Page 43 - 《广西植物》2024年第2期

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Ｇｕｉｈａｉａ Ｆｅｂ. ２０２４ꎬ ４４(２): ２４５－２５６

ＤＯＩ: １０.１１９３１/ ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０２３０３０５２
张世鑫ꎬ 吴绍华ꎬ 杨署光ꎬ 等ꎬ ２０２４. 橡胶树形成层组织的酵母双杂交 ｃＤＮＡ 文库构建及 ＨｂＨＤＡ６ 互作蛋白筛选 [Ｊ]. 广
西植物ꎬ ４４(２): ２４５－２５６.
ＺＨＡＮＧ ＳＸꎬ ＷＵ ＳＨꎬ ＹＡＮＧ ＳＧꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２４. Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｔｗｏ￣ｈｙｂｒｉｄ ｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｙ ｉｎ ｃａｍｂｉｕｍ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ Ｈｅｖｅａ
ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ＨｂＨＤＡ６ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ [Ｊ]. Ｇｕｉｈａｉａꎬ ４４(２): ２４５－２５６.

橡胶树形成层组织的酵母双杂交 ｃＤＮＡ 文库构建

及 ＨｂＨＤＡ６ 互作蛋白筛选

张世鑫 ꎬ 吴绍华 ꎬ 杨署光 ꎬ 晁金泉 ꎬ 史敏晶 ꎬ 葛立鑫 ꎬ 蒋 毅 ꎬ 田维敏 １∗
１
１
１
１ꎬ２
１ꎬ２
１
１
( １. 中国热带农业科学院橡胶研究所/ 热带作物生物育种全国重点实验室/ 农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用
重点实验室/ 海南省热带作物栽培生理学重点实验室ꎬ 海口 ５７１１０１ꎻ ２. 西藏农牧学院ꎬ 西藏 林芝 ８６００００ )
摘 要: 次生乳管是天然橡胶合成和贮存的场所ꎬ是由橡胶树树干树皮中维管形成层细胞分裂分化而来ꎮ
次生乳管的数量与天然橡胶产量直接相关ꎬ而这些乳管的数量取决于形成层分化次生乳管的频率(乳管分
化能力)ꎬ是橡胶树产量育种的主要指标ꎮ 前期研究中ꎬ我们发现组蛋白去乙酰化酶(ＨＤＡ) 抑制剂曲古抑
菌素 Ａ(ＴＳＡ)能诱导橡胶树乳管分化且组蛋白去乙酰化酶基因(ＨｂＨＤＡ６) 能够参与橡胶树乳管分化调控ꎮ
由于组蛋白乙酰化修饰调控橡胶树次生乳管分化的分子机制尚未阐明ꎬ因此该文使用冠菌素(ＣＯＲ)诱导橡
胶树形成层分化产生次生乳管的实验系统ꎬ以分离形成层组织为材料ꎬ构建酵母双杂交 ｃＤＮＡ 文库ꎬ以
ＨｂＨＤＡ６ 基因为诱饵来 筛 选 酵 母 双 杂 交 文 库ꎬ确 定 与 ＨｂＨＤＡ６ 相 互 作 用 的 蛋 白ꎮ 结 果 表 明:( １) 利 用
Ｇａｔｅｗａｙ 技术构建的均一化 ＣＯＲ 诱导橡胶树形成层组织的酵母双杂交 ｃＤＮＡ 文库ꎬ初级文库的容量为 ６.３４×
１０ ＣＦＵｍＬ ꎬ总单克隆数为 １.２７×１０ ꎬ文库重组率为 １００％ꎻ次级文库的容量为 ７.７２×１０ ＣＦＵｍＬ ꎬ总单
６
６
￣１
７
￣１
７
克隆数为 １.５４×１０ ꎬ文库重组率为 １００％ꎮ 初级文库和次级文库的插入片段平均长度分别为 １.１ ｋｂ 和 １.２
ｋｂꎮ (２)成功构建了筛选 ＨｂＨＤＡ６ 互作蛋白的 ｐＧＢＫＴ７￣ＨｂＨＤＡ６ 诱饵载体ꎬ并确认无自激活活性ꎮ (３) 使
用该诱饵载体对构建的酵母双杂交 ｃＤＮＡ 文库进行筛选ꎬ并通过 ＮＣＢＩ＿ＢＬＡＳＴ 比对和去除重复以后ꎬ获得
了 ２２ 个与 ＨｂＨＤＡ６ 发生互作的蛋白ꎬ包括 ＣＬＰ１、ＥＲＦ３、ＥＲＦ４、ＨＳＰ８２、ＬＡＲＰ６ａ、ＡＰＴ５、ＰＰ２Ａ、ＦＢＡ６ 等ꎮ 该
研究成果为解析组蛋白乙酰化修饰调控橡胶树次生乳管分化的分子机制提供了理论基础ꎬ为转基因改良橡
胶树的产胶潜力提供了候选基因ꎬ为高性能天然橡胶遗传改良育种提供了新线索ꎮ
关键词: 巴西橡胶树ꎬ 次生乳管分化ꎬ 维管形成层ꎬ 酵母双杂交ꎬ ＨｂＨＤＡ６
中图分类号: Ｑ９４３ 文献标识码: Ａ 文章编号: １０００￣３１４２(２０２４)０２￣０２４５￣１２

Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｔｗｏ￣ｈｙｂｒｉｄ ｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｙ ｉｎ

ｃａｍｂｉｕｍ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ
ｏｆ ＨｂＨＤＡ６ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ

收稿日期: ２０２３－０９－０１
基金项目: 海南省自然科学基金高层次人才项目(３２２ＲＣ７８１)ꎻ 国家自然科学基金(３１８００５７７)ꎻ 现代农业产业技术体系建设专项
(ＣＡＲＳ－３３－ＹＺ１)ꎮ
第一作者: 张世鑫(１９８６－)ꎬ博士ꎬ副研究员ꎬ主要从事橡胶树乳管发育和分子育种研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ) ｚｈａｎｇｓｈｉｘｉｎ＿１＠ １６３.ｃｏｍꎮ
∗
通信作者: 田维敏ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ主要从事橡胶树分子育种研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｗｍｔｉａｎ＠ １６３.ｃｏｍꎮ