Page 174 - 《广西植物》2021年第4期
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ᤃ ጢ ᤃ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
已有研究表明ᖔ在拟南芥扩展蛋白家族基因 ဂᓂᖔዹ᧕શዶ ဂᓂᖔʛʛ̀ ᨃᤃ ဂᓂᤥ 反应程序如下᧥ँጢ
中ᖔዛᡙጛᣏۗዛ 基因在拟南芥萌发的种子中特异高 ቩሕԡ ༁ଫ࿗ԡ 个循环ྉँጢቩ ጢ༁ᖔጢऐቩ ሕԡ ༁ᖔᎮ ቩ ሕԡ
表达ᖔ参与种子萌发 ྉ ɟᑕႿ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟ࿗ଫ ୩ijႿዹၤᔀझ᥋ ༁ɯଫᎮቩ ቝᔽႿଫ进行 ጢऐ ጲ ँጢ ቩ 的熔解曲线分析ଫ࿗ԡ
ᥘᆍႿᡷᔀ༁ᔽႿᆍ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟँɯᤥ 此外ᖔ还有其他结构 基 ቩ 冷却 ሕԡ ༁ᤥ 黄梁木和拟南芥的内参基因分别为
因ᖔ如 ዛᡙ᤹ዛટᎮܦዛᡙ௴ԮÞ࿗ 等也参与了种子萌发的过 ટዞࣷᡥዞᤀᅳᡓ၊ᔠᤀᔠႥ 和 ዛᡙۗۗዛዛሕྉ ᓂᔽ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟᎮɯᖔ拟南
程ᖔ其中 ዛᡙ௴ԮÞ࿗ 对种子的萌发起到抑制作用ଫ赤 芥 ዛᡙጛᣏۗዛܦዛᡙ᤹ዛટᎮ 和 ዛᡙ௴ԮÞ࿗ 基因 ఋ᥋ी۪ऊ 引
霉素诱导 ዛᡙ᤹ዛટᎮ 表达上调ᖔ但下调 ዛᡙ௴ԮÞ࿗ 的表 物 参考已有的文 献 ྉ ᧧੫ᔀ༁ᔽᑕ༁᥋èᔀʢႿᑕႿʛᔀझ ᔀᡷ ᑕᖔ
达ଫዶାዶ 诱导 ዛᡙ௴ԮÞ࿗ 表达上调ᖔ但对 ዛᡙ᤹ዛટᎮ 表达 ԡϟሕଫ ାᆍ੫ᑕቝࣼऔᑕ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟሕଫ ɟᑕႿ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟ࿗ɯᖔ
无 调控作用 ྉ ᧧੫ᔀ༁ᔽᑕ༁᥋èᔀʢႿᑕႿʛᔀझ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟϟଫ 所用引物见表 ϟᤥ
᧧੫ᔀ༁ᔽᑕ༁᥋èᔀʢႿᑕႿʛᔀझ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟሕଫ ାᆍ੫ᑕቝࣼऔᑕ ᔀᡷ ᑕᖔ ϓॹ 材料处理及萌发试验
ԡϟሕɯᤥ 因此ᖔ本研究分析了 ટዞጛᣏۗዛऐ 基因在黄 黄梁木种子泡于常温的水中并置于 ሕᎮ ቩ 恒
梁木种子萌发过程中不同时期的相对表达量ᖔ并 温箱 ࿗ ၤଫ在培养皿中平铺滤纸并吸足蒸馏水ᖔ将
分析了拟南芥 ۼఋ 和转基因植株中 ટዞጛᣏۗዛऐ 基因 浸泡过的种子平铺于滤纸上ᖔ盖上盖子ᖔ置于光照
和参与拟南芥种子萌发的内源相关基因 ዛᡙጛᣏۗዛܦ 强度为ϟ ጢԡԡ ܦϟᤃ ၤ 光照 ᣰऐ ၤ 黑暗光周期ܦጢ ቩ
