Page 120 - 《广西植物）》2021年第1期

ϟ ϟ ᤃ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
԰ԡϟऐɯᤥ 本研究利用母系遗传的 ዹᡱ᧕શዶ 和双亲遗 对于 ሕ 个叶绿体 ᧕શዶ 分子片段ᖔ利用 ۪ዶВ۪ ׹ᔀʢ঎
传的 Ⴟ᧕શዶ 直接测序的方法ᖔ以期探究枳属和富 ࿗঎ԡᤦϟԡ ྉ୩औᆍ஦஦ᆍʢʛᖔ ԰ԡԡሕɯ 软件进行序列联合并进行

民枳的分类地位ᤥ 同质性检验ᖔ若 ۗᢦԡ঎ԡጢ 则说明片段的一致性好ᖔ可
以用于联合分析ᤥ 因为 ԰ 个核基因ྉ᧧ఋ୩ 和 ዞ၊ʗጢɯ外
ϟজ 材料与方法 显子片段都存在双峰的个体ᖔ 且一致性检验 ۗ ጐ

ԡ঎ԡጢᖔ因此ᖔ未将核基因进行联合分析ᤥ
ϓॹϓ 材料
本研究共采集枳属和柑橘属植物的 ࿗Ꭾ 份分子 表 ϓই 本研究材料的采集信息
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ୩ᑕቝᡱ᤟ᔽႿ੫ ᔽႿ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ᤟ᔀᑕ஦ ᡷᔽ༁༁ࣼᔀ༁ ᔽႿ ᡷၤᔽ༁ ༁ᡷࣼʛᢃ
材料ᖔ其中包括 ँ 份栽培于中国科学院昆明植物
物种名称 采集位置ྉ样品数目ɯ
研究所的富民枳新鲜植物叶片材料ᖔ这 ँ 株富民
୩ᡱᔀዹᔽᔀ༁ ୩ᑕቝᡱ᤟ᔀ ༁ᔽᡷᔀ༁ ྉ༁ᑕቝᡱ᤟ᔀ Ⴟࣼቝᤦᔀʢ༁ɯ
枳于 ϟँँ԰ 年从富民枳的原生地富民县大营镇老 富民枳 中国科学院昆明植物研究所 ྉँɯ
青山冬瓜岭引种ྉϟԡ԰঎࿗ँ࿗ᤃጢ ጶᖔ԰ጢ঎԰԰ጢऐሕ શᖔ海拔 ۗᅳႥዞᔠʗࣩ໧ ᡓᅳᤀᡥᐹႥʐʗᐹ ᣽ࣼႿቝᔽႿ੫ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀ ᆍ஦ ାᆍᡷᑕႿᢃᖔऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ
ᆍ஦ ୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ྉँɯ
԰ ϟऐԡ ቝɯଫऐ 份枳的新鲜植物叶片材料ᖔ其中 ԰ 份 枳 中国科学院昆明植物研究所ᖔ四川达州市 ྉऐɯ

