Page 66 - 《广西植物》2025年第4期

６ ８ ０ 广 西 植 物 ４５ 卷
基组合ꎻ观察和统计不同移栽基质对生根苗移栽 后观察丛生芽分化情况ꎮ 其中ꎬ分化率(％) ＝ 已
驯化成活的影响ꎬ以筛选最佳移栽驯化栽培基质ꎮ 分化成芽的个数 / 接种的原球茎数×１００ꎮ
本研究旨在建立天贵卷瓣兰规模化快繁种苗的技 １.２.５ 丛生芽的增殖 将 １.２.４ 中分化最好的培养基
术体系ꎬ为其开发利用和资源保护奠定基础ꎮ 获得的丛生芽转接到增殖培养基上进行培养ꎬ采用
４ 因素 ３ 水平 Ｌ (３ ) 正交试验设计ꎬ以 ＭＳ 为基本
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１ 材料与方法 培养基ꎬ４ 因素及 ３ 水平分别为 ６￣ＢＡ 浓度 １.０、２.０、
３.０ ｍｇＬ ꎬＫＴ 浓度 ０.１、０.２、０.５ ｍｇＬ ꎬＮＡＡ 浓
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１.１ 试验材料 度 ０.０５、０.１、０.５ ｍｇＬ ꎬ添加物土豆泥 １００ ｇＬ 、
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天贵卷瓣兰种子采自广西雅长兰科植物国家 香蕉泥 １００ ｇＬ 以及椰汁 ２００ ｍＬＬ 为 １ 个变量
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级自然 保 护 区ꎬ 为 人 工 授 粉 结 实 的 成 熟 未 开 裂 因素的 ３ 个水平ꎬ共计 ９ 个培养基配方ꎮ 蔗糖和琼
蒴果ꎮ 脂的使用量以及 ｐＨ 值设置同 １.２.３ꎬ另外添加活性
１.２ 试验方法 炭 １ ｇＬ ꎮ 每个处理播种 １０ 瓶ꎬ３ 次重复ꎮ 培养
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１.２.１ 培养条件 培养室设置温度(２５±２)℃ ꎬＬＥＤ １２０ ｄ 后统计生长情况ꎮ 其中ꎬ增殖系数 ＝ 丛生芽总
光源ꎬ光照时间 １２ ｈꎬ光照强度 １ ５００ ~ ２ ０００ ｌｘ(暗 数/ 接种的丛生芽数ꎮ
培养阶段除外)ꎮ １.２.６ 丛生芽壮苗生根 将 １.２.５ 中增殖效果最好
１.２.２ 外植体灭菌 选取成熟尚未开裂的蒴果ꎬ用 的培养基获得的 ２ ~ ３ ｃｍ 的丛生芽转接到壮苗生
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洗洁精洗去表面附着的杂质ꎬ自来水冲洗 １０ ｍｉｎꎬ 根培养基中进行培养ꎬ采用 ４ 因素 ３ 水平 Ｌ (３ )
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将蒴果移至超净工作台上ꎬ先用 ７５％的无水乙醇 正交试验设计ꎬ以 ＭＳ 为基础培养基ꎬ４ 因素及 ３
浸泡 ４５ ｓꎬ再用无菌水冲洗一次ꎬ后用 ０.１％升汞浸 水平分别为 ６￣ＢＡ 浓度 ０.２、０.５、１.０ ｍｇＬ ꎬＮＡＡ
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泡 １０ ｍｉｎꎬ并不时振荡以保证种子表面消毒彻底ꎬ 浓度 ０.２、０.５、１.０ ｍｇＬ ꎬＫＴ 浓度 ０.１、０.２、０.５
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最后用无菌水冲洗 ５ 次ꎬ置于灭菌的滤纸上吸干 ｍｇＬ ꎬ添加物香蕉泥 １００ ｇＬ 、椰汁 ２００ ｍＬ
