Page 59 - 《广西植物》2022年第5期

ጢ 期 殷娜等᧥ 民族药马利筋内生真菌生物活性研究 Ꭾ ऐ ሕ
一条有效的途径ᤥ 基于此ᖔ我们提出了ᥥ 马利筋内 ϓॹ྽ 内生真菌的培养及提取物的制备
生真菌可能具有抗肿瘤ܦ抗炎症和抗氧化等生物 挑取分离所得的马利筋内生真菌到新鲜 ۪᧕ዶ
活性ɼ的科学假说ᖔ并基于ᥥ 药用植物ͱ内生菌ͱ生 培养基上进行活化ᖔ 活化后的内生真菌接种于
᥋ϟ
物活性ɼ的研究思路ᖔ首次以马利筋内生真菌为研 ۪᧕ା 培养基中ᖔ԰ऐ ቩ ܦϟጢԡ ʢኼቝᔽႿ 摇床培养 ऐʛᖔ
究对象ᖔ对 ϟᤃऐ 株西双版纳产马利筋内生真菌进 过滤菌丝ᖔ收集发酵液并用乙酸乙酯萃取 ሕ 次ᖔ萃
行抗肿瘤ܦ抗炎ܦሂ᥋葡萄糖苷酶抑制及 ᧕۪۪̀ 自由 取物于旋转蒸发仪上浓缩得提取物浸膏ᖔ将提取
基清除等活性研究ᖔ以期为后续从中深入发掘潜 物浸膏用 ᧕ᥘ୩ᨃ 溶解配成初始浓度 ԰ԡԡ ቝ੫ኼቝᓂ ᥋ϟ
在新型天然抗肿瘤ܦ抗炎ܦ降糖和抗氧化等活性化 的母液ᖔ࿗ ቩ 冰箱保存ܦ备用ᤥ
合物奠定良好基础ᖔ这对保护民族药马利筋野生 ϓॹጇ 肿瘤细胞毒活性测定
采用 ୩኏ା 法ྉ୩ҴᔀၤᑕႿ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ϟँँԡɯ进行肿瘤细
资源具有重要意义ᤥ
胞毒活性测定ᖔ取对数生长期的肿瘤细胞株 શ᧧ऊ᥋
ϟজ 材料与方法 ̀ϟँᎮጢܦᥘऊè᥋Ꭾܦ̀ऊఋ᥋ϟϟᤃܦ̀ᔀ᤟ᑕ 和 ̀ᔀᡱ᥈԰ 按 ࿗ ġ ϟԡ ࿗
个ኼቝᓂ 接种于 ँᤃ 孔培养板中ᖔ每孔 ϟԡԡ ဂᓂᖔ于
᥋ϟ
ሕᎮ ቩ ܦጢᠮ ऊᨃ 培养箱中培养 ԰࿗ ၤᖔ加入 ϟԡԡ ဂᓂ 不
ϓॹϓ 内生真菌和供试细胞株 ԰
᥋ϟ
ϟᤃऐ 株供试内生真菌是从产自云南西双版纳 同浓度ྉ࿗ԡܦ԰ԡܦϟԡܦጢܦ԰঎ጢܦϟ঎԰ጢ ဂ੫ኼቝᓂ ɯ 提取物ᖔ
每个浓度设 ሕ 个复孔ᖔ同时设 ሕ 个对照孔ᖔ置于
的新鲜马利筋的茎和叶中分离获得ᖔ其中茎中分
ऊᨃ 培养箱中继续培养 ࿗ऐ ၤᖔ弃培养上清ᖔ每孔加
离获得 ϟԡᤃ 株ྉᥘȮè᥋ϟ ጲ ᥘȮè᥋ϟԡᤃɯᖔ叶中分离获得 ԰
入 ࿗ቩ 预冷的 ϟԡᠮ的 ఋऊዶ ϟԡԡ ဂᓂᖔ࿗ ቩ 固定 ϟၤ 后
ᤃ԰ 株ྉᥘɟè᥋ϟጲ ᥘɟè᥋ᤃ԰ɯᖔ菌株培养于 ۪᧕ዶ 和 ۪᧕ା
用蒸馏水洗涤 ጢ 次ᖔ空气中自然风干ᤥ 每孔加入 ࿗
培养 基 中ᤥ 供 试 细 胞 株 为 人肺腺癌细胞 શ᧧ऊ᥋
ቝ੫ኼቝᓂ 的 ୩኏ା 溶液 ϟԡԡ ဂᓂᖔ室温染色 ϟጢ ቝᔽႿᖔ弃
᥋ϟ
̀ϟँᎮጢܦ人乳腺癌细胞 ᥘऊè᥋Ꭾܦ人结肠癌细胞 ̀ऊఋ᥋
上清液ᖔ用 ϟᠮ醋酸洗涤 ጢ 次ᖔ空气干燥ᖔ每孔加入
ϟϟᤃܦ人宫颈癌细胞 ̀ᔀ᤟ᑕܦ人肝癌细胞株 ̀ᔀᡱ᥈԰ 和
᥋ϟ
ϟԡԡ ဂᓂ 的 ఋʢᔽ༁ྉϟԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ɯ 溶液ᖔ室温下放置 ጢ
