Page 116 - 《广西植物》2021年第6期

ँ ᤃ ࿗ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
计 ी۪ऊ኏ 引物ᖔ内参基因采用 ᒦዞዛዞᡙᔠႥँᎮྉ ఋࣼ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ጢࣕ኏ዶऊጶ和 ሕࣕ኏ዶऊጶ 引物ᖔ扩增出 ጢࣕ኏ዶऊጶ 和 ሕࣕ኏ዶऊጶ
԰ԡϟँɯᖔ每个样品和内参基因设置 ࿗ 个重复ᖔ进行 片段的长度分别为 ሕጢ࿗ 和 ሕ԰ᤃ ᤦᡱྉ图 ԰ɯᤥ 将扩增出
实时荧光定量 ۪ऊ኏ 反应来检测 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因在 的 ጢࣕ኏ዶऊጶܦሕࣕ኏ዶऊጶ 和中间片段拼接起来得到基因
各个组织中的表达量ᤥ 反应程序和体系参考试剂 全长为 ϟ ࿗ᤃԡ ᤦᡱᤥ 将基因全长放到 શऊା᧧ 网站的
盒说明书ᤥ ᨃ኏è ஦ᔽႿʛᔀʢ 在线预测到 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因的 ᨃ኏è 全长
为ϟ ԡጢᤃ ᤦᡱᖔጢࣕ端非编码区长 Ꭾ԰ ᤦᡱᖔሕࣕ端非编码区长
԰জ 结果与分析 ሕሕ԰ ᤦᡱᤥ 从预测到的 ᨃ኏è 两侧设计引物去验证
ᨃ኏èᖔ得到的序列长度大小与原始拼接序列一致且
ԣॹϓ 北美鹅掌楸 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϓ 基因全长的获取及命名 无变异位点ᤥ 将克隆获得的 Þۗۗ୒ 基因编码蛋白通
从实验室已有的北美鹅掌楸转录组数据中检 过 શऊା᧧ ାᓂዶ୩ఋ ۪ʢᆍᡷᔀᔽႿ 与数据库进行比对ᖔ根据比
索到一条 ጶ୩ఋ 序列ᖔ基于此序列设计引物扩增出中 对结果ᖔ将获得的目的基因命名为 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟྉ登录
间片段长为 Ꭾऐԡ ᤦᡱᖔ在此中间片段的基础上设计 号᧥ᥘશऐሕ࿗ϟϟऐɯᤥ

ዛ঎ 中间片段ଫ ଧ঎ሕࣕ኏ᑕዹᔀଫ ࣷ঎ ጢࣕ኏ᑕዹᔀଫ ᦵ঎ 全长 ᨃ኏èᤥ
ዛ঎ ᧧Ⴟᡷᔀʢቝᔀʛᔽᑕᡷᔀ ஦ʢᑕ੫ቝᔀႿᡷଫ ଧ঎ሕࣕ኏ᑕዹᔀଫ ࣷ঎ጢࣕ኏ᑕዹᔀଫ ᦵ঎ èࣼ᤟᤟ ᤟ᔀႿ੫ᡷၤ ᆍ஦ ᨃ኏è঎
图 ԰জ ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因凝胶电泳检测
èᔽ੫঎ ԰জ ᧕ᔀᡷᔀዹᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ੫ᔀ᤟ ᔀ᤟ᔀዹᡷʢᆍᡱၤᆍʢᔀ༁ᔽ༁ ᔽႿ ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ੫ᔀႿᔀ

ԣॹԣ 北美鹅掌楸 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϓ 基因编码蛋白分析 定系数为 ࿗ሕ঎ጢԡᖔ其 ᥈ʢᑕ׹ᔽᡷᢃ 值为ͱԡ঎ሕϟ࿗ᖔ脂肪族氨
԰঎԰঎ϟ ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因编码蛋白的理化性质预测分 基酸指数为 ँϟ঎ᤃ԰ᖔ因此 ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白为不稳定
析জ 使用 શऊା᧧ 对 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因编码蛋白的氨基 亲 水 性蛋白ᤥ 使用 ᡱʢᔀʛᔽዹᡷ ᡱʢᆍᡷᔀᔽႿ 分析预测
酸序列 进 行 保 守结构域预测ᤥ 预测结果可知 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因编码各种氨基酸的百分比ᖔ结果表
ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因所编码蛋白隶属于类异戊二烯合 明亮氨酸ܦ天冬氨酸ܦ丝氨酸ܦ谷氨酸ܦ缬氨酸是
酶ᖔ共有 Ꭾ 个保守结构域ᖔ包括底物结合位点ܦ底 ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白的几类重要氨基酸ྉ 图 ࿗ɯᤥ 通过
物᥋ᥘ੫ 结合位点ܦ活性位点盖残基ܦ链长度决定 ༁ᔽ੫Ⴟᑕ᤟۪ ࿗঎ϟ ୩ᔀ׹ᔀʢ 程序对 ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因做蛋白质
԰ շ
区ܦ催化位点ܦ富含天冬氨酸区 ϟ 和富含天冬氨酸 信号肽分析ᖔ结果表明 ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白不存在信号
区 ԰ྉ 图 ሕɯᤥ 通过使用 ۪ʢᆍᡷᡱᑕʢᑕቝ 对 ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋 肽ᖔ可能是一种非分泌型蛋白ᤥ
白 一级理化性质进行预测分析ᖔ 结果表明 ԰঎԰঎԰ ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因编码蛋白二级ܓ三级结构预测
ᒦᡙࣩÞۗۗ୒ϟ 基因的 ᨃ኏è 编码 ሕጢϟ 个氨基酸ᖔ其理论 分析জ 使用 ୩ᨃ۪ᥘዶ 在线预测 ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白的二
等电点为 ጢ঎ϟँᖔ分子量为 ࿗ԡ ጢऐँ঎࿗ጢ ