Page 60 - 《广西植物》2022年第5期
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Ꭾ ऐ ࿗ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ 卷
᥋ϟ
ྉ᧕ᥘጶᥘ 培养基ɯܦ 模型组 ྉϟ ጢ ဂ੫ ኼ ቝᓂ ᓂ۪୩ շ 吸光度 ዛᤇᖔ以及 ԡԡ ဂᓂ 无水乙醇的吸光度值 ዛʗᓣஏᤥ
᧕ᥘጶᥘ 培养基ɯ 和内生真 菌提取物组 Џϟጢ ဂ੫ኼ 按以下公式计算提取物对 ᧕۪۪̀ 自由基的清除
᥋ϟ
ቝᓂ ᓂ۪୩ շ 各浓度提取物 ྉ ጢܦ ϟጢܦ ԡ ᤃጢܦ 率ᖔ并用 ᨃʢᔽ੫ᔽႿ 软件计算 ᧧ऊ 值ᤥ
ጢԡ
᥋ϟ
ԡሕϟ ጢܦԡϟጢᤃ ጢ ဂ੫ኼቝᓂ ɯᖔ每组设 ሕ 个复孔ᤥ ᧇྉᠮɯᢉ Џྉዛͱዛʗᓣஏɯͱྉዛᤇͱዛʗᓣஏɯ ᣑ ྉዛᤇͱዛʗᓣஏɯġϟԡԡᤥ
加药后ᖔ放于 ሕᎮ ቩ ܦጢᠮ ऊᨃ 培养箱中培养 ࿗ ၤᖔ收 式中᧥ᧇ 代表 ᧕۪۪̀ 自由基清除率ଫዛ 代表测
集培养上清ᖔ采用 ᥈ʢᔽᔀ༁༁ 法检测培养上清中 શᨃ 试样本和 ᧕۪۪̀ 混合溶液 ᨃ᧕ 值ଫዛᤇ 代表 ᧕۪۪̀
水平ᤥ 和无水乙醇混合溶液 ᨃ᧕ 值ଫዛʗᓣஏ 代表无水乙醇
ϟᤃሕ ᓂ۪୩ 诱导的 ᑕऔᤃ࿗Ꭾ 细胞中 ᧧ᓂ᥋ᤃܓ᧧ᓂ᥋ϟᏇ 和 ᨃ᧕ 值ᤥ
ఋશè᥋ሂ 的测定জ 按 ϟᤃ 的方法对 ᑕऔᤃ࿗Ꭾ 细胞 ϓॹ࣮ 活性菌株的鉴定
进行处理ᖔ按照酶联免疫吸附试剂盒说明书检测 参照谭小明等ྉԡϟ࿗ɯ的方法进行活性菌株鉴
细胞培养上清中肿瘤坏死因子᥋ሂྉఋશè᥋ሂɯܦ白细胞 定ᖔ将纯化好的活性菌株菌丝ྉԡጢ ጲ ϟ ੫ɯ 在液氮中
介素᥋ᤃྉ ᧧ᓂ᥋ᤃɯܦ白细胞介素᥋ϟᏇྉ ᧧ᓂ᥋ϟᏇɯ 水平ᖔ根据 迅速研磨成粉ᖔ参照天根真菌 ᧕શዶ 提取试剂盒的
标准曲线ᖔ计算上清中各种炎症因子的含量ᤥ 操作说明提取真菌 ᧕શዶᤥ 同时ᖔ 采用通用引物
ϓॹ᎒ ሂ葡萄糖苷酶抑制活性测定 ᧧ఋ୩࿗ ྉ ఋऊऊఋऊऊ᥈ऊఋఋዶఋఋ᥈ዶఋዶఋ᥈ऊ ɯ 和 ᧧ఋ୩ጢ
参照郑喜等ྉԡϟጢɯ 方法ᖔ将内生真菌提取物 ྉ᥈᥈ዶዶ᥈ఋዶዶዶዶ᥈ఋऊ᥈ఋዶዶऊዶዶ᥈᥈ɯ按以下反应条
和阿卡波糖用 ᡱ̀ ᤃऐ 的磷酸盐缓冲液稀释至所需 件进行 ۪ऊ 扩增᧥ँጢ ቩ ᖔ࿗ ቝᔽႿଫँጢ ቩ ᖔሕԡ ༁ᖔጢᤃ ቩ ᖔ
浓度ᖔሂ᥋葡萄糖苷酶冻干粉配成浓度为 ԡ ऐ Вኼ ሕԡ ༁ᖔᎮ ቩ ᖔϟ ቝᔽႿᖔሕԡ 个循环ଫᎮ ቩ ᖔϟԡ ቝᔽႿᤥ ۪ऊ
ቝᓂ 溶液ᖔ底物ྉ۪શ۪᥈ɯ配成浓度 ጢ ቝቝᆍኼᓂ 溶 扩增产物取 ጢဂᓂ 进行琼脂糖凝胶电泳检测ᖔ并委
᥋ϟ
᥋ϟ
液ᤥ 设置对照组ྉ 磷酸盐缓冲液շ酶液շ底物ɯܦ空 托擎科生物技术有 限 公 司 测 序ᖔ 反馈序列通过