小鼠单核巨噬细胞 ኏ᑕऔ԰ᤃ࿗঎ Ꭾᤥ 其中ᖔશ᧧ऊ᥋̀ϟँᎮጢ
ቝᔽႿᖔ于 ጢᤃԡ Ⴟቝ 波长处测 ᨃ᧕ 值ᤥ 按以下公式计算
和 ᥘऊè᥋Ꭾ 采用 ኏۪ᥘ᧧ ϟᤃ࿗ԡ 完全培养基培养ᖔ其他
各菌株提取物对肿瘤细胞的生长抑制率ᖔ半数抑
细胞株采用 ᧕ᥘጶᥘ 高糖完全培养基培养ᤥ 以上细
制浓度 ᧧ऊ 值采用 ᨃʢᔽ੫ᔽႿ 软件计算ᤥ
ጢԡ
胞均购自中国科学院昆明动物研究所细胞库ᤥ
ᧇྉᠮɯᢉ ྉዛᡥͱዛዞɯ ᣑዛዞġϟԡԡᤥ
ϓॹԣ 培养基
式中᧥ᧇ 代表抑制率ଫዛᡥ 代表给药组 ᨃ᧕ 值ଫዛዞ
马铃薯葡萄糖琼脂培养基ྉ۪᧕ዶɯ᧥马铃薯 ԰ԡԡ
代表对照组 ᨃ᧕ 值ᤥ
੫ᖔ葡萄糖 ԰ԡ ੫ᖔ琼脂 ϟጢ ੫ᖔ蒸馏水ϟ ԡԡԡ ቝᓂᖔᡱ̀ 自
ϓॹᣤ 抗炎活性测定
然ᤥ 马铃薯葡萄糖液体培养基ྉ۪᧕ାɯ᧥马铃薯 ԰ԡԡ
ϟ঎ᤃ঎ϟ 细胞活力测定জ 采用 ୩኏ା 法ྉ ୩ҴᔀၤᑕႿ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ
੫ᖔ葡萄糖 ԰ԡ ੫ᖔ蒸馏水ϟ ԡԡԡ ቝᓂᖔᡱ̀ 自然ᤥ኏۪ᥘ᧧
ϟँँԡɯ 检测各提取物对 ኏ᑕऔ԰ᤃ࿗঎ Ꭾ 细胞活力的影
ϟᤃ࿗ԡ 完全培养基᧥ ኏۪ᥘ᧧ ϟᤃ࿗ԡ 基础培养基 ँԡԡ ጢ
响ᖔ取对数生长期细胞按每孔 ሕ ġϟԡ 个接种于 ँᤃ
ቝᓂᖔ胎牛血清 ϟԡԡ ቝᓂᖔ 双抗 ϟԡ ቝᓂᖔ 混合均 匀ᤥ 孔培养板中ᖔ每孔 ϟԡԡ ဂᓂᖔ设置内生真菌提取物组
᧕ᥘጶᥘ 高糖完全培养基᧥᧕ᥘጶᥘ 高糖培养基 ँԡԡ
和对照组ᖔ提取物组加入 ጢԡ ဂᓂ 不同浓度ྉϟԡܦጢܦ
ቝᓂᖔ胎牛血清 ϟԡԡ ቝᓂᖔ双抗 ϟԡ ቝᓂᖔ混合均匀ᖔ࿗ ቩ ԰঎ጢܦϟ঎԰ጢܦԡ঎ᤃ԰ጢܦԡ঎ሕϟ԰ ጢܦԡ঎ϟጢᤃ ԰ጢ ဂ੫ኼቝᓂ ɯ 提取
᥋ϟ
冰箱保存ܦ备用ᤥ 物和 ጢԡ ဂᓂ ᧕ᥘጶᥘ 高糖完全培养基ᖔ对照组加入
ϓॹᇺ 主要仪器和设备 ϟԡԡ ဂᓂ 培养基ᖔ每组设 ሕ 个复孔ᖔ加药后ᖔ放于 ሕᎮ
᧕̀Ի᥋ԡጢ԰᧕ 型恒温摇床ྉ上海博彩生物科技有 ቩܦ ጢᠮ ऊᨃ 培养箱中培养 ԰࿗ ၤᖔ ୩኏ା 法检测
԰
限公司ɯܦ᧕۪̀᥋ँԡጢ԰ 型恒温培养箱ྉ 上海一恒科技 ኏ᑕऔ԰ᤃ࿗঎Ꭾ 细胞活力ᤥ
有限公司ɯܦ̀ᔀᔽʛᆍ᤟ᡱၤ 型旋转蒸发仪ྉ 德祥科技有 ϟ঎ᤃ঎԰ ᓂ۪୩ 诱导的 ኏ᑕऔ԰ᤃ࿗঎Ꭾ 细胞中 શᨃ 测定জ 采
限公司ɯܦ୩ᡱᔀዹᡷʢᑕᥘᑕ଴ ᔽሕ଴ 型多功能酶标仪ྉ 美谷分 用 ᥈ʢᔽᔀ༁༁ 法ྉ᣽ᔽቝ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡ԰ԡɯ进行 શᨃ 检测ᖔ取对
子仪 器 ྉ 上海 ɯ 有限公司 ɯܦ 二氧化碳培养箱 数生长期的 ኏ᑕऔ԰ᤃ࿗঎Ꭾ 细胞按每孔 ሕġϟԡ 个接种于
ᤃ
ྉఋၤᔀʢቝᆍ஦ᔽ༁ၤᔀʢ ୩ዹᔽᔀႿᡷᔽ஦ᔽዹɯᤥ ँᤃ 孔板中ᖔ 每孔 ϟԡԡ ဂᓂᤥ 将 细 胞分为空白组