Page 128 - 《广西植物》2020年第9期
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９ 期 周春元等: 林下参内生球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 对人参病原真菌的抑制作用 １ ３ ４ ３
箱ꎬ上海博迅实业有限公司 医 疗 设 备 厂ꎻＳＷ￣ＣＪ￣ 式如下: Ｔ ＝ (Ｒｃ － Ｒｐ) / Ｒｃ × １００％ ꎮ
ＩＦＤ 洁净工作台ꎬ苏净集团苏州安泰空气技术有限 式中: Ｔ 为抑制率ꎻ Ｒｃ 为无菌水处理平板中人
公司ꎻＬＤＺＸ￣３０ＫＢＳ 立式压力蒸汽灭菌器ꎬ上海申 参病原菌菌落生长直径平均值ꎻ Ｒｐ 为发酵液处理
安医疗器械厂ꎻＮｉｋｏｎ ＴＳ 倒置相差显微镜ꎬ日本尼 平板中人参病原菌菌落生长直径平均值ꎮ
康公司ꎻＰＬ４００２ 电子天平ꎬ梅特勒－托利多仪器上 １.２.３ 球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 孢子悬浮液对人参病原菌的
海有限公司ꎮ 抑制作用 将球毛壳菌菌株在恒温培养箱中培养
１.２ 方法 ７ ｄꎬ用灭菌针刮取分生孢子ꎬ加入无菌水配置成孢
１.２.１ 球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 与人参病原菌平板对峙培养 子悬浮液ꎬ用血球计数的方法将溶液配成浓度为
将保存的球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 菌株和供试人参病原 每毫升 １×１０ 个孢子悬浮液母液ꎬ随后将母液稀释
７
菌菌株分别转接到 ＰＤＡ 平板上ꎬ于 ２５ ℃ 黑暗条件 成每毫升 １×１０ 、１×１０ 、１×１０ 、１×１０ 个不同浓度
６
３
４
５
下恒温培养 ７ ｄ 后ꎬ用 ５ ｍｍ 打孔器在菌落边缘打 的孢子悬浮液ꎮ 吸取 １ ｍＬ 制备好的悬浮液ꎬ加入
取菌饼ꎮ 采用两点对峙平板培养法ꎬ将人参病原 ４０ ~ ４５ ℃ 的 ＰＤＡ 平板中ꎬ混匀ꎬ以加入 １ ｍＬ 无菌
菌菌饼分别接种于 ＰＤＡ 平板一侧ꎬ距离人参病原 水的平板作对照ꎬ将人参病原菌菌饼接种于平板
菌菌饼 １ ｃｍ 处接入球毛壳菌菌饼ꎬ同时以只接种 中央ꎬ置于 ２５ ℃ 恒温培养箱中培养ꎬ培养 ７ ｄ 后采
人参病原菌的平板为对照( ＣＫ)ꎬ 每个处理重复 ３ 用十 字 交 叉 法 测 量 菌 落 生 长 直 径 ( 索 相 敏 等ꎬ
次ꎬ置于 ２５ ℃ 黑暗条件下恒温培养 ７ ｄꎬ观察记录 ２０１８)ꎮ 抑制率计算公式如下:
结果并拍照( 刘彩云等ꎬ２０１５)ꎮ 抑制率计算公式 Ｔ ＝ (Ｒｃ － Ｒｐ) / Ｒｃ × １００％ ꎮ
如下: 式中:Ｔ 为抑制率ꎻＲｃ 为无菌水处理平板中人
Ｔ ＝ (Ｒｃ － Ｒｐ) / Ｒｃ × １００％ ꎮ 参病原菌菌落生长直径平均值ꎻＲｐ 为孢子悬液处
式中: Ｔ 为抑制率ꎻ Ｒｃ 为只接种人参病原菌菌 理平板中人参病原菌菌落生长直径平均值ꎮ
落生长直径平均值ꎻ Ｒｐ 为对峙培养人参病原菌菌
落生长直径平均值ꎮ ２ 结果与分析
１.２.２ 球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 发酵液对人参病原菌的抑制
作用 ２.１ 球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 菌丝对人参病原菌的抑制作用
１.２.２.１ 发酵液的制备 将保存的球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 从表 １ 可以看出ꎬ球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 菌丝对人参
菌株在 ＰＤＡ 平板上活化 ７ ｄ 后ꎬ在无菌的条件下ꎬ 病原菌均有不同程度的抑制作用ꎬ其中ꎬ对人参黑
用 ５ ｍｍ 打孔器打取 １０ 个菌饼ꎬ转接到装有 １００ 斑病菌的抑制作用最高ꎬ为 ３０.８０％ꎬ其次是人参
ｍＬ ＰＤ 液体培养基的 ２５０ ｍＬ 锥形瓶中ꎬ于黑暗条 立枯病菌、人参菌核病菌、人参根腐病菌ꎬ抑制率
件下 ２５ ℃ 、１２０ ｒｍｉｎ 转速恒温摇床上振荡培养 分别为 ２４.３７％、２１.３９％、１９.０７％ꎬ对人参灰霉病
￣１
７ ｄꎬ无菌条件下ꎬ将培养的菌液经灭菌的双层纱布 菌抑制率最小ꎬ为 １８.５３％ꎮ 当球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 菌
￣１ 丝与人参病原菌菌丝对峙培养 ７ ｄ 时ꎬ均会产生抑
过滤除去菌丝ꎬ滤液经 ５ ０００ ｒｍｉｎ 离心 １５ ｍｉｎ
去除沉淀ꎬ上清液经孔径为 ０.２２ μｍ 的细菌过滤 制区域ꎬ球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 菌丝与人参菌核病菌和人
器过滤得到球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 无菌发酵液ꎬ置于冰箱 参灰霉病菌培养ꎬ产生的抑制区域明显ꎬ与人参黑
(４ ℃ ) 中保存备用(宋勇等ꎬ２０１８)ꎮ 斑病菌、人参立枯病菌和人参根腐病菌培养ꎬ产生
１.２.２.２ 发酵液对人参病原菌菌丝生长的抑制作用 的抑制区域不太明显(图 １)ꎮ
吸取 ２ ｍＬ 制备好的发酵液ꎬ加入 ４０ ~ ４５ ℃ 的 ２.２ 球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 发酵液对人参病原菌的抑制作用
ＰＤＡ 平板中ꎬ混匀ꎬ以加入 ２ ｍＬ 无菌水的平板作 从表 ２ 可以看出ꎬ球毛壳菌 ＦＳ￣０１ 发酵液对人
对照ꎬ将人参病原菌菌饼接种于平板中央ꎬ置于 ２５ 参病原菌均有不同程度的抑制作用ꎮ 其中ꎬ对人
℃ 恒温培养箱中培养ꎬ培养 ７ ｄ 后采用十字交叉法 参灰霉病菌的抑制作用最高ꎬ为 ８２.０９％ꎬ其次是
测量菌落生长直径(方中达ꎬ１９９８)ꎬ抑制率计算公 人参菌核病菌、 人参黑斑病菌、 人参立枯病菌ꎬ 抑
