ ԰ጢ ቝቝᆍ᤟ኼ
᥋ϟ ԣॹϓ 血浆代谢物定性分析及化学分类归属
ᓂ 氨水ᖔା 为乙 腈ᤥ 梯度洗脱程序如下᧥ԡ ጲ ԡ঎ ጢ
ቝᔽႿᖔँጢᠮ ାଫ ԡ঎ ጢ ጲ Ꭾ ቝᔽႿᖔ ା 从 ँጢᠮ 线性变化至 用 В۪ᓂऊ᥋ᥘ୩ 技术对所有血浆样本进行色谱分
ᤃጢᠮଫᎮ ጲ ऐ ቝᔽႿᖔା 从 ᤃጢᠮ 线性变化至 ࿗ԡᠮଫऐ ጲ ँ 离及质谱分析ᖔ代谢物在正离子和负离子模式下
ቝᔽႿᖔା 维持在 ࿗ԡᠮଫँ ጲ ँ঎ϟ ቝᔽႿᖔା 从 ࿗ԡᠮ线性变化 得到很好区分ᤥ 通过重叠比较质控样本总离子流
至 ँጢᠮଫँ঎ϟ ጲ ϟ԰ ቝᔽႿᖔା 维持在 ँጢᠮᤥ ̀᧧ᓂ᧧ऊ 色谱 色谱图ྉ ᡷᆍᡷᑕ᤟ ᔽᆍႿ ዹၤʢᆍቝᑕᡷᆍ੫ʢᑕቝᖔఋ᧧ऊɯ ྉ 图 ϟɯᖔ发现
分离后 的 ጶ୩᧧ 源条件如下᧥ 质谱参数为雾化气 各色谱峰的响应强度和保留时间基本重叠ᖔ说明
ྉ᥈୩ϟɯ ᤃԡ ᡱ༁ᔽᖔ辅助加热气ྉ᥈୩԰ɯ ᤃԡ ᡱ༁ᔽᖔ气帘气 实验进程中仪器误差引起的变异较小ᤥ 经 ఋၤᔀ
ྉऊВ኏ɯ ሕԡ ᡱ༁ᔽᖔ温度 ྉ ఋጶᥘɯ ᤃԡԡ ቩ ᖔ毛细管电压 ̀ࣼቝᑕႿ ᥘᔀᡷᑕᤦᆍ᤟ᆍቝᔀ ᧕ᑕᡷᑕᤦᑕ༁ᔀܦᓂᔽᡱᔽʛቝᑕᡱ༁ྉ჆԰঎ሕɯ以及
ྉ᧧୩ɯ ōጢ ጢԡԡ ჆ྉ正负两种模式ɯଫఋᨃè ᥘ୩ 扫描范围 ᥘጶఋᓂ᧧શ 数据库定性分析ᖔ正负离子模式合并后共
ቂᣑ ऊ 为 ᤃԡ ጲ ϟ ԡԡԡ ᧕ᑕᖔ产物离子扫描范围 ቂᣑ ऊ 为 鉴定出 ሕ԰ϟ 种代谢物ᖔ其中负离子模式鉴定出 ϟᎮ࿗

԰ጢ ጲ ϟ ԡԡԡ ᧕ᑕᖔఋᨃè ᥘ୩ 扫描累积时间为 ԡ঎ ԰ԡ ༁ᣰ 种代谢物ᖔ正离子模式鉴定出 ϟँ԰ 种代谢物ᤥ 所
༁ᡱᔀዹᡷʢᑕᖔ产物离子扫描累积时间为 ԡ঎ԡጢ ༁ᣰ ༁ᡱᔀዹᡷʢᑕଫ 有鉴定的代谢物ྉ合并正负离子鉴定到的代谢物ɯ
二级质谱采用信息依赖型获取模式ྉ᧧᧕ዶɯ获得ᖔ并 根据其化学分类归属信息进行分类统计归为 ϟ԰
且采用超高灵敏度模式ᖔ去簇电压ྉ᧕۪ɯ ōᤃԡ ჆ྉ 正 种类型᧥有机酸及衍生物ܦ脂类及类脂分子ܦ有机

