Page 18 - 《广西植物》2026年第6期

６ 期 刘亚敏等: 樟属柠檬醛型树种内生真菌的群落结构分析 ９ ３ ３

特异性、组织部位的分化规律及其与化学型代谢 表 １ 樟属 ３ 种柠檬醛型树种信息及样本编号
的潜在关联具有重要的理论和应用价值ꎮ Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｃｉｔｒａｌ ｃｈｅｍｏｔｙｐｅ ｔｒｅｅ
本研究以樟属 ３ 种柠檬醛型树种内生真菌群 ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｃａｍｐｈｏｒａ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ ｎｕｍｂｅｒｓ
落为研究对象ꎬ采用高通量测序技术ꎬ系统分析其 树种 采集部位 样品编号
Ｔｒｅｅ ｓｐｅｃｉｅｓ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｓｉｔｅ Ｓａｍｐｌｅ Ｎｏ.
内生真菌群落的组成、多样性和结构差异ꎬ拟探讨
猴樟 根 Ｒｏｏｔ ＱＢＯ＿Ｇ
以下问题:(１)相同化学型不同樟属树种的内生真 Ｃ. ｂｏｄｉｎｉｅｒｉ
茎 Ｓｔｅｍ ＱＢＯ＿Ｊ
菌群落差异ꎻ(２)樟属 ３ 种柠檬醛型树种内生真菌
叶 Ｌｅａｆ ＱＢＯ＿Ｙ
群落的物种多样性特征及其优势类群的生态分布
黄樟 根 Ｒｏｏｔ ＱＰＯ＿Ｇ
规律ꎻ(３)这些特征是否暗示内生真菌群落在宿主 Ｃ. ｐａｒｔｈｅｎｏｘｙｌｏｎ
茎 Ｓｔｅｍ ＱＰＯ＿Ｊ
柠檬醛生物合成与维持中发挥着潜在的功能性
叶 Ｌｅａｆ ＱＰＯ＿Ｙ
作用ꎮ
樟 根 Ｒｏｏｔ ＱＣＡ＿Ｇ
Ｃ. ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ
１ 材料与方法 茎 Ｓｔｅｍ ＱＣＡ＿Ｊ
叶 Ｌｅａｆ ＱＣＡ＿Ｙ
１.１ 实验材料和取样方法
试验材料取自江西省樟树繁育与开发利用产 电泳检测ꎬ目标条带使用 ＡｘｙＰｒｅｐＤＮＡ 凝胶回收试
业技术工程化中心樟树优良无性系采穗圃( 江西 剂盒(ＡＸＹＧＥＮ 公司) 进行目的片段切胶回收ꎬ以
省南昌市ꎬ１１６°０３′２８″Ｅ、２８°４１′５５″Ｎ)ꎬ选用 ３ 种柠 Ｔｒｉｓ＿ＨＣｌ 缓冲液洗脱ꎬ并再次电泳验证ꎮ 合格的
檬醛型樟属优良无性系 ８ 年生扦插苗ꎬ分别为猴 ＰＣＲ 产物委托上海美吉生物医药科技有限公司
樟 ( Ｃａｍｐｈｏｒａ ｂｏｄｉｎｉｅｒｉ ＱＢＯ )、 黄 樟 ( Ｃ. (ｗｗｗ.ｍａｊｏｒｂｉｏ.ｃｏｍ)ꎬ利用 Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｈｉｓｅｑ 平台进行
ｐａｒｔｈｅｎｏｘｙｌｏｎꎬ ＱＰＯ )、 樟 ( Ｃ. ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍꎬ ＱＣＡ )ꎮ 高通量测序ꎮ 所得数据在 Ｉ￣Ｓａｎｇｅｒ 生物信息分析
２０２４ 年 １０ 月ꎬ在统一生境条件下ꎬ针对 ３ 种目标 云平台( ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｉ￣ｓａｎｇｅｒ.ｃｏｍ / ) 完成数据处理
树种ꎬ每种随机选取 ４ 株长势均一的健康植株作 和生物多样性分析ꎮ
为生物学重复ꎬ对每株植株ꎬ分别采集无损伤的成 １.３ 数据处理
熟叶片、当年生健壮新枝及健康细根ꎬ共 ３６ 个样 原始测序数据经质控过滤后ꎬ使用 ＱＩＩＭＥ 软
本ꎬ采样工具经 ７５％酒精消毒并灼烧灭菌ꎬ样本用 件按 ９７％ 相 似 度 水 平 下 进 行 操 作 分 类 单 元
无菌自封袋标记ꎬ样本编号及宿主信息如表 １ 所 (ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｕｎｉｔꎬＯＴＵ) 聚类ꎮ ＯＴＵ 通过
示ꎮ 采集样本后立即置于保温箱内(内含冰袋) 运 与 ＵＮＩＴＥ 等数据库进行比对完成物种注释ꎮ 采用
回实验室ꎬ用于内生真菌 ＤＮＡ 提取ꎮ Ｓｈａｎｎｏｎ、Ｓｉｍｐｓｏｎ、Ｃｈａｏ 和 Ａｃｅ 指数分析样本内生
１.２ 样本 ＤＮＡ 提取和 ＰＣＲ 扩增 真菌群落的 α 多样性ꎮ 通过主坐标分析( ＰＣｏＡ)
１.２.１ 样本表面消毒和 ＤＮＡ 提取 参照宋培勇等 比较不同样本间内生真菌群落结构的差异ꎮ 利用
(２０１１)的方法ꎬ对樟属 ３ 种柠檬醛型树种的根、茎、 Ｋｒｕｓｋａｌ￣Ｗａｌｌｉｓ 秩和检验分析不同树种及组织间物
叶进行表面消毒ꎬ步骤如下:无菌水漂洗 ３０ ｓ→７５％ 种相对丰度的显著差异ꎬ以筛选出具有组间差异
乙醇浸泡 １ ｍｉｎ→２％ＮａＣｌＯ 溶液浸泡 ３ ｍｉｎ→７５％ 的内生真菌类群ꎮ
乙醇浸泡 １ ｍｉｎ→无菌水漂洗 ３０ ｓꎮ 消毒完成后ꎬ采
２ 结果与分析
用植物基因组 ＤＮＡ 提取试剂盒(林雪玲等ꎬ２０１９)
提取 ＤＮＡꎬ操作按试剂盒说明书进行ꎮ
１.２.２ ＰＣＲ 扩增及测序 ＰＣＲ(王荣谈等ꎬ２００９) 采 ２.１ 序列的有效数据

