Page 110 - 《广西植物》2023年第10期
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１ ８ ６ ４ 广 西 植 物 ４３ 卷
个样本比对到基因组的百分比均高于 ７０％ꎬ表明转 果显示ꎬＭｏｔｉｆ １ 和 Ｍｏｔｉｆ ２ 的保守程度在欧耧斗菜
录组数据与参考物种接近ꎮ ３ 次生物学重复 Ｒ 均 ＡＰ２ / ＥＲＦ 中 是 最 高 的ꎬ 除 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣１３ 和
２
大于 ０.８５ꎬ组内 ３ 次重复存在较好的相关性ꎮ 为了 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣２３ 外ꎬ其 余 ８４ 个 均 包 含 该 段 基 序ꎮ
进一步挖掘盐胁迫下各个通路的基因变化ꎬ以 Ｐ 而其他类型结构域的保守程度会因所属亚家族的
(ｐａｄｊ)<０.０５ 为筛选条件ꎬ筛选出 １３ 个显著富集的 不同而有差异( 图 ２)ꎮ 在相同亚家族中ꎬ除 ＡＰ２
ＫＥＧＧ 通路ꎬ２ １９７ 个差异表达基因ꎮ 结构域外ꎬ还存在着一个或多个相对保守的其他
２.２ 欧耧斗菜 ＡＰ２ / ＥＲＦ 基因家族鉴定与系统发育 类型结构域ꎬ如 ＡＰ２ 亚家族有两段保守基序 Ｍｏｔｉｆ
分析 ４ 和 Ｍｏｔｉｆ １３ꎬＲＡＶ 亚家族有两段保守基序 Ｍｏｔｉｆ ９
本研究从欧耧斗菜转录组中共鉴定出 ８６ 个 和 Ｍｏｔｉｆ １５ꎬ而这在其他亚家族中则不具备(图 ３)ꎮ
ＡＰ２ / ＥＲＦ 基因家族成员ꎬ分别命名为 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣ ２.６ 欧耧斗菜 ＡＰ２ / ＥＲＦ 基因表达模式分析
１~ ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣８６ꎮ 将 欧 耧 斗 菜 与 拟 南 芥 ＡＰ２ / 将欧耧斗菜 ＡＰ２ / ＥＲＦ 基因在盐胁迫下不同时
ＥＲＦ 基 因 构 建 系 统 进 化 树ꎬ 结 果 如 图 １ 所 示ꎬ 间在根和叶中的表达数据绘制热图谱并聚类分
ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ 分 布 在 ＥＲＦ、 ＤＲＥＢ、 ＡＰ２、 ＲＡＶ 和 析ꎬ将 ＦＰＫＭ 值大于 ０.０５ 视为有效表达ꎬ并且其值
Ｓｏｌｏｉｓｔ 这 ５ 个亚家族中ꎬ其中ꎬＥＲＦ 亚家族进一步 越大说明表达水平越高( Ｍｏｒａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１１)ꎮ 在
分为 Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５ 和 Ｂ６ ６ 个亚组ꎬＤＲＥＢ 亚 根中ꎬ有效表达基因 ６９ 个ꎬ在叶中ꎬ有效表达基因
家族分为 Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５ 和 Ａ６ ６ 个亚组ꎮ 在 ５０ 个ꎬ并且表达量均随盐胁迫时间的增加呈现一
鉴定的 ８６ 个 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ 中:１５ 个属于 ＡＰ２ 亚家 定的变化趋势(图 ４)ꎮ
族ꎬ占总数的 １７.４４％ꎻ３７ 个属于 ＥＲＦ 亚家族ꎬ占 与对 照 相 比ꎬ 表 达 差 异 显 著 的 标 准 为 ｜ ｌｏｇ
２
４３.０２％ꎻ２９ 个属于 ＤＲＥＢ 亚家族ꎬ占 ３３.７２％ꎻ４ 个 (Ｆｏｌｄ Ｃｈａｎｇｅ) ｜ >１、Ｐ( ｐａｄｊ) <０.０５ꎮ 根中有 １９ 个
属于 ＲＡＶ 亚家族ꎬ占 ４.６５％ꎻ还有 １ 个属于 Ｓｏｌｏｉｓｔ 差异基因ꎬ叶中有 １８ 个差异基因ꎬ分布于不同的
亚家族ꎬ占 １.１６％ꎮ 盐胁迫时间中ꎬ８ 个 ＡＰ２ / ＥＲＦ 在根和叶中皆为差
２.３ 欧耧斗菜 ＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白的理化性质分析与亚 异基 因ꎮ ｌｏｇ ( Ｆｏｌｄ Ｃｈａｎｇｅ) > １ 为 上 调 基 因ꎬ ｌｏｇ
２ ２
细胞定位 (Ｆｏｌｄ Ｃｈａｎｇｅ) <－１ 为下调基因ꎮ 在根中ꎬ上调基
欧耧斗菜 ８６ 个 ＡＰ２ / ＥＲＦ 基因所编码的蛋白 因 有 １５ 个ꎬ 其 中 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣２、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣３、
质的氨 基 酸 数 目 在 １３２ ~ ７２２ 个 之 间ꎬ 分 子 量 在 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣２２、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣４０、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣５３、
１４ ７６３.３０ ~ ７９ ０６９.４７ Ｄａ 之间ꎬ等电点介于 ４.４９ ~ ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣６４ 在盐处理 １２ ｈ 时表达量显著上调ꎬ
