Page 109 - 《广西植物》2024年第5期
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５ 期 林婷等: 氮磷钾添加对罗汉松土壤微生物功能多样性的影响 ８ ９ ７
１.２ 试验设计 表 １ 正交试验设计表
本试验采用盆栽法ꎬ以两年生罗汉松实生苗 Ｔａｂｌｅ １ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｄｅｓｉｇｎ ｔａｂｌｅ
为试材ꎬ平均株高 ５０ ｃｍꎬ平均地径 ０.５ ｃｍꎮ 盆栽 养分添加量
盆规格高 ４５ ｃｍꎬ内径 ２０ ｃｍꎮ 供试土壤为森林生 处理 Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ
土与河砂 １ ∶ １ 混合ꎬ森林生土较为贫瘠ꎬ能较好 Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｎ Ｐ ２ Ｏ ５ Ｋ ２ Ｏ
￣１
￣１
￣１
(ｇｋｇ ) (ｇｋｇ ) (ｇｋｇ )
地说明养分添加后对土壤微生物功能多样性的影
响ꎮ ２０１８ 年 ３ 月ꎬ每盆装土 ８ ｋｇꎬ植苗一株ꎮ 采用 Ａ ０.０７０ ０.０３５ ０.０４０
Ｌ９ 正交试验设计(Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１)ꎬ将氮磷钾添 Ｂ ０.０７０ ０.０７０ ０.０８０
加量各设置 ３ 个水平梯度ꎬ每个处理 １５ 个重复ꎮ Ｃ ０.０７０ ０.１４０ ０.１６０
氮添加选用尿素(Ｎ≥４６％)ꎬ磷添加选用过磷酸钙 Ｄ ０.１４０ ０.０３５ ０.０８０
(Ｐ Ｏ ≥１２％)ꎬ钾添加选用氯化钾( Ｋ Ｏ≥６０％)ꎬ Ｅ ０.１４０ ０.０７０ ０.１６０
２ ５ ２
均为速效肥ꎮ 将肥料与土壤按表 １ 中的设置混合 Ｆ ０.１４０ ０.１４０ ０.０４０
后置于盆中ꎬ每周对盆栽进行补水 ３ 次ꎬ保证苗木 Ｇ ０.２８０ ０.０３５ ０.１６０
的正常生长ꎮ ２０１８ 年 ７ 月ꎬ测量株高地径ꎬ取 ０ ~
Ｈ ０.２８０ ０.０７０ ０.０８０
２０ ｃｍ 层盆土ꎬ每 ５ 盆土合成一个土样ꎬ消除个体
Ｉ ０.２８０ ０.１４０ ０.０４０
差异ꎬ每个处理共 ３ 个混合样供测量ꎮ 试验土样
ＣＫ ０ ０ ０
ｐＨ 值和有机质、全氮、全 磷、全 钾、碱 解 氮、速 效
磷、速 效 钾 分 别 为 ７. ５ 和 ２３. ５４０、 ０.８５０、 ０. ３３６、
￣１ 菌( ａｎｔｉｏｂａｃｔｅｒｉａꎬ ＡＣＴ) 和 固 氮 菌 ( ｎｉｔｒｏｇｅｎ￣ｆｉｘｉｎｇ
１２.６８０、０.１１０、０.００７、０.０５４ ｇｋｇ ꎮ
１.３ 土壤微生物量碳、氮的测定 ｂａｃｔｅｒｉｕｍꎬＮＦＢ) 的数量ꎮ 细菌用牛肉膏蛋白胨培
土壤微生物量碳( ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃａｒｂｏｎꎬ ＭＢＣ)、微 养基培养ꎬ放线菌用高氏 １ 号培养基培养ꎬ真菌用
