Page 86 - 《广西植物》2024年第11期
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２ ０ ７ ０ 广 西 植 物 ４４ 卷
剂的临界胶束浓度( 李果等ꎬ２０１１ꎻ张茜ꎬ ２０２０) ꎬ ｖａｒｉａｎｃｅｓꎬ ＡＮＯＶＡꎬ ＬＳＤꎬ Ｐ<０.０５)ꎻ图片采用 ＧｒａｐｈＰａｄ
分别配制环糊精浓度为 ２０、４０、６０、８０、１００ ｍｇ Ｐｒｉｓｍ ９(ＧｒａｐｈＰａｄ ＳｏｆｔｗａｒｅꎬＵＳＡ)进行绘制ꎮ
￣１ ￣１
Ｌ ꎬ鼠李糖脂浓度为 １０、２０、３０、４０、５０ ｍｇＬ ꎬ
烷基糖苷浓度为 ２０、４０、６０、８０、１００ ｍｇＬ ꎮ 将 ２ 结果与分析
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叶片放入 ２ ｍＬ ２５ ｍｍｏｌＬ ＥＤＴＡ 溶液中ꎬ在固
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定位置施加 １０ μＬ 配制的含表面活性剂的亚硒 ２.１ 不同硒形态对水稻叶片亚细胞组分中硒分布
￣１ 和累积的影响
酸钠溶液( Ｓｅꎬ８００ ｍｇＬ ) ꎬ７ ｈ 取出叶片ꎬ用 ６
ｍＬ 蒸馏水冲洗叶片施硒部位ꎬ保存冲洗水用于 由图 ２ 可知ꎬＥＤＴＡ 中的硒含量表明了硒从叶
样品分析ꎮ 整个过程在避光条件下完成ꎮ 所有 片向水稻其他器官的迁移能力ꎬ叶片冲洗水中的
处理设 ３ 个重复ꎮ 硒表明外源硒的叶片残留ꎬ而 Ｆ１－Ｆ４ 表示叶片中
１.４ 样品前处理和分析 硒的亚细胞分布(以下部分相同)ꎮ 可以看出硒形
叶片亚细胞组分分离方法:将冲洗干净的叶 态不影响其在叶片中的亚细胞分布特征ꎬ硒含量
片擦干水分ꎬ亚细胞分离处理参照 Ｓｕ 等(２０１４) 等 均呈现细胞壁>细胞器>细胞液ꎮ 但是ꎬ不同硒形
的方法ꎮ 具体步骤如下:叶片加入 ２ ｍＬ 提取剂ꎬ 态间的亚细胞分布存在显著差异:细胞壁中硒含
在 ４ ℃ 条件下于瓷研钵中研磨ꎬ其中提取剂组成 量亚硒酸钠>纳米硒>硒代蛋氨酸>酵母硒ꎻ在细胞
￣１ ￣１ 器中亚硒酸钠≈纳米硒>硒代蛋氨酸>酵母硒ꎬ其
为蔗糖(０. ２５ ｍｏｌＬ ) ＋ Ｔｒｉｓ￣ＨＣｌ(５０ ｍｍｏｌＬ
ｐＨ ＝ ７.５ ) ＋ 二硫苏糖醇(１. ０ ｍｍｏｌＬ )ꎻ将研磨 中施用硒代蛋氨酸时细胞器中硒含量 Ｆ２>Ｆ３ꎬ 其
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液移入 １０ ｍＬ 离心管ꎬ用高速冷冻离心机 ６００ ×ｇ、 他处理两者无显著差异ꎻ细胞液中硒含量亚硒酸
离心 １０ ｍｉｎꎬ沉淀物为细胞壁(Ｆ１)ꎻ将上清液移入 钠>硒代蛋氨酸≈酵母硒>纳米硒ꎮ 此外ꎬ亚硒酸
１０ ｍＬ 离心管中ꎬ低温高速离心１ ０００ ×ｇ、离心 ２０ 钠处理 ＥＤＴＡ 溶液中硒含量显著高于其他 ３ 个处
ｍｉｎꎬ沉淀物为叶绿体( Ｆ２)ꎻ将上清液移入 １０ ｍＬ 理ꎬ而其冲洗水中硒含量最少ꎬ酵母硒和纳米硒含
