Page 76 - 《广西植物》2024年第12期
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２ ２ ３ ４                                广  西  植  物                                         ４４ 卷
            热 １ 号’品种基因组数据( Ｘｉａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２２)ꎬ采用                １.４ 统计分析
            转录组学、基因克隆和生物信息学等方法ꎬ通过鉴                                 采用 Ｏｒｉｇｉｎ ｐｒｏ ２０２１ 科技绘 图 软 件 和 Ｏｆｆｉｃｅ
            定果仁中差异显著基因的结构与功能ꎬ拟探讨以                              ３６５ 进行数据整理ꎮ 所有基因表达实验数据均为
            下问题:(１)澳洲坚果果仁中与营养成分形成相关                            ３ 次生物重复和 ３ 次技术重复的平均值和标准误ꎮ
            的主效调控基因是哪些种类ꎻ(２) 基因具有哪些特                           采用 ＳＰＳＳ ２７ 版本对数据进行单因素方差分析、多
            异性的结构与功能ꎻ(３)不同澳洲坚果品种果仁蛋                            重比较分析和相关分析(宋海云等ꎬ２０２３)ꎮ
            白质含量积累与基因表达量的关系如何ꎮ 本研究
            对 ＭＹＢ 转录因子 ２２ 亚家族成员 ＭｉＭＹＢ４４Ｌ 进行                    ２  结果与分析
            结构分析、表达分析以及表达量与蛋白质含量之
            间的相关分析等ꎬ为深入开展澳洲坚果营养成分                              ２.１ 澳洲坚果‘桂热 １ 号’和‘Ａ４’果仁转录组分析
            的转录调控研究打下理论基础ꎮ                                         采用北京百迈客生物科技有限公司的 Ｉｌｌｕｍｉｎａ
                                                               高通量测序平台对澳洲坚果高蛋白质含量品种‘桂
            １  材料与方法                                           热 １ 号’和低蛋白质含量品种‘Ａ４’果仁的转录组进

                                                               行分析ꎮ 共获得 ３９.３４ Ｇｂ Ｃｌｅａｎ Ｄａｔａꎬ各样品 Ｃｌｅａｎ
            １.１ 材料                                             Ｄａｔａ 均达到 ５.９２ ＧｂꎬＱ３０ 碱基百分比在 ９４.０６％及
                 试验于 ２０２１—２０２３ 年在广西壮族自治区农业                     以上ꎮ ‘桂热 １ 号’比‘Ａ４’果仁上调基因 １ ６６７ 个ꎬ
            科学院广西南亚热带农业科学研究所澳洲坚果种                              下调基因 １ ７９８ 个ꎮ 进一步采用 ＧＯ 和 ＫＥＧＧ 富集
            质资源圃进行ꎮ 该地区属南亚热带季风气候ꎬ热                             分析发现差异基因主要在淀粉和糖代谢、氨基酸生
            量丰富ꎬ雨量充沛ꎬ日照充足ꎮ 选取不同果仁蛋白                            物合成和碳代谢路径(图 １:Ａ)ꎮ 随后发现一个差
            质含量差异显著的 １０ 个品种‘ ＪＷ’ ‘ ＳＨ’ ‘ Ａ１６’                  异基因 ｇｅｎｅ￣ＬＯＣ１２２０７７９３１ꎬ编码 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 转录
            ‘桂热 １ 号’‘Ｂ７’‘Ｂ４’‘皇家大果’‘Ｂ３’ ‘ Ａ３８’ 和                因子 ＭＹＢ４４Ｌꎬ在‘桂热 １ 号’ 中表达量显著高于其
            ‘Ａ４’果仁为材料测定蛋白质含量并提取 ＲＮＡꎮ                           在‘Ａ４’果仁中的表达量(图 １:Ｂ)ꎮ