生物量氮(ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｎｉｔｒｏｇｅｎꎬ ＭＢＮ) 采用氯仿熏蒸 马丁氏培养基培养ꎬ固氮菌用甘露醇琼脂培养基
法(Ｋöｎöｎｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１８)测定ꎮ 称取 １０ ｇ 新鲜土 培养ꎮ 细菌培养 １ ~ ２ ｄꎬ真菌 ３ ~ ５ ｄꎬ固氮菌 ４ ~ ５
样于 ２７ ℃ 、６５％湿度的培养箱内培养 ２４ ｈ 后取出 ｄꎬ放线菌 ５ ~ ７ ｄꎬ培养结束后取出平板计数ꎮ
置于密封性完好的真空干燥器中ꎬ同时放入盛有 １.５ 土壤微生物功能多样性的测定
使用 Ｂｉｏｌｏｇ￣ＥＣＯ 微平板法测定土壤微生物群
１０ ｍＬ 氯仿的小烧杯和一个盛有 ５０ ｍＬ 稀 ＮａＯＨ
落功能多样性ꎮ 将 １０ ｇ 已处理的土样加入灭菌处
溶液的小烧杯ꎬ真空泵抽真空使氯仿剧烈沸腾 ５
ｍｉｎ 后关闭ꎬ于 ２５ ℃ 培养箱黑暗培养 ２４ ｈꎮ 对照 理的生理盐水中充分振荡ꎬ取上层清液稀释得到
￣３
１０ 的菌悬液后接种到 Ｂｉｏｌｏｇ 生态板中ꎬ置于 ２５
为未熏蒸处理ꎮ 培养结束后每个样品加入 ５０ ｍＬ
０.５ ｍｏｌＬ Ｋ ＳＯ 溶液ꎬ充分振荡后过滤ꎬ澄清溶 ℃ 黑暗条件下培养ꎬ每间隔 ２４ ｈ 用微生物自动鉴
￣１
２ ４
液立即使用 ＴＯＣ 仪测定微生物生物量碳、氮ꎮ 计 定仪上测定 ５９０ ｎｍ 和 ７２０ ｎｍ 的吸光值ꎮ 测定完
成后分别计算每个时间的土壤颜色平均变化率
算公式如下ꎮ
(ａｖｅｒａｇｅ ｗｅｌｌ ｃｏｌｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ ＡＷＣＤ)ꎮ 待培养
Ｅ － Ｅ
Ｂ ＝ Ｃ ０ ꎻ
Ｃ
Ｋ ＥＣ 稳定后分别计算 Ｓｈａｎｎｏｎ ｉｎｄｅｘ (Ｈ)、Ｓｉｍｐｓｏｎ ｉｎｄｅｘ
(Ｄ)、ＭｃＩｎｔｏｓｈ ｉｎｄｅｘ (Ｕ)和 Ｐｉｅｌｏｕ ｉｎｄｅｘ (Ｅ)ꎬ评估
Ｅ － Ｅ
Ｎ
Ｂ ＝ １ ꎮ 土壤微生物群落常见种优势度、物种丰富度和均
Ｎ
Ｋ ＥＮ
式中: Ｂ 为微生物量碳ꎻＥ 为熏蒸样的微生物 匀度(吴则焰等ꎬ ２０１３)ꎮ 计算公式如下ꎮ
Ｃ Ｃ
量碳ꎻＥ 为未熏蒸样的微生物量碳ꎻＫ 为转换系数 Ｈ ＝ －∑Ｐ ×ｌｎ(Ｐ )ꎻ
ｉ
ｉ
０ ＥＣ
２
Ｄ ＝ １－∑(Ｐ ) ꎻ
０.４０ꎻＢ 为微生物量氮ꎻＥ 为熏蒸样的微生物量氮ꎻ ｉ
Ｎ
Ｎ
２
Ｅ 为未熏蒸样的微生物量氮ꎻＫ 为转换系数 ０.４５ꎮ Ｕ ＝ (∑Ｎ )ꎻ
１ ＥＮ ｉ
１.４ 土壤微生物数量测定 Ｈ
Ｅ ＝ ꎻ
土壤微生物量测定采用 稀 释 平 板 涂 布 法 测 ｌｎＳ
定ꎬ主要测量细菌(ｂａｃｔｅｒｉｕｍ)、真菌(ｆｕｎｇｕｓ)、放线 ＡＷＣＤ ＝ [∑(Ｃ －Ｒ)] / ３１ꎮ
ｉ
