Page 178 - 《广西植物》2025年第1期

１ ７ ４ 广 西 植 物 ４５ 卷
够改变植物化合物的积累ꎬ减少药用植物的生产 选取出颗粒饱满、大小均匀、形态特征完好且未遭
成本ꎬ有利 于 解 决 自 然 资 源 短 缺 的 问 题 ( Ｗｅｎ ｅｔ 虫害病害的马尿泡种子ꎬ保存于 ４ ℃冰箱中备用ꎬ标
ａｌ.ꎬ ２０２３)ꎮ 目前ꎬ有很多在茉莉酸甲酯诱导下植 本( 标本号: Ｘ２３０５１１３６) 存放于西北高原生物研
物生理的相关报道ꎬ而根系分泌物作为植物根系 究所ꎮ
固有的生理功能ꎬ极少有茉莉酸甲酯对其分子作 １.２ 马尿泡无菌苗培养
用机制的研究ꎮ 因此ꎬ在茉莉酸甲酯处理下了解 参照雷天翔等( ２０１５) 的方法ꎬ将种子在 ２５０
根系分泌物有效成分的变化ꎬ对植物资源保护具 ｍｇＬ 的赤霉素浸泡 ２４ ｈꎬ用 ７５％乙醇和 ２.５％次
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有重要作用ꎮ 氯酸钠进行消毒处理ꎬ并且点播在 １００ ｍＬ ＭＳ 固
马尿泡( Ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉａ ｔａｎｇｕｔｉｃａ) 为茄科植物ꎬ是 体培养基的组培瓶中ꎬ每瓶 ６ 粒ꎬ共 ７２０ 株( 黑暗
高山砾石滩生态系统的代表性物种ꎬ最早记载于藏 培养 １４ ｄꎬ温度 ２５ ℃ ꎻ在 ３ ０００ ｌｘ 光照条件下培养
医经典«四部医典»ꎬ是一种传统藏药ꎮ 主要分布于 ４ 个月ꎬ温度 ２５ ℃ ꎬ２４ ｈ 培养)ꎮ
甘肃、青海、新疆、四川、西藏以及阿尔金山沙地ꎬ常 １.３ 根系分泌物收集及处理方法
生长于青藏高原海拔 ３ ２００~５ ０００ ｍ 的高山砂砾及 将生长 ４ 个月的马尿泡无菌苗移植到 １００ ｍＬ
干旱草原地区ꎮ 它的主要活性成分是托烷类生物 霍格兰溶液中ꎬ每瓶培养液中放入 ５ 株ꎮ 吸取 １０
碱ꎬ具有镇痛、解痉、消肿的功效ꎬ临床上可治疗挛 μＬ 茉莉酸甲酯原液 ４５６ μＬ 无水乙醇助溶ꎬ配置成
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性疼痛、 疮毒、 癌瘤和皮肤病等 ( 贡磊磊和冯欣ꎬ １５０ μｍｏｌＬ 培养液ꎬ用 １ ｍＬ 无菌注射器吸取ꎬ
２０１９)ꎮ 由于托烷类生物碱的获取完全来源于天然 并涂抹在植株上ꎬ每隔 １ ｄ 涂抹 ２ 次(４ 个样本组ꎬ
植物ꎬ马尿泡中因含有较高的生物碱而被过度采 ５ 瓶为一组重复 ６ 组为一个样本组ꎬ每个样本组有
伐ꎬ因此 ２００９ 年马尿泡已被列为二级濒危藏药用植 １８０ 株)ꎮ 对收集的根系分泌物用旋转蒸发仪( 温
物(武颖ꎬ２０２３)ꎮ 其分布区域狭窄、野外植株数量 度 ４５ ℃ ꎬ转速 ６６ ｒｍｉｎ )浓缩约 １ ｍＬꎬ并用 ０.２２
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少、生境气候环境恶劣、再生能力弱、资源锐减ꎬ目 μｍ 水系滤膜过滤ꎮ 将 １００ μＬ 液体样本移液至
