Page 97 - 《广西植物》2021年第3期

࿗ ԰ ԡ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷

表 ϓই 本实验所用材料信息
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ᧧Ⴟ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ቝᑕᡷᔀʢᔽᑕ᤟༁ ᔽႿ ᡷၤᔽ༁ ༁ᡷࣼʛᢃ

地理位置 纬度 ᣰ 经度 海拔 样本数
种名 群体 样地
᥈ᔀᆍ੫ʢᑕᡱၤᔽዹ ᓂᑕᡷᔽᡷࣼʛᔀ ᣰ ዶ᤟ᡷᔽᡷࣼʛᔀ ୩ᑕቝᡱ᤟ᔀ
୩ᡱᔀዹᔽᔀ༁ Ⴟᑕቝᔀ ۪ᆍᡱࣼ᤟ᑕᡷᔽᆍႿ ୩ᑕቝᡱ᤟ᔀ ᡱ᤟ᆍᡷ
᤟ᆍዹᑕᡷᔽᆍႿ ᓂᆍႿ੫ᔽᡷࣼʛᔀ ྉቝɯ Ⴟࣼቝᤦᔀʢ
垂穗披碱草 Ⴟऔϟँ 青海湖东 青海省海南州 ሕᤃ๼ሕሕࣕ શ ᣰ ሕ ϟጢጢ ϟँ
ጛᤀᡥቂࣩ໧ ႥࣩᡙᐹႥ໧ ጶᑕ༁ᡷ ᆍ஦ ͐ᔽႿ੫ၤᑕᔽ ᓂᑕҴᔀ ̀ᑕᔽႿᑕႿ ୩ᡷᑕᡷᔀᖔ ͐ᔽႿ੫ၤᑕᔽ ۪ʢᆍ׹ᔽႿዹᔀ ϟԡԡ๼࿗ሕࣕ ጶ
ጶႿ 青海湖西 青海省海北州 ሕᤃ๼ጢऐࣕ શ ᣰ ሕ ԡᎮँ ϟ࿗
ۼᔀ༁ᡷ ᆍ஦ ͐ᔽႿ੫ၤᑕᔽ ᓂᑕҴᔀ ̀ᑕᔽᤦᔀᔽ ୩ᡷᑕᡷᔀᖔ ͐ᔽႿ੫ၤᑕᔽ ۪ʢᆍ׹ᔽႿዹᔀ ϟԡԡ๼ጢሕࣕ ጶ
达乌力披碱草 ጶʛᑕ 青海湖东 青海省海南州 ሕᤃ๼ሕሕࣕ શ ᣰ ሕ ϟጢጢ ϟϟ
ጛॹ ʐᐹ၊ࣩʗᔠዞࣩ໧ ጶᑕ༁ᡷ ᆍ஦ ͐ᔽႿ੫ၤᑕᔽ ᓂᑕҴᔀ ̀ᑕᔽႿᑕႿ ୩ᡷᑕᡷᔀᖔ ͐ᔽႿ੫ၤᑕᔽ ۪ʢᆍ׹ᔽႿዹᔀ ϟԡԡ๼࿗ሕࣕ ጶ
ጶʛ 青海湖西 青海省海北州 ሕᤃ๼ጢऐࣕ શ ᣰ ሕ ԡᎮँ ϟ࿗
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ϓॹԣ 方法 ྉ԰ԡԡँɯ提出的分子标记基因型数据转换为二元矩
ϟ঎԰঎ϟ 基因组总 ᧕શዶ 提取জ 取垂穗披碱草和达乌 阵方 法ᖔ 将得到的 ᥥԡܦ ϟ ɼ 二元矩阵数据导入
力披碱草各 ԰ԡ 粒种子ᖔ单粒置于培养皿中ᖔ当种 શఋ୩ɟ୩᥋ᡱዹ 软件ᤥ 在 શఋ୩ɟ୩ 软件中基于 ᧕ᔽዹᔀ 遗传

子萌发长出幼根时ᖔ移栽到瓦盆中ᖔ当其长出 ሕጲ࿗ 相似系数ྉ᥈୩ 值ɯᖔ采用非加权平均法ྉВ۪᥈ᥘዶɯ
片叶子时ᖔ采用改良 ऊఋዶା 法ྉ ዶ᤟᤟ᔀႿ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡԡᤃɯ 作聚类分析ଫ利用 ۪ᨃ۪᥈ጶશጶϟ঎ሕ԰ 软件计算等位基
提取基因组总 ᧕શዶᤥ 提取的 ᧕શዶ 浓度和质量用 因ྉટ ɯܦ有效等位基因ྉટ ɯܦ期望杂合度ྉ ̵ ɯܦ观
ᑕ ᔀ ᔀ
紫 外 分 光光度计 ྉ શᑕႿᆍʛʢᆍᡱ԰ԡԡԡዹᖔ ఋၤᔀʢቝᆍ 察杂合度ྉ ̵ ɯܦ香农多样性指数ྉ ᧇɯܦ多态性位点
ᆍ
୩ዹᔽᔀႿᡷᔽ஦ᔽዹᖔۼᔽ᤟ቝᔽႿ੫ᡷᆍႿᖔ᧕ጶᖔВ୩ዶɯ 和 ϟᠮ的琼脂糖凝 百分率ྉ ۗ ɯ 和多态性信息含量指数ྉ۪᧧ऊɯଫ利用
ᡱ
胶电泳检测ᤥ ዶ኏ᓂ᧧͐В᧧શ ሕ঎ ጢ 对 群 体 进行分子方差分析
ϟ঎԰঎԰ 多态性引物筛选জ 选用 ጢሕ 对老芒麦 ୩୩኏ 引 ྉዶᥘᨃ჆ዶɯᖔ计算居群间和居群内分化系数ᖔ并作

