Page 115 - 《广西植物》2021年第6期

ᤃ 期 张 成 阁 等 ᧥ 北美鹅掌楸 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因克隆与组织表达分析 ँ ᤃ ሕ
组织的 ኏શዶᤥ 提取过程需在超净工作台进行来确 的 ኏શዶᖔ条带清晰无明显降解现象ᖔ԰ऐ୩ ኏શዶ 条带
保 ኏શዶ 不会受到污染ᤥ 提取完成后ᖔ使用超微量分 亮度是 ϟऐ୩ ኏શዶ 条带亮度的 ԰ 倍ᖔ符合后续实验
光光度计ྉఋၤᔀʢႿቝᆍ શᑕႿᑕʛʢᆍᡱ԰ԡԡԡɯ检测所提取 ኏શዶ 的要求ྉ 图 ϟɯᤥ 将提取的 ኏શዶ 分别稀释为 ጢԡԡ
的浓度ᖔ其中 ᨃ᧕԰ᤃԡ ᣰ ᨃ᧕԰ሕԡ 与 ᨃ᧕԰ᤃԡ ᣰ ᨃ᧕԰ऐԡ 的值 Ⴟ੫ኼဂᓂ ᖔ参考反转录试剂盒说明书合成 ዹ᧕શዶ 第
᥋ϟ
均在 ԰঎ԡ 左右ᤥ 使用琼脂糖凝胶电泳检测所提取 一链ᤥ

ϓ঎ 根ଫ ԣ঎ 茎ଫ ᇺ঎ 叶ଫ ྽঎ 花瓣ଫ ጇ঎ 花芽ଫ ᣤ঎ 雄蕊ଫ ᎒঎ 雌蕊ଫ ࣽ঎ 萼片ᤥ
ϓ঎኏ᆍᆍᡷଫ ԣ঎୩ᡷᔀቝଫ ᇺ঎ᓂᔀᑕ஦ଫ ྽঎ ۪ᔀᡷᑕ᤟ଫ ጇ঎è᤟ᆍऔᔀʢ ᤦࣼʛଫ ᣤ঎୩ᡷᑕቝᔀႿଫ ᎒঎ ۪ᔽ༁ᡷᔽ᤟ଫ ࣽ঎୩ᔀᡱᑕ᤟঎
图 ϟজ 不同部位总 ኏શዶ 凝胶电泳检测
èᔽ੫঎ ϟজ ᧕ᔀᡷᔀዹᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ᡷᆍᡷᑕ᤟ ኏શዶ ੫ᔀ᤟ ᔀ᤟ᔀዹᡷʢᆍᡱၤᆍʢᔀ༁ᔽ༁ ᔽႿ ʛᔽ஦஦ᔀʢᔀႿᡷ ᡱᑕʢᡷ༁