来自中国科学院昆明植物研究所ଫሕ 份红河大翼橙 ۗॹ ᡙʗᔠஏᅳᤀᔠᐹᡙᐹ ᣽ࣼႿቝᔽႿ੫ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀ ᆍ஦ ାᆍᡷᑕႿᢃᖔ ऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ ᆍ஦
୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ᑕႿʛ ʛᑕझၤᆍࣼ ዹᔽᡷᢃᖔ ୩ᔽዹၤࣼᑕႿ ۪ʢᆍ׹ᔽႿዹᔀ ྉऐɯ
低温冷藏植物叶片材料ྉ 中国科学院昆明植物研 红河大翼橙 云南省红河州 ྉሕɯ
究所资源室龚洵课题组ɯଫᤃ 份枳橙的新鲜植物叶 ࣷᔠᡙʗࣩ໧ ၊ᅳႥ੖၊ᓣᓣႥ໧ᔠ໧ ̀ᆍႿ੫ၤᔀᖔ ɟࣼႿႿᑕႿ ۪ʢᆍ׹ᔽႿዹᔀ ྉሕɯ
枳橙 中国农业科学院柑橘研究所 ྉᤃɯ
片材料ଫ࿗ 份柚新鲜植物叶片材料ଫᤃ 份柑橘新鲜 ࣷᔠᡙʗࣩ໧ ġ ᔠႥ໧ᔠᡙᅳʗࣩቂ ऊᔽᡷʢࣼ༁ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀᖔ ऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ ᆍ஦
植物叶片材料ଫሕ 份香橼新鲜植物叶片材料ଫሕ 份 ዶ੫ʢᔽዹࣼ᤟ᡷࣼʢᑕ᤟ ୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ྉᤃɯ
柚 中国农业科学院柑橘研究所 ྉ࿗ɯ
金柑新鲜植物叶片材料ଫ԰ 份箭叶橙新鲜植物叶片 ࣷॹ ቂᐹଝᔠቂᐹ ऊᔽᡷʢࣼ༁ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀᖔ ऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ ᆍ஦
材料和 ሕ 份宜昌橙新鲜植物叶片材料ᤥ 另外采集 ዶ੫ʢᔽዹࣼ᤟ᡷࣼʢᑕ᤟ ୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ྉ࿗ɯ
柑橘 中国农业科学院柑橘研究所 ྉᤃɯ
ϟ 份九里香ྉࣩ᤹ʗʗᐹᡥᐹ ᓣଝᅳᡙᔠዞᐹɯ新鲜植物叶片材料作 ࣷॹ ʗᓣᡙᔠዞࣩᤀᐹᡙᐹ ऊᔽᡷʢࣼ༁ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀᖔ ऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ ᆍ஦
为本研究的外类群ᤥ 采集的新鲜叶片立即放入硅 ዶ੫ʢᔽዹࣼ᤟ᡷࣼʢᑕ᤟ ୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ྉᤃɯ
香橼 中国农业科学院柑橘研究所 ྉሕɯ
胶干燥ᖔ将干燥好的叶片在ͱ԰ԡ ቩ 冰箱保存备用ᤥ ࣷॹ ቂᓣʐᔠዞᐹ ऊᔽᡷʢࣼ༁ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀᖔ ऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ ᆍ஦
ዶ੫ʢᔽዹࣼ᤟ᡷࣼʢᑕ᤟ ୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ྉሕɯ
植物材料采集信息见表 ϟᤥ
ϓॹԣ 方法 金柑 中国农业科学院柑橘研究所 ྉሕɯ
ࣷॹ ᢝᐹᡓᅳႥᔠዞᐹ
ऊᔽᡷʢࣼ༁ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀᖔ ऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ ᆍ஦
采用改良的 ऊఋዶା 法 从 植物材料中提取总 ዶ੫ʢᔽዹࣼ᤟ᡷࣼʢᑕ᤟ ୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ྉሕɯ
箭叶橙 中国农业科学院柑橘研究所 ྉ԰ɯ
᧕શዶ ྉ᧕ᆍᢃ᤟ᔀᖔ ϟँँϟɯᤥ 通过查阅文献ᖔ从常用于植
ࣷॹ ၊ᡥ໧ᡙʗᔠଝ ऊᔽᡷʢࣼ༁ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀᖔ ऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ ᆍ஦
物系统学ܦ群体遗传学和保护生物学等的 ᧕શዶ 分 ዶ੫ʢᔽዹࣼ᤟ᡷࣼʢᑕ᤟ ୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ྉ԰ɯ
子片段中进行筛选ᖔ共筛选到 ሕ 个 ዹᡱ᧕શዶ 片段和 宜昌橙 中国农业科学院柑橘研究所 ྉሕɯ
ࣷॹ ዞᐹצᐹᤀᓣʗᔠᓣᔠ ऊᔽᡷʢࣼ༁ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀᖔ ऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ ᆍ஦
԰ 个 Ⴟ᧕શዶ 片段ྉ 唐政ᖔ ԰ԡϟ࿗ଫ 杨晓明ᖔ ԰ԡϟᎮɯᖔ其 ዶ੫ʢᔽዹࣼ᤟ᡷࣼʢᑕ᤟ ୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ྉሕɯ
引物信息见表 ԰ᤥ 对于目的条带清晰ᖔ特异性好的 九里香 中国科学院西双版纳植物园 ྉϟɯ
ࣩ᤹ʗʗᐹᡥᐹ ᓣଝᅳᡙᔠዞᐹ ᣮᔽ༁ၤࣼᑕႿ੫ᤦᑕႿႿᑕ ఋʢᆍᡱᔽዹᑕ᤟ ାᆍᡷᑕႿᔽዹᑕ᤟ ᥈ᑕʢʛᔀႿᖔ
۪ऊ኏ 扩增产物ᖔ送昆明硕擎生物有限公司进行双 ऊၤᔽႿᔀ༁ᔀ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ ᆍ஦ ୩ዹᔽᔀႿዹᔀ༁ ྉϟɯ
向测序以保证测序的准确性ᖔ测序使用与扩增相
同的 引 物ᖔ 测序序列已上传到 શऊା᧧ᖔ 接受号为 জজ 以芸香科九里香做为外类群ᖔ采用最大似然
ᥘશጢऐጢጢϟ԰᥋ᥘશጢऐጢᤃጢጢ 和 ᥘશᤃሕऐँ࿗԰᥋ᥘશᤃሕँԡሕᎮᤥ 法ྉቝᑕ଴ᔽቝࣼቝ ᤟ᔽҴᔀ᤟ᔽၤᆍᆍʛᖔᥘᓂɯ 和贝叶斯法ྉ ାᑕᢃᔀ༁ᔽᑕႿ
ϓॹᇺ 数据分析 ᔽႿ஦ᔀʢᔀႿዹᔀᖔା᧧ɯ构建系统发育树以进行枳属和富民
᧕શዶ 分 子 片段经过测序后ᖔ 利用 ୩ጶ͐ᥘዶશ 枳的分类地位研究ᤥᥘᓂ 分析所需模型及树的构
ྉ୩औᔽႿʛᔀ᤟᤟ ᪲ ۪᤟ᑕ༁ᡷᔀʢᔀʢᖔ ϟँँᎮɯ 软件进行序列的编辑 建均在软件 ᥘጶ᥈ዶ ׹ᔀʢ঎ ጢ ྉ ఋᑕቝʢᑕ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟϟɯ 中

和拼 接ᤥ 然 后 将 拼 接好的序列用 ାᔽᆍጶʛᔽᡷ ׹ᔀʢ঎ 执行ᖔ 树 的 构建选用 શᔀᑕʢᔀ༁ᡷ᥋શᔀᔽ੫ၤᤦᆍʢ᥋᧧ႿᡷᔀʢዹၤᑕႿ੫ᔀ
Ꭾ঎ԡ঎࿗঎ϟ ྉ̀ᑕ᤟᤟ᖔ ϟँँँɯ 进行序列的比对和手工校对ᤥ ྉશશ᧧ɯ 搜索方法ᖔ 支持率的估计采用ϟ ԡԡԡ次重复