ዛᡙ᤹ዛટᎮ 和 ዛᡙ௴ԮÞ࿗ 在空白处理和植物激素 ᥈ዶ 和 培养箱中培养ᖔ分别于培养 ሕܦᤃܦᎮܦऐ ʛ 收集种子ᤥ
ሕ
ዶାዶ 处理下的相对表达量ᖔ 以及探 究 了 ᥈ዶ 和 根据 ɟᑕႿ ᔀᡷ ᑕྉԡϟ࿗ɯ的方法ᖔ收集于 ጢ ቩ 空白处
ሕ
ዶାዶ 对拟南芥 ۼఋ 和转基因种子萌发的影响ᖔ试 理ྉ水ɯܦϟԡ ဂቝᆍኼᓂ ᥈ዶ 和 ዶାዶ 中浸泡 ࿗ ၤ 的
᥋ϟ
ሕ
图为后续研究 ટዞጛᣏۗዛऐ 基因在黄梁木种子萌发中 拟南芥 ۼఋ 和转 ટዞጛᣏۗዛऐ 基因 ఋሕ 代纯合体种子ᤥ
的功能奠定基础ᤥ 每个样品设 ሕ 个生物学重复ᖔ样品采集后放入液
氮速冻ᖔ置于ͱऐԡ ቩ 冰箱储存备用ᤥ
ϟজ 材料与方法 根据 ۼᑕႿ੫ ᔀᡷ ᑕ ྉԡϟᤃɯ 的方法ᖔ在培养皿中
平铺滤纸并各自吸足蒸馏水ܦϟԡ ဂቝᆍኼᓂ ᥈ዶ 和
᥋ϟ
ሕ
ϓॹϓ 材料 ዶାዶᖔ将拟南芥 ۼఋ 和转 ટዞጛᣏۗዛऐ 基因 ఋሕ 代纯合
本研究以当年收集的黄梁木的种子ܦ拟南芥 体种子置于滤纸上ᖔ每个培养皿 ऐԡ ጲ ϟԡԡ 粒种子ᖔ
野生型 ۼఋྉऊᆍ᥋ԡɯ以及已获得的转 ટዞጛᣏۗዛऐ 基因 盖上盖子ᖔ࿗ ቩ 黑暗中处理 ሕʛᖔ再置于连续光照强
的拟 南 芥 ఋሕ 代纯合体种子 ྉ ᓂᔽ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟᎮɯ 为 度为ϟ ጢԡԡ ܦ温度为 ጢ ቩ 的培养箱中培养ᤥ 以胚
材料ᤥ 根出现衡量种子已萌发ᖔ分别于 ϟܦϟऐܦ࿗ܦ࿗ऐ ၤ 统
ϓॹԣ 总 ቴટዛ 的提取与 ዞᦵટዛ 合成 计种子萌发率ᖔ每个基因型设 ࿗ 个生物学重复ᤥ
利用植物 શዶ 试剂盒ྉᨃቝᔀ੫ᑕɯ 提取总 શዶᖔ 采用 ୩۪୩୩ ϟँ 统计软件的 ᡙ 检验进行显著性分析ᖔ
用 ࿗ԡ ဂᓂ 的 ᧕ጶ۪ऊ 水洗脱 શዶᖔ于ͱऐԡ ቩ 保存备 并计算在 ϟऐ ၤ 时ᖔ᥈ዶ 和 ዶାዶ 对各基因型种子萌
ሕ
用ᤥ ۪ʢᔽቝᔀ୩ዹʢᔽᡱᡷ ఋᥘ ఋ ᥘᑕ༁ᡷᔀʢ ᥘᔽ 试剂盒ྉఋᑕҴᑕʢᑕᖔ 发的促进率和抑制率ᤥ
大连ɯ说明书ᖔ将总 શዶྉԡጢ ဂ੫ɯ逆转录为第 ϟ 链
ዹ᧕શዶᖔ于ͱԡ ቩ 保存备用ᤥ জ 结果与分析
ϓॹᇺ 荧光定量ྉቴ௴फۗࣷቴɯ分析
将合成的第 ϟ 链 ዹ᧕શዶ 稀释 ϟጢ 倍备用ᖔఋ᥋ ԣॹϓ ટዞጛᣏۗዛࣽ 基因在黄梁木种子萌发过程中的表
ी۪ऊ 在罗氏ྉ ᆍዹၤᔀɯ ᓂऊ࿗ऐԡ 定量 ۪ऊ 仪上进行ᖔ 达分析
每个点重复 ሕ 次ᖔ取平均值分析ᖔ以 ʛʛ̀ ᨃ 代替模 黄梁木种子在培养 ᤃʛ 后ᖔ胚根才出现ྉ 图 ϟ᧥
板作为实验的空白对照ᤥఋ᥋ी۪ऊ ԡ ဂᓂ 反应体 ାɯᖔ在黄梁木种子萌发过程的不同阶段ᖔટዞጛᣏۗዛऐ
系如下᧥ ġ୩ɟା ۪ʢᔀቝᔽ ጶ ௴ᐹफ ᧧᧧ ϟԡ ဂᓂᖔ引物 è 基因的表达变化大ᤥ 种子在培养 ሕʛ 后ᖔ表达量较
᥋ϟ ᥋ϟ 低ଫ在培养 ᤃʛ 后ᖔ其表达量达到最高ᖔ此时胚根刚
ྉϟԡ ဂቝᆍኼᓂ ɯϟ ဂᓂᖔ引物 ྉ ϟԡ ဂቝᆍኼᓂ ɯϟ
