Page 143 - 《广西植物》2023年第7期

７ 期 骈永茹等: 巨大侧耳原生质体制备条件的优化 １ ３ １ １

血球计数板中ꎬ在显微镜下观察原生质体的释放 端释放ꎻ中期ꎬ部分菌丝体侧壁破裂ꎬ原生质体从
情况ꎮ 结果显示ꎬ巨大侧耳的原生质体释放分为 菌丝体侧面释放ꎻ后期ꎬ随着酶解时间的延长ꎬ多
３ 个阶段( 图 １) :前期ꎬ少量原生质体从菌丝体尖 数菌丝体细胞壁破裂ꎬ大量原生质体释放出来ꎮ

Ａ. 前期ꎬ尖端释放ꎻ Ｂ. 中期ꎬ侧壁释放ꎻ Ｃ. 后期ꎬ大量释放ꎮ
Ａ. Ｅａｒｌｙ ｓｔａｇｅꎬ ｔｉｐ ｒｅｌｅａｓｅꎻ Ｂ. Ｍｉｄｄｌｅ ｓｔａｇｅꎬ ｓｉｄｅ ｒｅｌｅａｓｅꎻ Ｃ. Ｌａｔｅｒ ｓｔａｇｅꎬ ａ ｌａｒｇｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｒｅｌｅａｓｅ.
图 １ 显微镜下原生质体释放的部分图片
Ｆｉｇ. １ Ｓｏｍｅ ｐｉｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ ｒｅｌｅａｓｅ ｕｎｄｅｒ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ

２.２ 单因素实验结果 的适宜稳渗剂ꎮ
２.２.１ 菌丝体菌龄对原生质体制备的影响 由图 ２.２.３ 溶壁酶浓度对原生质体制备的影响 由图
２:Ａ 可知ꎬ巨大侧耳的原生质体产量ꎬ随着菌龄的 ２:Ｃ 可知ꎬ随着溶壁酶浓度的增加ꎬＰＧ４６ 和 ＰＧ７９

增加ꎬ呈现先上升后下降的趋势ꎮ 在 ５ ｄ 时ꎬＰＧ４６ 的原生质体产量先增加后降低ꎮ 当溶壁酶浓度为
和 ＰＧ７９ 的 原 生 质 体 产 量 均 达 到 最 高ꎬ 分 别 为 ２.５％时ꎬ两菌株的原生质体产量均达到最高ꎬ分别
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４.８２×１０ ＣＦＵｍＬ 和 ２.７４×１０ ＣＦＵｍＬ ꎬ且与 为 ７.６４×１０ ＣＦＵｍＬ 和 ７.３８×１０ ＣＦＵｍＬ ꎻ当
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其他菌龄的产量差异显著ꎻ菌龄超过 ５ ｄ 后ꎬ原生 浓度为 ３.０％时ꎬ原生质体产量下降且与 ２.５％浓度
质体产量下降ꎬ特别是 １１ ｄ 时原生质体产量最低ꎬ 的原生质体产量具有显著差异ꎮ 可见ꎬ制备巨大
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且低于最开始 ３ ｄ 的产量ꎬ分别为 ０.６２×１０ ＣＦＵ 侧耳原生质体的最适溶壁酶浓度为 ２.５％ꎮ
ｍＬ 和 ０.８６×１０ ＣＦＵｍＬ ꎮ 综上可知ꎬ两菌株制 ２.２.４ 酶解温度对原生质体制备的影响 由图 ２:Ｄ
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备原生质体的菌丝体最适菌龄为 ５ ｄꎮ 可知ꎬ随着酶解温度的升高ꎬＰＧ４６ 和 ＰＧ７９ 的原生
２.２.２ 稳渗剂种类对原生质体制备的影响 由图 质体产量呈现先增加后降低的趋势ꎮ 当酶解温度
２:Ｂ 可知ꎬ不同稳渗剂中ꎬＰＧ４６ 的原生质体产量 为 ３２ ℃ 时ꎬＰＧ４６ 的原生质体产量达到最高ꎬ为
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由高到低依次为甘露醇>山梨醇>蔗糖>硫酸镁> ６.２２× １０ ＣＦＵｍＬ ꎬ且与其他酶解温度差异显
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氯化钾ꎬ最高产量为 ２.７４×１０ ＣＦＵｍＬ ꎬ其中甘 著ꎻＰＧ７９ 的原生质体产量也在 ３２ ℃ 时达到最高ꎬ
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露醇、山梨醇和蔗糖三者中的原生质体产量无显 为 ３.５４ ×１０ ＣＦＵｍＬ ꎬ但与 ２７、３０、３５ ℃ 的原生
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著差异ꎬ但均显著高于硫酸镁和氯化钾ꎻＰＧ７９ 的 质体产量无显著差异ꎮ 综上可见ꎬＰＧ４６ 原生质体
原生质体产量由高到低依次为蔗糖>甘露醇>山梨 制备的最适酶解温度为 ３２ ℃ ꎬＰＧ７９ 原生质体制
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醇>氯化钾>硫酸镁ꎬ最高产量为 １.８８×１０ ＣＦＵ 备的适宜酶解温度较广ꎬ为 ２７ ~ ３５ ℃ ꎮ
ｍＬ ꎬ前三者产量无显著差异ꎬ但均显著高于硫酸 ２.２.５ 酶解时间对原生质体制备的影响 由图 ２:Ｅ
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镁和氯化钾ꎮ 可见ꎬ稳渗剂类别对 ＰＧ４６ 和 ＰＧ７９ 可知ꎬＰＧ４６ 和 ＰＧ７９ 的原生质体产量ꎬ随酶解时间
的原生质体产量影响显著ꎬ有机糖醇类稳渗剂甘 的增加呈先上升后下降的趋势ꎮ 当酶解时间为 ４
露醇、山梨醇和蔗糖均为制备巨大侧耳原生质体 ｈ 时ꎬ两菌株的原生质体产量均达到最高ꎬ分别为