用 ＴｒａｎｓＧｅｎ ＡＰ２２１￣０２: ＴｒａｎｓＳｔａｒｔ Ｆａｓｔｐｆｕ ＤＮＡ 在樟属 ３ 种柠檬醛型树种的根、茎和叶共 ３６
Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅꎬ引物为 ＩＴＳ１Ｆ(ＣＴＴＧＧＴＣＡＴＴＴＡＧＡＧＧＡＡ 个样品中ꎬ通过测序获得 ２ ２０７ ８７８ 条序列ꎻ碱基
ＧＴＡＡ) 和 ＩＴＳ２Ｒ ( ＧＣＴＧＣＧＴＴＣＴＴＣＡＴＣＧＡＴＧＣ )ꎬ 数为 ５７５ ０１１ ２６７ꎬ平 均 长 度 为 ２４９. ９９０ ３０２ ４７２
扩增片段为 ＩＴＳ１Ｆ＿ＩＴＳ２Ｒ 区ꎮ 每个样本设 ４ 个重 ｂｐꎬ最短序列长度为 １４２ ｂｐꎬ最长序列长度为 ５３８
复反应ꎮ ＰＣＲ 产物经混合后ꎬ通过 ２％琼脂糖凝胶 ｂｐꎬ序列平均长度为 ３４０ ｂｐꎮ 由图 １ 可知ꎬＳｉｍｐｓｏｎ