Page 87 - 《广西植物》2021年第4期
P. 87
࿗ 期 李 云 琴 等 ᧥ 滇牡丹环阿屯醇合成酶基因的克隆及表达分析 ጢ ᤃ ँ
ϓॹጇ ۗʐࣷዛ 基因在不同器官上的表达分析
用植物总 શዶ 提取试剂盒提取滇牡丹各器
官ܦ各发育时期的花和不同颜色花瓣的总 શዶᖔ用
琼脂糖凝胶电泳和 શᑕႿᆍ᧕ʢᆍᡱఋᥘ ԡԡԡ 分别测定
શዶ 的质量和浓度后ᖔ进行反转录合成 ዹ᧕શዶ 的
第 一条链ᤥ 以特异引物 ఋ۪ʛऊዶ୩ è ྉ ጢࣕ᥋
ఋఋ᥈ዶ᥈ዶ᥈ዶ᥈ዶዶ᥈᥈ऊఋऊఋఋऊ᥈᥋ሕࣕɯ和 ఋ۪ʛऊዶ୩ ྉጢࣕ᥋
ఋऊ᥈ዶఋ᥈ዶዶऊዶఋዶ᥈ऊዶ᥈ऊఋऊఋ᥋ሕࣕɯ 检测滇牡丹
ۗʐࣷዛ 基因在根ܦ茎ܦ叶ܦ花瓣等不同器官中的表
达情 况ᤥ 经过琼脂凝胶电泳的检测后ᖔ 利用
᥈ጶશጶ᥋୩શዶ۪୩ 图像分析软件分析 ۗʐࣷዛ 基因积分
吸光度ᖔ进行相对定量表达分析ᤥ
জ 结果与分析
图 ϟজ 滇牡丹 ۗʐࣷዛ 基因克隆
ԣॹϓ ቴટዛ 提取和 ۗʐࣷዛ 基因克隆 èᔽ੫ ϟজ ᥈ᔀႿᔀ ዹᆍႿᔽႿ੫ ᆍ ۗʐࣷዛ ʢᆍቝ ۗᐹᓣᅳႥᔠᐹ ʐᓣᤀᐹצᐹᡥᔠ
参照植物总 શዶ 提取试剂盒说明书提取滇牡
丹花瓣及其他器官的总 શዶᖔ然后反转录成 ዹ᧕શዶ 他植物种的亲缘关系ᖔ将推导出来的 ۪ʛऊዶ୩ 蛋白序
第 一条链ᖔ 保存备用ᤥ 以含有起始密码子的 列在美国国家生物技术信息中心ྉશऊା᧧ɯ进行比对ᖔ
۪ʛऊዶ୩ϟè 和终止密码子的 ۪ʛऊዶ୩ϟ 作为引物ᖔ滇 得到其他植物 ऊዶ୩ 蛋白序列ᖔ用 ᥘጶ᥈ዶ ᤃԡ 中自带
牡丹花瓣 ዹ᧕શዶ 为模板ᖔ用 ጶᑕ༁ᢃ۪ࣼ᧕શዶ 聚合酶扩 的 ऊࣼ༁ᡷᔀʢ ۼ 进行蛋白序列多重比对后ᖔ用 શᔀᔽ੫ၤᤦᆍʢ᥋
增获得 ዹ᧕શዶ 片段ᖔ电泳检测后ᖔ将获得目的片段 ᢼᆍᔽႿᔽႿ੫ 算法 ྉ 自检举 ϟԡԡԡ 次ɯᖔ 绘制出滇牡丹
连接到克隆载体上ᖔऐ ቩ 条件下培养过夜ᖔ并转化 ۪ʛऊዶ୩ 与其他植物的 ऊዶ୩ 蛋白的进化树ྉ 图 ሕɯᤥ
进感受态细胞 ᧕̀ጢም 中ᖔ菌落 ۪ऊ 检测后送华大 结果显示ᖔ滇牡丹 ۪ʛऊዶ୩ 蛋白与蔷薇科植物苹果
基因测序公司测序ᤥ 最终获得全长 Ꭾ࿗ ᤦᡱ 的滇 ྉ᤹ᐹᤀࣩ ʐᅳቂᓣᡙᔠዞᐹ ᣮ۪ ԡԡऐሕँϟ࿗ሕԡ ϟ ɯܦ 白梨 ྉ ۗᡥʗࣩ