白对照组ྉ磷酸盐缓冲液ɯܦ样本测定组ྉ 磷酸盐缓 શऊା᧧ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ ᤦᑕ༁ᡷ Ⴟዹᤦᔽ Ⴟቝ Ⴟᔽၤ ੫ᆍ ᣰ ɯ 进行比对ᖔ
冲液շ提取物շ酶液շ底物ɯܦ样本对照组ྉ 磷酸盐 确定活性菌株种属ᤥ
缓冲液շ提取物ɯ 和阳性对照组ྉ 磷酸盐缓冲液 շ
阿卡波糖շ酶液շ底物ɯᖔ依次加入 ԡ ဂᓂ 提取物或 জ 结果与分析
阿卡波糖ྉጢܦጢܦϟጢܦԡᤃጢ ቝ੫ኼቝᓂ ɯܦԡ ဂᓂ 磷
᥋ϟ
酸钾缓冲液ܦԡ ဂᓂ ሂ᥋葡萄糖苷酶ᖔሕᎮ ቩ 恒温孵育 ԣॹϓ 马利筋内生真菌代谢产物对肿瘤细胞生存率
᥋ϟ 的影响
ϟጢ ቝᔽႿ 后ᖔ加入 ԡ ဂᓂ ጢ ቝቝᆍኼᓂ 的 ۪શ۪᥈ᖔሕᎮ
ቩ 恒温反应 ϟጢ ቝᔽႿᖔ再加入 ऐԡ ဂᓂ ԡϟ ቝᆍኼᓂ 的 采用 ୩ା 法测定 ϟᤃऐ 株马利筋内生真菌抗肿
᥋ϟ
શᑕऊᨃ 溶液终止反应ᖔ于 ࿗ԡጢ Ⴟቝ 波长测吸光度值 瘤活性ᖔ结果见表 ϟᤥ 从表 ϟ 可以看出ᖔँ 株内生
ሕ
ዶᤥ 每个样本设 ሕ 个复孔ᖔ实验重复 ሕ 次ᤥ 按以下 真菌提取物表现出广谱而显著细胞毒作用ᖔ其中
公式计算抑制率ᖔ并用 ᨃʢᔽ੫ᔽႿ 软件计算 ᧧ऊ 值ᤥ 以 ᥘɟè᥋ϟᤃ 活性最强ᖔ活性强于顺铂ᤥ 大部分活性
ጢԡ
菌株对 શ᧧ऊ᥋̀ϟँᎮጢܦ̀ऊఋ᥋ϟϟᤃ 和 ̀ᔀᑕ 较 ᥘऊè᥋Ꭾ 和
ᧇྉᠮɯᢉ Џϟͱྉዛᡙͱዛዞɯ ᣑ ྉዛዞͱዛᤇɯ ġϟԡԡᤥ
式中᧥ᧇ 代表抑制率ଫዛᡙ 代表样本测定组 ᨃ᧕ ̀ᔀᡱ᥈ 敏感ᖔ具有更好的抑制作用ଫ菌株 ᥘȮè᥋ሕሕ
值ଫዛዞ 代表样本对照组 ᨃ᧕ 值ଫዛዞ 代表对照组 ᨃ᧕ 对 ̀ᔀᡱ᥈ 肿瘤细胞较为敏感ᖔ 其 ᧧ऊ 为 ԡ ϟ࿗Ꭾ
ጢԡ
᥋ϟ
值ଫዛᤇ 代表空白对照组 ᨃ᧕ 值ᤥ ဂ੫ኼቝᓂ ᖔ而对其他 ࿗ 株肿瘤细胞的 ᧧ऊ ᢦϟԡ ဂ੫ኼ
ጢԡ
ϓॹࣽ ᦵ̵ۗۗ 自由基清除活性测定 ቝᓂ ଫ从菌株分布来看ᖔ活性菌株主要集中于马利
᥋ϟ
参照 ᥈ࣼᆍ 等ྉԡԡɯ 方法进行测定ᖔ将内生真 筋的茎ᖔ有 ऐ 株ᖔ而叶中仅获得 ϟ 株活性菌株 ᥘɟè᥋
菌提取物和维生素 ऊ 用无水乙醇稀释至所需浓 ϟᤃଫ来源于茎中的内生真菌活性弱于叶中内生真
᥋ϟ 菌ᖔ可能跟宿主马利筋抗肿瘤活性成分主要集中
度ᖔ᧕۪۪̀ 用无水乙醇配成 ԡ ቝቝᆍኼᓂ 的溶液ᤥ
分别将 ϟԡԡ ဂᓂ 各浓度测试提取物溶液ྉऐԡԡܦ࿗ԡԡܦ 于叶有关ᤥ
ԡԡܦϟԡԡܦጢԡ ဂ੫ኼቝᓂ ɯ和 ϟԡԡ ဂᓂ ᧕۪۪̀ 溶液加入 ԣॹԣ ᤹ȣÞጇᇺ 对 ᒦۗ 诱导的 ቴᐹँԣᣤॹ᎒ 细胞中 ᧇᒦ
᥋ϟ
到 ँᤃ 孔板中ᖔ轻轻混匀ᖔ室温下避光静置反应 ሕԡ ᣤܓᧇᒦϓᎫ 和 ௴ટÞሂ 的影响
ቝᔽႿ 后于 ጢϟᎮ Ⴟቝ 波长测定其吸光度 ዛᖔ同时测定 通过建立炎症细胞模型ᖔ测定各内生真菌代
ϟԡԡ ဂᓂ ᧕۪۪̀ 溶液与 ϟԡԡ ဂᓂ 无水乙醇混合后的 谢物对 ᑕऔᤃ࿗Ꭾ 细胞中 શᨃ 的影响ᖔ 发现菌株