ϓॹᇺ ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϓ 基因全长的获取 表 ϓই 基因克隆引物序列
基于已有的北美鹅掌楸转录组数据ᖔ检索得 ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ۪ʢᔽቝᔀʢ ༁ᔀीࣼᔀႿዹᔀ ஦ᆍʢ ੫ᔀႿᔀ ዹ᤟ᆍႿᔽႿ੫
到一条 Þۗۗ୒ 基因的 ጶ୩ఋ 序列ᤥ 使用 ᨃ᤟ᔽ੫ᆍᎮ 软件 退火温度
引物名称 引物序列 ዶႿႿᔀᑕ᤟ᔽႿ੫
设计中间片段特异性 ۪ऊ኏ 引物ྉ 表 ϟɯᖔ以 ዹ᧕શዶ
۪ʢᔽቝᔀʢ Ⴟᑕቝᔀ ۪ʢᔽቝᔀʢ ༁ᔀीࣼᔀႿዹᔀ ᡷᔀቝᡱᔀʢᑕᡷࣼʢᔀ
第一 链为模板进行 ۪ऊ኏ 扩增ᤥ 对扩增产 物 用 ྉቩ ɯ
ϟ঎ጢᠮ的琼脂糖凝胶电泳进行检测后切胶回收ᤥ 将 ዹ᧕શዶ ஦ʢᑕ੫ቝᔀႿᡷ༁ è ऊዶዶ᥈ऊዶఋዶఋఋఋఋऊఋऊ᥈ఋऊऊఋऊ ጢϟ঎Ꭾ
切胶 得到的中间片段基因 序 列 连 接 到 ᡱጶዶ୩ɟ᥋ ዹ᧕શዶ ஦ʢᑕ੫ቝᔀႿᡷ༁ ኏ ఋऊఋऊఋऊऊఋዶऊఋఋऊఋ᥈ऊऊఋऊఋఋ ጢ࿗
ା᤟ࣼႿᡷ 载体后转化到大肠杆菌感受态细胞ᖔ挑取阳 ሕࣕ኏ዶऊጶ ᆍࣼᡷᔀʢ ዶఋऊఋऊ᥈ዶऊఋ᥈ऊఋఋఋ᥈᥈ఋ᥈ዶఋऊऊఋ ጢऐ঎԰
性克隆送去公司测序ᤥ 基于已得到的中间片段使 ሕࣕ኏ዶऊጶ ᔽႿႿᔀʢ ᥈ዶఋ᥈ऊዶ᥈ऊऊऊዶఋ᥈ఋዶ᥈ऊ᥈ዶዶ᥈ ᤃሕ঎ऐ
᥈ఋ᥈ዶዶ᥈
用 ᨃ᤟ᔽ੫ᆍᎮ 软件设计 ሕࣕ኏ዶऊጶ 和 ጢࣕ኏ዶऊጶ 引物ᖔ使用 ጢࣕ኏ዶऊጶ ᆍࣼᡷᔀʢ ᥈ऊዶఋఋ᥈ఋ᥈ఋዶऊఋఋ᥈᥈ዶऊዶ᥈ዶఋऊఋ ᤃ԰঎ሕ
ఋఋఋఋऊఋऊऊఋఋऊዶ
巢式设计按照上述方法扩增 ሕࣕ኏ዶऊጶ 和 ጢࣕ኏ዶऊጶ
ጢࣕ኏ዶऊጶ ᔽႿႿᔀʢ ᥈ఋ᥈ఋ᥈ఋ᥈ऊ᥈ዶఋऊऊዶఋऊऊዶఋዶዶ ጢጢ঎ሕ
片段ᤥ 将扩增得到的三个片段进行拼接得到基因
ᨃ኏èè ఋዶऊዶऊዶऊዶऊዶऊऊऊఋऊఋ᥈ऊఋఋऊ ጢᤃ঎ऐ
全长ᤥ
ᨃ኏è኏ ऊఋዶఋఋఋऊఋ᥈᥈ఋ᥈ఋ᥈ዶऊఋऊఋऊఋ ጢϟ঎ሕ
ϓॹ྽ ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϓ 基因的生物信息学分析
ዶዹᡷᔽႿँᎮ è ఋఋऊऊऊ᥈ఋఋऊዶ᥈ऊዶ᥈ఋ᥈᥈ఋऊ ᥈ ᤃԡ
通过 શऊା᧧ 在线预测 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因的开放阅 ዶዹᡷᔽႿँᎮ ኏ ఋ᥈᥈ఋऊ᥈ऊዶऊዶዶऊఋ᥈᥈ఋዶఋऊ᥈ ᤃԡ
读框 ྉᨃ኏èɯଫ 在 શऊା᧧ ዹᆍႿ༁ᔀʢ׹ᔀʛ ʛᆍቝᑕᔽႿ 中预 测 ीʢᡷ᥋ᡱዹʢ è ఋऊఋዶऊ᥈ऊఋऊ᥈ऊऊఋ᥈ዶዶዶఋऊऊ᥈ ጢँ঎࿗

ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白的保守结构域ଫ 利用 ጶ଴ᡱᑕ༁ᢃ ीʢᡷ᥋ᡱዹʢ ኏ ᥈ዶఋዶऊዶऊऊዶऊऊऊዶዶ᥈ऊ᥈ዶ᥈ऊዶ ጢँ঎ጢ
۪ʢᆍᡷ۪ᑕʢᑕቝ 对 ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白质的理化性质进行预
测分析ଫ通过 ༁ᔽ੫Ⴟᑕ᤟۪ ࿗঎ϟ ୩ᔀ׹ᔀʢ 进行 ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白
高同源性序列进行比对ᖔ使用 ᥘጶ᥈ዶᎮ঎ԡ 软件构建
质信号肽分析ྉ 马际凯等ᖔ԰ԡϟँɯଫ使用 ୩ᨃ۪ᥘዶ 对
ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白的二级结构进行预测分析ଫ 利用 基因编码蛋白的系统进化树ᤥ
ϓॹጇ ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϓ 基因组织表达分析
۪ၤᢃʢᔀ԰ 预测 ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白三级结构ଫ利用 ఋᑕʢ੫ᔀᡷ۪
᥋ϟ
ϟ঎ ϟ ୩ᔀʢ׹ᔀʢ 进行蛋白质亚细胞定位预测ଫ 将 将提取的 ኏શዶ 稀释为 ጢԡԡ Ⴟ੫ኼဂᓂ ᖔ后反转
ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因编码氨基酸序列与 શऊା᧧ 数据库中 录成 ዹ᧕શዶᤥ 根据已获得的 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因序列设