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表面的水分ꎬ备用ꎮ Ｌ 和土豆泥 １００ ｇＬ 为 １ 个因素的 ３ 个水平ꎬ共
１.２.３ 无菌播种和原球茎的诱导 在超净工作台 计 ９ 个培养基配方ꎮ 蔗糖和琼脂的使用量以及 ｐＨ
中ꎬ用灭过菌的解剖刀将消毒后蒴果尖端切开小 值设置同 １.２.３ꎬ另外添加活性炭 １ ｇＬ ꎮ 每个
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口ꎬ轻轻抖动ꎬ将种子均匀撒在诱导培养基上ꎬ立 处理播种 １０ 瓶ꎬ３ 次重复ꎮ 培养 １２０ ｄ 后统计生
即盖上瓶盖ꎬ放入培养室内进行培养ꎮ 无菌播种 长情况ꎮ 其中ꎬ生根数 ＝ 生根的总数 / 接种数ꎬ根
和原球茎诱导的基本培养基为 ＭＳꎬ６￣ＢＡ 浓度分别 长 ＝ 根系总长 / 根系总数ꎬ生根率(％) ＝ 生根的丛
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为 １.０ ｍｇＬ 和 ２.０ ｍｇＬ ꎬＮＡＡ 浓度均为 ０.１ 生芽数量 / 接种的丛生芽数量×１００ꎮ
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ｍｇＬ ꎬ椰汁浓度为 ０、１００、２００ ｍＬＬ ꎬ共计 ６ １.２.７ 生根苗移栽驯化 将生根的试管苗于 ９ 月份
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个培养基配方ꎮ 各培养基均添加蔗糖 ３０ ｇＬ 、 进行移栽驯化ꎬ出瓶前室内暗处理 ５ ｄꎬ室外阴凉通
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琼脂 ７ ｇＬ ꎬｐＨ 值 ５.５ ~ ５.８ꎬ每个处理播种 １０ 风处炼苗 １５ ｄꎮ 出瓶时用清水洗净根部培养基ꎬ置
瓶ꎬ３ 次重复ꎬ播种后暗处理 １５ ｄ 后放置培养室中 于阴凉通风处晾干ꎬ移栽至经多菌灵消毒的移栽基
进行培养ꎬ培养 ６０ ~ ９０ ｄ 后观察种子萌发情况ꎬ并 质中ꎮ 基质Ⅰ:泥炭土 ∶ 树皮 ∶ 苔藓 ＝ １ ∶ １ ∶ １ꎮ 基
划分为 ５ 个等级ꎮ Ｏｌｙｍｐｕｓ ｓｚｘ￣１６ 显微镜拍照种子 质Ⅱ:树皮 ∶ 珍珠岩 ∶ 蛭石 ＝ １ ∶ １ ∶ １ꎮ 基质Ⅲ:树
的萌发情况ꎮ 皮 ∶ 苔藓 ＝ １ ∶ １ꎮ 基质Ⅳ:蛭石 ∶ 珍珠岩 ＝ ２ ∶ １ꎮ
１.２.４ 丛生芽的分化 将 １.２.３ 中种子萌发最好的 基质 Ｖ:泥炭土 ∶ 珍珠岩 ∶ 蛭石 ＝ １ ∶ １ ∶ １ꎮ 所有基
培养基获得的原球茎转入分化培养基进行分化培 质配比均为体积比ꎬ用育苗盘进行栽植ꎬ每个育苗
养ꎬ基本培养基分别为 Ｂ 、Ｎ 和 ＭＳꎬＩＢＡ 的浓度分 盘栽植 ２０ 丛ꎬ３ 次重复ꎮ 移栽 ３０ ｄ 后ꎬ分别喷施 １.０
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别为 ０ ｍｇＬ 和 ０.２ ｍｇＬ ꎬ共计 ６ 个培养基配 ｇＬ 花宝 １ 号和 ２００ 倍的兰灵王(微生物菌剂)ꎬ
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方ꎮ 蔗糖和琼脂的使用量以及 ｐＨ 值设置同１.２.３ꎮ 每隔 １０ ｄ 喷施 １ 次ꎬ连喷 ３ 次ꎮ ３ 个月后统计成活
每个处理接种 １０ 瓶ꎬ每瓶接种 ２００ 个原球茎ꎬ３ 次 率以及生长情况ꎮ 其中ꎬ移栽驯化成活率(％) ＝ 成
重复ꎬ接种后放置培养室中进行培养ꎬ培养 １２０ ｄ 活的数量/ 移栽的总数×１００ꎮ