９.６８ 之间ꎬ差异较大ꎬ暗示了其基因功能的多样 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣２９、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣５０、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣５６、
性ꎮ 酸性蛋白数目(５４) 高于碱性蛋白数目(３２)ꎬ ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣５７、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣６１、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣８０ 在
平均亲水性的值皆小于 ０ꎬ皆为亲水蛋白ꎮ ５ 个定 ２４ ｈ 时显著上调ꎬ而 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣４６、ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣
位于叶绿体ꎬ１ 个定位于线粒体ꎬ１ 个定位于细胞 ５４、ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣５６、ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣８１ 在 ４８ ｈ 时显著
质ꎬ其余 ７９ 个均定位于细胞核ꎬＳｏｌｏｉｓｔ 亚家族的蛋 上调ꎻ下调基因为 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣３５、ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣５１、
白 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣１７ 被定位在细胞质( 表 ２)ꎮ 定位 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣５８、ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣８２ꎬ 显 著 下 调 的 时 间
在核外的基因在遗传进化上具有一定的独立性ꎬ 也不尽相同ꎮ 在叶中ꎬ上调基因有 １３ 个ꎬＡｖＡＰ２ /
与家族内其他基因差异较大(吴朝昕等ꎬ２０２２)ꎮ ＥＲＦ￣２１、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣４２、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣４４、 ＡｖＡＰ２ /
２.４ 欧耧斗菜 ＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白的二级结构分析 ＥＲＦ￣４６、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣４７、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣７２、 ＡｖＡＰ２ /
在欧耧斗菜 ＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白中ꎬα￣螺旋和无规 ＥＲＦ￣８６ 的表达量在 １２ ｈ 时显著上调ꎬＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣
则卷曲是构成二级结构的主要方式ꎮ ＡＰ２ / ＥＲＦ 转 ８０ 的表达量在 ２４ ｈ 时显著上调ꎬＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣２４、
录因子具有保守的 ＡＰ２ 结构域ꎬ该结构域的 Ｃ 端 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣５６、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣６１、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣６４、
存在 １ 个 ＲＡＹＤ 元件ꎬ可形成 １ 个两亲性 α￣螺旋ꎬ ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣７１ 的 表 达 量 在 ４８ ｈ 时 显 著 上 调ꎬ
这有利于维持 ＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白的稳定性( 苟艳丽 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣２３、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣３０、 ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣３７、
等ꎬ２０２０)(表 ３)ꎮ ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣５８、ＡｖＡＰ２ / ＥＲＦ￣７３ 为下调基因(图 ５)ꎮ
２.５ 欧耧斗菜 ＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白的保守基序分析 根 据 拟 南 芥 中 已 知 ＡＰ２ / ＥＲＲ 抗 逆 基 因
通过 ＭＥＭＥ 在线工具进行保守基序分析ꎬ结 (表 ４)ꎬ结合欧耧斗菜与拟南芥系统进化关系ꎬ 确