物ྉᓂᔀᔽ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡϟ࿗ɯ和 ሕᎮ 对 ጶ୩ఋ᥋୩୩኏ 引物ྉԻၤᆍࣼ ᔀᡷ 比较ᤥ
ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡϟᤃɯᖔ以及对应的优化反应条件和体系ᖔ随机

挑选 ጢ 份垂穗披碱草和 ጢ 份达乌力披碱草 ᧕શዶ 进 ԰জ 结果与分析
行 ۪ऊ኏ 扩增ᤥ 待扩增完成后ᖔ应用 ऐᠮ的聚丙烯酰
胺凝胶电泳检测ᖔ筛选出扩增条带清晰ܦ杂带少ܦ ԣॹϓ ୒୒ቴ 多态性引物筛选
扩增结果稳定的引物ᖔ待用ᤥ 本研究选出 ऐ 对扩增条带清晰ܦ多态性良好的
ϟ঎԰঎ሕ ୩୩኏ 扩增和 ۪ዶ᥈ጶ 电泳জ 扩增体系和反应程 引物ྉ表 ԰ɯᖔ对同域分布的垂穗披碱草和达乌力

序如下᧥反应总体积 ԰ጢ ဂᓂᖔ其中含 ఋᑕҴᑕʢᑕ 公司的 ϟԡ 披碱草进行 ୩୩኏ 电泳分析ᤥ
᥋ϟ ԣॹԣ ୒୒ቴ 多样性分析
ġ۪ऊ኏ ାࣼ஦஦ᔀʢ ԰঎ጢ ဂᓂᖔ԰঎ጢ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ 的 ʛશఋ۪ ԰঎ጢ ဂᓂᖔ
᥋ϟ 在 ँԡ 对 ୩୩኏ 引物中ᖔ筛选出 ऐ 对扩增条带清
上下游引物各 ϟဂᓂᖔ᧕શዶ 模板ྉጢԡ Ⴟ੫ኼဂᓂ ɯϟ ဂᓂᖔ
ʗ௴ᐹफ 酶 ԡ঎ሕ ဂᓂᖔʛʛ ̀ ᨃ 补足 ԰ጢ ဂᓂᤥ ۪ऊ኏ 反应程 晰且稳定的多态性引物ᖔऐ 对 ୩୩኏ 引物在垂穗披碱
԰
序᧥ँ࿗ ቩ预变性 ጢቝᔽႿଫँ࿗ ቩ 变性 ሕԡ ༁ᖔጢԡ ቩ ᣰ ᤃԡ ቩ 草中扩增片段介于 ϟԡԡ ጲ ጢԡԡ ᤦᡱ 之间ྉ 图 ϟɯᤥ 在
退火 ሕԡ ༁ᖔᎮ԰ ቩ 延伸 ሕԡ ༁ᖔ共 ሕጢ 个循环ଫᎮ԰ ቩ 延伸 ሕሕ 份垂穗披碱中ྉ 居群 ϟ 和居群 ԰ɯ 共检测到 ԰࿗ሕ
ϟԡ ቝᔽႿᤥ ۪ऊ኏ 产物采用 ऐᠮ的聚丙烯酰胺凝胶电泳ᖔ 条带ᖔ每个引物扩增产生的多态性条带在 ԰԰ ጲ ࿗ϟ
ሕԡԡ ჆ 电压下电泳 ጢԡ ቝᔽႿᖔ嗅化乙锭ྉጶାɯ 染色ᖔ并 条ᖔ平均每个引物产生 ሕԡ঎ሕऐ 条带ᖔ其中多态性条
用 ା᧧ᨃ᥋኏ዶ᧕ 自动凝胶成像系统照相保存ᤥ 带为 ԰Ꭾ঎԰ጢ 条ଫ每个引物多态性百分率在ጢᎮ঎ϟ࿗ᠮ ጲ
ϟ঎԰঎࿗ 数据分析জ ୩୩኏ 为共显性分 子 标 记ᖔ依据 ϟԡԡᠮ之间ᖔ平均多态性条带百分率为 ऐँ঎Ꭾϟᠮᖔ多
۪ዶ᥈ጶ 电 泳 图 读 取 基因型数据ᖔ 参照夏寒冰等 态性信息含量ྉ۪᧧ऊɯ在 ԡ঎ጢऐሕ ጲ ԡ঎ँ԰࿗ 之间ᖔ平均值