负两种 模 式ɯᖔऊጶ୩ 碰撞能力叠加 ྉሕጢ ō ϟጢɯ ᔀ჆ᤥ 杂环化合物ܦ有机含氧化合物ܦ核苷ܦ核苷酸及类
᧧᧕ዶ 设置如下᧥排除 ࿗᧕ᑕ 内的同位素ᖔ每个循环监 似物ܦ苯环型化合物ܦ有机氮化合物ܦ有机硫化合
测的候选离子᧥ϟԡᤥ 采取随机顺序进行样本连续 物ܦ苯丙烷类和聚酮酸类ܦ未分类化合物ᤥ 分类信
分析ᖔ可以避免仪器检测信号波动带来的影响ᖔ取 息显示有机酸及其衍生物和脂类及类脂分子这 ԰
等量的各组样品混合作为质控样本ᖔ每运行 ᤃ 个 类代谢物数量占比 均 较 高ᖔ 在代谢物中分别占
样本采集一次质控样本ᖔ以评价和监测系统稳定 ԰ԡ঎ऐᎮᠮ和 ϟጢ঎ऐँᠮྉ图 ԰ɯᤥ
性及实验数据可靠性ᤥ ԣॹԣ 组间差异分析
ϟ঎࿗঎࿗ 数据分析জВ۪ᓂऊ ᣰ ͐ఋᨃè᥋ᥘ୩ 导出原始数据ᖔ ԰঎԰঎ϟ 单变量统计分析জ 分析给药组和模型组血
使用 ۪ʢᆍ੫ᔀႿᔀ༁ᔽ༁ྉ჆԰঎ሕᖔВ᣽ɯ 软件进行数据预处理ᖔ 浆代谢物差异ᖔ主要的单变量统计分析方法包含
去躁ܦ基线校准ܦ峰对齐ܦ峰识别ܦ积分ܦ精确保留 变 异倍数分析 ྉ èᆍ᤟ʛ ऊၤᑕႿ੫ᔀ ዶႿᑕ᤟ᢃ༁ᔽ༁ᖔ èऊ
时间ܦ计算归一化峰强度ᤥ 化合物鉴定基于精确 ዶႿᑕ᤟ᢃ༁ᔽ༁ɯܦᡙ 检验 ᣰ 非参检验ᤥ 单变量分析法对正ܦ
质量数ܦ二级碎片以及同位素分布ᖔ利用 ۪ᔀᑕҴ჆ᔽᔀऔ 负离子模式下得到的所有代谢物ྉ 含未被鉴定的
ྉዶା ୩ऊ᧧ጶᣮᖔВ୩ዶɯ 提取差异代谢物的二级碎片质 代谢物ɯ做差异性分析ᖔ采用火山图ྉ 图 ሕɯ 的形式
谱并借助 ̀ᥘ᧕ାྉ ̀ࣼቝᑕႿ ᥘᔀᡷᑕᤦᆍ᤟ᆍቝᔀ ᧕ᑕᡷᑕᤦᑕ༁ᔀɯ 和 来进行可视化展示ᖔ玫红色表示 èऊ ᢦ ϟ঎ጢᖔۗጐԡ঎ԡጢ
ᥘጶఋᓂ᧧શ ྉቝᔀᡷ᤟ᔽႿ঎༁ዹʢᔽᡱᡱ༁঎ᔀʛࣼɯ进行鉴定并验证ᤥ 所 显著差异代谢物ྉ 上调ɯᖔ蓝色表示 èऊ ጐ ԡ঎ᤃᎮᖔۗ ጐ
得数 据矩阵作统计分 析ᖔ 利用 ᥘᑕʢҴᔀʢ჆ᔽᔀऔ ྉ ዶା ԡ঎ԡጢ 显著差异代谢物ྉ下调ɯᤥ
୩ऊ᧧ጶᣮᖔВ୩ዶɯ进行一级质谱的提取ᖔ经数据校正和 ԰঎԰঎԰ 多元统计分析 জ 非监督性的主成 分 分 析

归一化后导入 ୩᧧ᥘऊዶ᥋۪ྉϟ࿗঎ԡɯ进行 ۪ऊዶ 和 ᨃ۪ᓂ୩᥋ ྉ۪ऊዶɯ评价仪器和方法的稳定性ᖔ分析所有实验
᧕ዶ 等多 维统计分 析ᤥ 根据变量的 ჆᧧۪ ྉ ׹ᑕʢᔽᑕᤦ᤟ᔀ 样本和质控样本提取得到的峰ᖔ如图 ࿗᧥ዶ 所示ᤥ
԰
ᔽቝᡱᆍʢᡷᑕႿዹᔀ ᔽႿ ᡱʢᆍᢼᔀዹᡷᔽᆍႿɯ ᢦ ϟ 和 ྍ ۪ዹᆍʢʢ ྍ ྉ ۪ᔀᑕʢ༁ᆍႿ 在 ۪ऊዶ 图中ᖔቴ ᣏ 为决定 ۪ऊዶ 模型质量的主要参
԰
ዹᆍʢʢᔀ᤟ᑕᡷᔽᆍႿɯ ᢦԡ঎ጢ԰ 为标准ᖔ挑选差异代谢物ᤥ୩۪୩୩ 数ᖔ经过 Ꭾ 次循环交互验证得知 ቴ ᣏྉዹࣼቝɯᢉ ԡ঎ጢᎮँᢦ