Page 145 - 《广西植物》2024年第2期

２ 期 马晓雅等: 白及根腐病病原菌的鉴定及抑制效应研究 ３ ４ ７

选出能够抑制病原菌的中药材提取物ꎬ为白及根 腐病ꎮ 该病害多发生在 ６ 月中旬至 ８ 月初ꎬ整体发
腐病防治提供理论指导ꎮ 病率在 １５％左右ꎬ发病初期地上部无症状ꎬ地下部
根系和块茎出现褐色病斑ꎬ块茎切开后呈黑褐色
１ 材料与方法 软腐状ꎬ并伴有腥臭味ꎻ随着病情的加深ꎬ当地下
块茎出现 １ / ３ ~ １ / ２ 腐烂时ꎬ根系完全腐烂ꎬ地上茎
１.１ 试验材料 秆开始出现褐色ꎬ叶片尖部和基部出现不规则病

２０２１ 年 ６ 月ꎬ于桂林市雁山区(地处 １１０°１７′ Ｅ、 斑ꎬ病斑中央深褐色ꎬ边缘黄褐色至淡黄色ꎬ直至
２５°０１′ Ｎ)采集白及病株ꎬ初步判断为叶斑病或根 萎蔫ꎬ茎秆容易被抽出(图 １)ꎮ

Ａ. 田间病株ꎻ Ｂ. 田间病株茎秆ꎻ Ｃ. 病株块茎ꎻ Ｄ. 健康块茎ꎻ Ｅ. 健康植株ꎮ
Ａ. Ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｐｌａｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄꎻ Ｂ. Ｓｔａｌｋｓ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｐｌａｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄꎻ Ｃ. Ｔｕｂｅｒｓ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｐｌａｎｔꎻ Ｄ. Ｈｅａｌｔｈ ｔｕｂｅｒｓꎻ Ｅ. Ｈｅａｌｔｈ ｐｌａｎｔｓ.
图 １ 白及根腐病的症状
Ｆｉｇ. １ Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｔｕｂｅｒ ｒｏｔ ｉｎ Ｂｌｅｔｉｌｌａ ｓｔｒｉａｔａ

１.２ 试验方法 处ꎬ以接种 ＰＤＡ 培养基的健康白及叶片和块茎为对
１.２.１ 病原菌的分离 参照常规组织分离法( 方中 照组ꎻ每个叶片处理 ３ 个伤口ꎬ粘贴菌饼ꎬ重复 ３ 次ꎻ
达ꎬ１９９８)ꎬ从发病植株上采集病叶、叶鞘和地下块 每个块茎从中间切开ꎬ各处理 １ 个伤口ꎬ粘贴菌饼ꎬ
茎ꎬ冲洗干净ꎬ在病健交界处切下约 ５ ｍｍ × ５ ｍｍ 重复 ３ 次ꎮ 将样品平铺于带有湿润吸水纸的平盘
的小块组织ꎻ先用 ７５％的酒精处理 ３０ ｓꎬ再用 ０.１％ 内ꎬ做保湿处理ꎬ６ ｄ 后统计感病数和发病率ꎮ 计算
浓度的升汞溶液消毒 ６０ ｓ、无菌水冲洗晾干、无菌 公式:发病率 ＝ (感病数/ 接种总数)×１００％ꎮ
滤纸吸干水分后移置于 ＰＤＡ 培养基上ꎻ在每个培 １.２.２.２ 田间回接 选择室内回接致病的菌株ꎬ进
养皿中(Φ ＝ ９０ ｍｍ)放入 ３ ~ ４ 块组织ꎬ于 ２５ ℃ 恒 一步进行田间回接验证ꎮ 选择健康植株的叶片ꎬ
温条件下培养 ３ ｄꎬ对其进行纯化培养ꎮ 采用平板 用解剖刀轻轻割伤叶片上表面ꎬ面积约 ５ ｍｍ × ５
划线法进行菌种纯化ꎬ即在无菌操作台中用接种 ｍｍꎬ使用直径 ５ ｍｍ 的打孔器取培养基中生长良
环挑取菌丝ꎬ在 ＰＤＡ 平板上划线ꎬ进行编号后继续 好的病原菌菌饼ꎬ将带有菌丝的一面贴向叶片ꎬ并
置于 ２５ ℃ 恒温条件下培养ꎬ纯化至出现单个的菌 利用透明胶布粘附到已接种的叶片部位ꎻ以无菌

落即可ꎮ 的 ＰＤＡ 培养基作对照ꎮ 每个处理 ３ 株ꎬ每张叶片
１.２.２ 病原菌的致病性测定 粘贴 ３ 个菌饼ꎬ共计 ９ 个接种部位ꎮ 用保鲜袋罩
１.２.２.１ 室内回接 将 ３ 年生的白及组培苗健康植 住 ２４ ｈꎬ６ ｄ 后统计感病数和发病率ꎮ 计算公式:
株采回实验室ꎬ采取创伤接种法进行接种ꎮ 用无菌 发病率 ＝ (感病数 / 接种总数) ×１００％ꎮ
水冲洗叶片和块茎ꎬ用无菌滤纸吸干表面水分ꎬ在 １.２.２.３ 致病菌重新分离 对田间回接致病的植株
超净工作台内操作ꎬ步骤如下:用解剖刀将叶片背 进行再次分离ꎬ验证是否符合柯赫式法则ꎬ病原菌
面轻轻刮伤(约 ５ ｍｍ × ５ ｍｍ)ꎻ对块茎采用刺伤接 的分离方法同 １.２.１ꎮ
种法ꎬ使用直径 ５ ｍｍ 的打孔器在菌落边缘打取菌 １.２.３ 病原菌的形态学鉴定 对田间回接致病的
饼ꎻ将带有菌丝那一面覆盖在叶片和块茎的伤口 病原菌ꎬ挑取生长良好的病原菌菌落ꎬ采用插片培