牡丹 ࣷዛ 基因编码 区 全 长 ዹ᧕શዶᖔ 并命名为 ᤇʗᓣᡙዞ၊Ⴅᓣᔠʐᓣʗᔠ ᣮ۪ ԡԡँሕᎮԡԡሕ࿗ϟɯܦ月季ྉቴᅳᐹ ዞ၊ᔠႥᓣႥᔠ
ۗʐࣷዛᖔ共编码 ᎮጢᎮ 个蛋白氨基酸ྉ图 ϟɯᤥ ᣮ۪ ԡ࿗ϟँሕሕϟԡ ϟ ɯܦ 日本裸樱 ྉ ۗʗࣩႥࣩ ᡥᓣʐᅳᓣႥᔠ
ԣॹԣ 滇牡丹 ۗʐࣷዛ 基因蛋白序列分析 ᑕʢ Ⴅࣩʐᔠஏᤀᅳʗᐹ ۪͐͐ϟϟԡԡँ ϟɯܦ 桃 ྉ ۗʗࣩႥࣩ ᡓᓣʗᔠዞᐹ ᣮ۪
用在线程序 ᨃè èᔽႿʛᔀʢ 预测 ۗʐࣷዛ 基因的开 ԡԡᎮጢ࿗ԡϟ ɯ的 ऊዶ୩ 蛋白聚为一类ྉ图 ሕɯᤥ
放阅读框ᖔ۪ʢᆍ۪ᑕʢᑕቝ 预测 ۗʐࣷዛ 基因的理化性质ᤥ ԣॹᇺ 滇牡丹 ۗʐࣷዛ 基因的转录模式分析
结果显示᧥该蛋白由 ᎮጢᎮ 个氨基酸组成ᖔ其分子量为 采集滇牡丹的根ܦ茎ܦ叶ܦ种子ܦ各时期花瓣等
ऐᤃ ϟϟᎮ ᧕ᑕᖔ等电点为 ᤃϟᤥ 用推断得到的 ᎮጢᎮ 个 器官ᖔ用植物总 શዶ 提取试剂盒说明书提取滇牡
氨基酸序列与已知的其他植物 ऊዶ୩ 蛋白序列进行 丹各时期花瓣以及各器官的总 શዶ 并反转录成
相似性对比发现ᖔ 滇牡丹 ۪ʛऊዶ୩ 蛋白序列与桃 ዹ᧕શዶᤥ 用特异引物 ۪ʛऊዶ୩ϟè 和 ۪ʛऊዶ୩ϟ 检测不
ྉۗʗࣩႥࣩ ᡓᓣʗᔠዞᐹɯऊዶ୩ 蛋白序列相似性为 ऐᤃᤃᤃᠮଫ与 同时期的花瓣ܦ花蕊及根ܦ茎ܦ叶ܦ种子中 ۗʐࣷዛ 基
日本裸樱ྉۗʗࣩႥࣩ ᡥᓣʐᅳᓣႥᔠ ᑕʢ Ⴅࣩʐᔠஏᤀᅳʗᐹɯऊዶ୩ 蛋白 因表达的具体情况ྉ图 ࿗ɯᤥ 结果显示ᖔۗʐࣷዛ 基因
序列相似性为 ऐᤃᤃᤃᠮଫ与葡萄ྉႬᔠᡙᔠ צᔠႥᔠஏᓣʗᐹɯऊዶ୩ 蛋 在滇牡丹根ܦ茎ܦ叶ܦ种子ܦ花蕊及各时期花瓣中都
白序列相似性为 ऐᤃ࿗ँᠮᤥ 对滇牡丹 ۪ʛऊዶ୩ 蛋白序 有表达ᖔ但是在各时期花瓣ܦ花蕊中表达量较高ᖔ
列分析发现ᖔۗʐࣷዛ 编码的蛋白具有 ϟ 个氧化鲨烯 其中以花谢时期的花瓣中表达量最高ᤥ
环化酶超家族典型的 ᧕ऊఋዶጶ 结构域ྉ۪ᆍʢᑕᔽᔽᑕ ᔀᡷ ᑕϟᖔ
ϟँँ࿗ɯᖔ ϟ 个三萜合成酶的标志性序列 ሕজ 讨论与结论
᧕᥈୩ۼɟ᥈୩ۼ᥈ऊèఋɟ᥈ྉ邢朝斌等ᖔԡϟɯྉ图 ɯᤥ
为研究滇牡丹在分子水平的进化地位和与其 ऊዶ୩ 是引导类异戊二烯代谢途径流向甾醇类