离心管中ꎬ低温高速离心１０ ０００ ×ｇ、离心 ２０ ｍｉｎꎬ 量最高ꎬ说明水稻叶片 ７ ｈ 已有相对较多的硒向其
沉淀物为线粒体(Ｆ３)ꎬ上清液为细胞液(Ｆ４)ꎮ 他器官迁移ꎬ水稻对亚硒酸钠的吸收和转运效率
样品 的 消 煮 和 测 定 方 法: 将 实 验 中 获 得 的 最高ꎮ
ＥＤＴＡ 溶液和分离出的亚细胞组分( Ｆ１ －Ｆ４) 参照 ２.２ 不同亚硒酸钠浓度对水稻叶片亚细胞组分中
ＧＢ ５００９.９３－２０１７ 进行消解ꎮ 将称重的 ＥＤＴＡ、亚 硒分布和累积的影响
细胞组分移入坩埚中ꎬ加 １０ ｍＬ(９＋１) 浓硝酸＋高 由图 ３ 可知ꎬ随着浓度的增加ꎬ叶片中细胞壁
氯酸ꎬ盖上锅盖冷消化过夜ꎮ 次日于电热板上加 的硒含量呈持续上升趋势ꎻ每片叶片硒施加量为
热ꎬ待黄烟散尽、溶液变为清亮透明并伴有白烟产 ０ ~ ０.００８ ｍｇ 时ꎬ叶绿体和线粒体硒含量呈上升趋
生时ꎬ将电热板升温至 １８０ ℃ 加热至剩余体积为 势ꎬ而 后 未 发 生 显 著 变 化ꎻ 细 胞 液 中 硒 浓 度 在
１ ~ ２ ｍＬꎮ 冷却ꎬ加 ５ ｍＬ ５０％盐酸溶液ꎬ继续在 ８０ ０.００４ ~ ０. ００８ ｍｇ 时 急 速 上 升ꎬ 而 后 上 升 缓 慢ꎮ
℃ 电热板上加热 １ ｍｉｎꎬ取下用 １％柠檬酸定容至 ＥＤＴＡ 中硒含量随着亚硒酸钠施用量的增加也显
２５ ｍＬ 比色管中ꎬ静置一夜ꎬ取上清液于 １０ ｍＬ 离 著上升ꎬ在 ０.００６ ~ ０.００８ ｍｇ 之间变幅最大ꎻ细胞壁
心管中待测ꎮ 将 １.３ 实验中获得的冲洗水和上述 也呈持续上升趋势ꎬ说明施加浓度越高ꎬ滞留在细
待测液用原子荧光光谱仪(ＳＫ￣２００３Ａ)测定ꎮ 胞壁内的硒含量越多ꎬ并且向其他器官转运硒的
质 量 控 制: 消 解 过 程 中 以 标 准 物 质 速率相对稳定ꎬ大致均呈现上升趋势ꎮ 叶表硒残
(ＧＢＷ１００２２ 蒜粉) 和消解液空白作为对照ꎬ消解 留在硒施加量为 ０.０１ ｍｇ 每叶时才开始出现ꎮ
过程与样品一致ꎻ测定过程中增加硒标准溶液测 ２.３ 不同处理时间下水稻叶片亚细胞组分中硒分
定的方法控制测样质量ꎮ 布和累积的变化
１.５ 数据处理 由图 ４ 可知ꎬ在实验浓度下ꎬ叶表面会出现硒
采用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｏｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ ２０１６ 和 ＳＰＳＳ ２０.０ 残留ꎮ 水溶液残留硒在施用后迅速下降ꎬ３ ｈ 后下
(ＩＢＭꎬ ＵＳＡ)对实验数据进行数据统计分析ꎬ数据间 降趋势变缓ꎬ９ ｈ 后不再发生变化ꎮ ＥＤＴＡ 中的硒
比较 采 用 单 因 素 方 差 分 析 ( ｏｎｅ￣ｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ３ ｈ 后开始迅速上升ꎬ ７ ｈ 后无显著变化ꎬ说明 ７ ｈ
