Page 36 - 《广西植物》2025年第6期
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1 0 2 2                                广  西  植  物                                         45 卷
                                               表 1  植被恢复样地基本信息
                                    Table 1  Basic information of the vegetation restoration plot
              采样地点                                                                    坡度               海拔
                            土地利用类型                经度          纬度         土壤类型                  坡向
              Sampling                                                                Slope           Altitude
                            Land use type       Longitude    Latitude     Soil type           Aspect
                site                                                                   (°)             (m)
                1              耕地              105°36′36″ E  25°42′00″ N  石灰土        24.892 1   西       758
                              Cropland                                  Limestone soil         West
                              花椒林              105°36′36″ E  25°42′00″ N  石灰土        28.101 5  西南       754
                       Zanthoxylum bungeanum forest                     Limestone soil       Southwest
                             天然次生林             105°36′36″ E  25°42′00″ N  石灰土        25.323 8  西北       738
                         Natural secondary forest                       Limestone soil       Northwest
                2              耕地              105°37′12″ E  25°42′00″ N  石灰土        17.631 1  西南       842
                              Cropland                                  Limestone soil       Southwest
                              花椒林              105°37′12″ E  25°42′00″ N  石灰土        16.184 6  西南       846
                       Zanthoxylum bungeanum forest                     Limestone soil       Southwest
                             天然次生林             105°37′12″ E  25°42′00″ N  石灰土        14.567 5  西南       820
                         Natural secondary forest                       Limestone soil       Southwest
                3              耕地              105°38′24″ E  25°41′24″ N  石灰土        15.980 7   南       735
                              Cropland                                  Limestone soil         South
                              花椒林              105°38′24″ E  25°41′24″ N  石灰土        11.708 6  东南       731
                       Zanthoxylum bungeanum forest                     Limestone soil        Southeast
                             天然次生林             105°38′24″ E  25°41′24″ N  石灰土        11.329 0   南       739
                         Natural secondary forest                       Limestone soil         South



            及有机碳测定ꎮ 土壤微生物样品使用经过消毒灭                                 土 壤 EOC 含 量 测 定 采 用 333 mmol  L         ̄1
            菌处理的铲子和手套进行采集ꎬ分别采集表层 0 ~                           KMnO 氧化比色法( Cambardella & Elliottꎬ 1992):
                                                                    4
            10 cm 和 10 ~ 20 cm 的土壤大约 25 g 并装入灭菌                称取过 0.25 mm 筛的风干土样放入 50 mL 离心管
            离心管ꎬ使用便携式冰箱当天运回实验室ꎬ并于                              中ꎬ加入 25 mL 333 mmolL KMnO 溶液后于振
                                                                                          ̄1
                                                                                                 4
            -80 ℃ 冷冻保存待用于土壤微生物分析ꎮ 本研究                          荡机上振荡 1 hꎬ同时进行空白试验ꎬ3 次重复ꎮ 振
            选取耕地土壤作为对照ꎬ以自然恢复的次生林、人                             荡后样品离心 5 min(4 000 r min )ꎬ取上清液用
                                                                                               ̄1
            工恢复花椒林的土壤为研究对象(图 1)ꎮ                               去离子水按 1 ∶ 250 稀释ꎮ 用分光光度计在 565
            1.3 分析方法                                           nm 波长处进行比色ꎬ根据消耗的 KMnO 量和不含
                                                                                                   4
            1.3.1 土壤有机碳及组分变化分析  土壤样品研磨                         土壤的空白组进行比较ꎬ计算土壤 EOC 含量ꎮ

                                              ̄1                1.3.2 土壤微生物( 细菌和真菌) 群落分析  微生
            过 0.25 mm 筛后用稀 HCl(4 molL )去除无机碳ꎬ
                                                                                               ®
            使用 元 素 分 析 仪 - 稳 定 同 位 素 质 谱 仪 ( Vario             物 DNA 提取和测定:根据 FastDNA            Spin Kit ( MP
            ISOPOTE Cube ̄IsoprimeꎬElementar 公司ꎬ德国)测定           BiomedicalsꎬUnited States) DNA 抽提试剂盒进行
            SOC 含量ꎮ 参照 Cambardella 和 Elliott(1992) 的方          微生物群落总 DNA 抽提ꎬ利用 1%琼脂糖凝胶电
            法测定 POC 和 MOC 的含量ꎬ具体操作如下:称取过                       泳检测 DNA 质量(电压 5 Vcm ꎬ时间 20 min)ꎬ
                                                                                              ̄1
            2 mm 筛的风干土样共 20 gꎬ放入 250 mL 三角瓶中ꎬ                  DNA 浓 度 和 纯 度 使 用 紫 外 分 光 光 度 计
                                    ̄1
            加入六偏磷酸钠(5 gL ) 共 60 mLꎬ手摇 10 ~ 15                NanoDrop2000 ( Thermo Fisher Scientificꎬ US) 进行
            min 后放入往复式振荡器(18 ℃ꎬ90 rmin )上振                   测定ꎮ
                                                     ̄1
            荡 18 hꎬ将分散液过 53 μm 筛后用去离子水洗至筛                          Illumina Miseq 测 序: 选 用 前 引 物 338F ( 5′ ̄
            下水澄清ꎬ筛上部分为颗粒有机质ꎬ分离后于铝盒                             ACTCCTACGGGAGGCAGCAG ̄3′) 和 后 引 物 806R
            中 80 ℃烘干 24 h 后进行称量并计算其占全土的百                       (5′ ̄GGACTACHVGGGTWTCTAAT ̄3′) 对土壤细菌
            分比ꎬ随后研磨过 0.149 mm 筛ꎬ取适当重量样品测                       16S rRNA 基因 V3 -V4 区进行扩增ꎬ选用前引物
            定 SOC 含量ꎬ乘以其所占全土的百分比得出 POC                         ITS1F( CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA) 和后引物
            含量ꎮ 筛下部分( <53 μm) 为矿物结合有机质ꎬ其                       ITS2R( GCTGCGTTCTTCATCGATGC) 对 土 壤 真 菌
            MOC 含量为 SOC 含量与 POC 含量之差ꎮ                          ITS1-ITS2 区进行 PCR 扩增ꎮ 将同一样本的 PCR
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