前ꎬ正考虑将马尿泡列入一级濒危藏药名录(汪松 １.５ ｍＬ 离心管中ꎬ加入 ４００ μＬ 乙腈 ∶ 甲醇 ＝ １ ∶ １
和解焱ꎬ２００４ꎻ武颖ꎬ２０２３)ꎮ 目前ꎬ对马尿泡的研究 和含 ０.０２ ｍｇｍＬ Ｌ￣２￣氯苯丙氨的内标提取液ꎬ
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侧重于组培、化学成分与药理活性方面ꎬ几乎没有 涡旋 ３０ ｓꎬ低温超声提取 ３０ ｍｉｎ(５ ℃ ꎬ４０ ｋＨｚ)后ꎬ
对其根系分泌物的研究报道ꎬ并且马尿泡资源正处 将样品静置于－２０ ℃ 冰箱中 ３０ ｍｉｎꎮ 用 ４ ℃ 低温
于紧缺状态ꎬ在自然界中数量有限ꎮ 了解马尿泡根 离心机以 １３ ０００ ｇ 离心 １５ ｍｉｎ 移取上清液ꎬ将上
系分泌物组分ꎬ探究茉莉酸甲酯诱导下关键分泌物 清 液 用 氮 气 吹 干ꎬ 并 重 新 溶 解 于 １００ μＬ
的变化ꎬ对马尿泡资源延续具有重要意义ꎮ 因此ꎬ 乙腈 ∶ 水 ＝ １ ∶ １ 复溶液ꎮ 低温超声萃取 ５ ｍｉｎ(５
本研究以无菌溶液培方式下的马尿泡根系为研究 ℃ ꎬ４０ ｋＨｚ)ꎬ在 ４ ℃ 离心机离心ꎬ将上清液通过
对象ꎬ采用非靶向代谢组学 ＬＣ￣ＭＳ / ＭＳ 方法ꎬ通过 ０.２２ μｍ 滤膜过滤ꎬ并转移至进样瓶中上机分析ꎮ
分析 ０、１５０ μｍｏｌＬ 茉莉酸甲酯处理 ３、７ ｄ 后马尿 １.４ ＬＣ￣ＭＳ / ＭＳ 分析
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泡根系分泌物的变化ꎬ探究高山植物根系分物的代 色谱条件:ＨＳＳ Ｔ３ 色谱柱型号为 １００ ｍｍ ×
谢机制ꎬ以期为马尿泡资源的可持续发展与利用提 ２.１ ｍｍ ｉ.ｄ.ꎬ１.８ μｍꎬ流动相 Ａ 为 ９５％ 水＋５％乙腈
供新思路ꎮ 本研究拟探讨以下问题:(１) 马尿泡根 (０.１％ 甲酸)ꎬ流动相 Ｂ 为 ４７.５％ 乙腈＋４７.５％ 异
系分泌物中主要成分的作用ꎻ(２) 茉莉酸甲酯处理 丙醇 ＋ ５％ 水 ( ０. １％ 甲 酸)ꎮ 流 速 为 ０. ４０ ｍＬ
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下对马尿泡根系分泌物代谢机制的影响ꎮ ｍｉｎ ꎬ柱温为 ４０ ℃ ꎮ
质谱条件:质量扫描范围为 ７０ ~ １ ０５０ ｍ / ｚꎬ鞘
１ 材料与方法 气流速为 ５０ Ｌｈ ꎬ辅助气流速为 １３ Ｌｈ ꎬ辅助
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气加热温度为 ４２５ ℃ ꎬ正模式喷雾电压为 ３ ５００
１.１ 试验材料 Ｖꎬ负模式喷雾电压为－３ ５００ Ｖꎬ离子传输管温度
所用材料马尿泡于 ２０２３ 年采自青海市果洛藏 为 ３２５ ℃ ꎬ归一化的循环碰撞能为 ２０ Ｖ~ ４０ Ｖ~ ６０
族自 治 州 玛 沁 县 ( ９８° ００′—１００° ５６′ Ｅ、 ３３° ４３′— Ｖꎮ 一级 分 辨 率 为 ６０ ０００ꎬ 二 级 质 谱 分 辨 率 为
３５°１６′ Ｎꎬ平均海拔为 ４ １００ ｍ)ꎮ 从马尿泡囊泡中 ７ ５００ꎬ采用 ＤＤＡ 模式采集数据ꎮ