            根据本单位自主研发的主推品种‘桂热 １ 号’ 基因                          ２.２ ＭｉＭＹＢ４４Ｌ 的生物信息学分析
            组数据、‘桂热 １ 号’和‘ Ａ４’ 果仁转录组数据筛选                           根据澳洲坚果高蛋白质含量品种‘ 桂热 １ 号’
            和克隆 ＭｉＭＹＢ４４Ｌ 基因ꎮ                                   和低蛋白质含量品种‘ Ａ４’ 果仁的转录组分析结
            １.２ ＭｉＭＹＢ４４Ｌ 克隆与表达规律分析                             果ꎬ从中筛选到一个差异显著的 ＭＹＢ 转录因子ꎮ
                 基因克隆采用 ＭｉＭＹＢ４４Ｌ￣Ｆ１ ５′￣ＴＣＣＧＴＴＴＣＴＣ              进一步搜索‘桂热 １ 号’基因组设计引物在澳洲坚
            ＴＣＡＴＣＴＴＣＴＣ￣３′和 ＭｉＭＹＢ４４Ｌ￣Ｒ１ ５′￣ＧＴＣＴＧＴＣＴＴＣ           果‘桂热 １ 号’ 品 种 果 仁 中 克 隆 了 ＭｉＭＹＢ４４Ｌ 基
            ＣＡＴＣＴＴＣＡＡＴＣ￣３′这对引物进行克隆ꎮ 荧光定量                       因ꎮ 该基因核苷酸全长 １ １６５ ｂｐꎬｃＤＮＡ 编码 ＯＲＦ
            ＭｉＡＣＴＩＮ 为内 参 基 因 和 相 应 的 荧 光 定 量 引 物 为             长度 ９９９ ｂｐꎬ编码 ３３２ 个氨基酸(图 ２)ꎮ 其编码蛋
            ＭｉＭＹＢ４４Ｌ￣ＱＦ ５′￣ＡＡＴＣＧＣＴＣＧＴＣＴＣＣＴＣＴＣ ￣３′和             白分 子 量 ３６. ３ ｋＤａꎬ 等 电 点 ８. １９ꎬ 分 子 式 为
            ＭｉＭＹＢ４４Ｌ￣ＱＲ ５′￣ＧＧＣＴＴＧＡＡＣＣＡＣＣＴＧＡＡＣ￣３′ꎻ              Ｃ   Ｈ   Ｎ  Ｏ   Ｓ ꎬ总原子数 ５ ０３５ꎬ不稳定系数
                                                                １５７２  ２４８６  ４６４  ５００  １３
            ＭｉＡＣＴＩＮ￣ＱＦ ５′￣ＴＣＴＴＣＡＴＴＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＡＧＡ￣３′和           ６２.９６ꎬ是不稳定蛋白ꎬ脂肪指数 ６７.２６ꎬ亲水性值
            ＭｉＡＣＴＩＮ￣ＱＲ    ５′￣ＴＴＣＣＡＣＣＴＧＡＡＴＧＣＣＧＴＣＴＡＧＣ￣３′ꎮ        －０.６３６ꎬ为疏水性蛋白ꎮ
            在美国 Ｂｉｏ￣ｒａｄ( 伯乐) 公司 ＣＦＸ９６ 荧光定量 ＰＣＲ                     为进一步分析 ＭｉＭＹＢ４４Ｌ 蛋白的结构和特殊
            仪中进行反应ꎮ 反应程序参照宋海云等(２０２３) 的                         的基序ꎬ采用 ＮＣＢＩ 在线工具和 ＭＥＭＥ 分析网站进
                          －ΔΔＣｔ                                行 生 物 信 息 学 分 析ꎮ 结 果 显 示ꎬ 澳 洲 坚 果
            方法ꎬ并使用 ２          方法分析处理荧光定量数据ꎮ
            １.３ 澳洲坚果蛋白质含量测定                                    ＭｉＭＹＢ４４Ｌ 与 蒂 罗 花 ( Ｔｅｌｏｐｅａ ｓｐｅｃｉｏｓｉｓｓｉｍａ ) 的
                 蛋白质含量测试依据中华人民共和国国家标                           ＴｓＭＹＢ４４ 和 荷 花 ( Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ) 的 ＮｎＭＹＢ４４
            准«食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定» ＧＢ /                         蛋白序列相似度最高ꎬ聚为一个亚族( 图 ３)ꎮ 含
            Ｔ５００９.５—２０１６ 中的凯氏定氮法进行测定(谭秋锦                       有 ８ 个特征的基序:１. ＨＲＡＦＴＰＥＥＤＥＴＩＩＲＡＨＡＲＦＧ
            等ꎬ２０２１ａ)ꎮ                                          ＮＫＷＡＴＩＡＲＬＬＳＧＲＴＤＮＡＩＫＮＨＷＮＳＴＬＫＲＫＣꎻ２. ＤＲ
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