Page 84 - 《广西植物》2026年第9期

１ ５ ２ ０ 广 西 植 物 ４６ 卷
京)有限公司的 ＴＩＡＮＧｅｌ Ｍｉｄｉ 纯化试剂盒对 ＰＣＲ 蒙氏浮丝藻
产物进行纯化ꎮ 回收产物使用北京擎科生物科技 Ｐｌａｎｋｔｏｔｈｒｉｘ ｍｏｕｇｅｏｔｉｉ ( Ｋüｔｚｉｎｇ ｅｘ Ｌｅｍｍｅｒｍａｎｎ)
股份有限公司的 ｐＣｌｏｎｅ００７ 通用简单载体试剂盒ꎬ Ａｎａｇｎｏｓｔｉｄｉｓ ＆ Ｋｏｍáｒｅｋ １９８８ (图 １)
将其插入克隆载体中ꎮ 将含有插入序列的质粒转 藻丝呈淡蓝绿至黄绿色ꎬ衰老时变黄ꎻ单生或

ＴＭ 于密集水华中形成簇状团块ꎮ 具无色薄鞘ꎬ直或
化到大肠杆菌 Ｔｒｅｌｉｅｆ ５α 感受态细胞中ꎬ在 ３７ ℃
下培养 １２ ~ １４ ｈꎮ 使用标准质粒引物 Ｍ１３Ｆ( ５′￣ 微弯ꎬ无分枝ꎬ自由漂浮ꎮ 横壁处明显收缩ꎬ末端
ＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴ￣３′)和 Ｍ１３Ｒ(５′￣ＣＡＧＧ 细胞钝圆或窄锥形ꎬ细胞呈圆柱形ꎬ藻丝宽 ５.７８ ~
ＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＣ￣３′)对 携 带 目 标 片 段 的 克 隆 ７.４８ μｍꎬ营养细胞长 １.６４ ~ ２.７８ μｍꎬ细胞长短于
进行双向测序ꎬ测序服务由武汉天一华煜基因科 宽ꎬ细胞颗粒状内容物均匀分布在细胞中ꎮ 具有

技有限公司提供ꎮ 气囊ꎬ无帽状结构ꎬ无异形胞和厚壁孢子ꎮ 通过形
１.４ 系统发育分析 成藻殖段进行繁殖ꎮ 从细胞大小到形态学特点均
将测序返回的序列通过 ＮＣＢＩ 网站的比对工具 与 Ｓｕｄａ 等(２００２)报道中的描述相似ꎬ结合系统发
ＢＬＡＳＴ 进行比对ꎬ从 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中下载相关参 育学结果ꎬ可以确定本研究获得的藻株 ＷＺＵ２３１４
考序列ꎬ用于分子系统进化树的构建ꎮ 使用 ＭＡＦＦＴ 为 浮 丝 藻 属 的 物 种 蒙 氏 浮 丝 藻 ( Ｐｌａｎｋｔｏｔｈｒｉｘ
ｖ ７.４６３ 软件对所有序列进行多重序列比对(Ｋａｔｏｈ ｍｏｕｇｅｏｔｉｉ)ꎮ
＆ Ｓｔａｎｄｌｅｙꎬ ２０１３)ꎬ之后用 ＢｉｏＥｄｉｔ ｖ７.０.９ 软件进行 生境:在淡水河流中自由漂浮ꎮ
裁剪ꎬ得到一个由 ６０ 条序列构成的长为 ８９０ ｂｐ 的 分布:中国广西ꎮ
多重 序 列 矩 阵 ( Ｅｌｋｉｎｓꎬ ２０１３ )ꎮ 以 Ｇｌｏｅｏｂａｃｔｅｒ 参考藻株:ＷＺＵ２３１４ꎮ
ｖｉｏｌａｃｅｕｓ ＰＣＣ７４２１ 为门水平外类群ꎬ使用 ＭＥＧＡ ｖ１１ ２.２ 系统发育学分析
软件基于邻接法(ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇꎬＮＪ) 构建系统发 通过测序我们得到了全长为 １ ８６１ ｂｐ 的 １６Ｓ－
育树ꎬ自展值为 １０ ０００ꎬ并且使用 ＰｈｙｌｏＳｕｉｔｅ 分子系 ２３Ｓ ｒＲＮＡ 序列ꎮ 基于 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列对其进
统发育软件的 ＭｏｄｅｌＦｉｎｄｅｒ 模块分析(Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ 行系统发育分析ꎬ在 ＮＣＢＩ 选取颤藻科和微鞘藻科
２０２０)ꎬ使用最大似然法(ｍａｘｉｍｕｍ ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄꎬＭＬ)和 下的 ５９ 条序列ꎬ使用最大似然(ＭＬ) 法、邻接( ＮＪ)
贝叶斯分析构建系统发育树(Ｒｏｎｑｕｉｓｔ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１２ꎻ 法和贝叶斯分析来构建系统发育树ꎬ以黏菌藻目
Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５)ꎬ自展值为 １０ ０００ꎮ 使用软件 的藻株 Ｇｌｏｅｏｂａｃｔｅｒ ｖｉｏｌａｃｅｕｓ ＰＣＣ７４２１ 为门水平外
ＦｉｇＴｒｅｅ１.４. ３ 对所得系统进化树进行可视化编辑 类群ꎬ发现 ＷＺＵ２３１４ 与浮丝藻属的序列聚为一个
(Ｐａｇｅꎬ １９９６)ꎮ 使用 ＭＥＧＡ ｖ１１ 软件以 Ｋｉｍｕｒａ２￣ 紧密的系统进化分支ꎬＮＪ 和 ＭＬ 方法的相应自展
ｐａｒａｍｅｔｅｒ 模型进行 ｐ￣ｄｉｓｔａｎｃｅ 计算构建 １６Ｓ ｒＲＮＡ 值和贝叶斯后验概率分别为 １００％ / ９４％ 和 １( 图
相似性矩阵ꎮ ３)ꎮ 使 用 ＮＣＢＩ 的 在 线 比 对 工 具 ＢＬＡＳＴ 对 １６Ｓ
１.５ ＩＴＳ 二级结构分析 ｒＲＮＡ 序列部分进行相似性比对ꎬ结果表明ꎬ本研
ＩＴＳ 模 拟 结 构 的 构 建ꎬ 首 先 确 定 １６Ｓ － ２３Ｓ 究中 ＷＺＵ２３１４ 与浮丝藻属中的蒙氏浮丝藻的 １６Ｓ
ｒＲＮＡ 间 隔 区 ＩＴＳ 的 长 度ꎬ 其 次 在 ｔＲＮＡｓｃａｎ￣ＳＥ ｒＲＮＡ 相似度为 ９９.９１％( 表 １)ꎬ高于 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基
２. ０. ９ 网 站 上 确 认 ｔＲＮＡ Ｉｌｅ 和 ｔＲＮＡ Ａｌａ 的 位 置 因序列相似度阈值ꎬ根据其系统发育学位置和 １６Ｓ

(Ｌｏｗｅ ＆ Ｅｄｄｙꎬ １９９７)ꎬ然后将 Ｄ１￣Ｄ１′螺旋片段、 ｒＲＮＡ 基因相似度结果ꎬ支持本研究获得的藻株
Ｂｏｘ￣Ｂ 螺 旋 片 段 和 Ｖ３ 螺 旋 片 段 相 应 序 列 输 入 ＷＺＵ２３１４ 为中国广西浮丝藻属的新记录种ꎮ 上述
ＲＮＡｆｏｌｄ ＷｅｂＳｅｒｖｅｒ 网 站ꎬ 在 线 折 叠 其 二 级 结 构 系统发育分析在确认 ＷＺＵ２３１４ 分类地位的同时ꎬ
(Ｉｔｅｍａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０００ꎻ Ｍａｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００４)ꎬ最后 也进一步明确了浮丝藻属在微鞘藻科中的系统发

使用 Ａｄｏｂｅ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｏｒ ２０２１ 软件进行美化和调整ꎮ 育关系ꎮ 系统发育树显示ꎬ 浮丝藻属作为一个独
立的进化支ꎬ与形态相近的浮游丝状蓝藻属( 如拟
２ 结果与分析 浮丝藻属) 形成了清晰的姐妹群关系ꎮ 尽管它们
在藻丝形态上较为相似ꎬ但本研究的系统发育树
２.１ 形态学观察 表明其在 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列上存在显著分化ꎬ这
浮丝藻属(Ｍｉｃｒｏｃｏｌｅａｃｅａｅꎬ Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａｌｅｓ) 支持将其划分为不同属级分类单元的观点ꎮ 这一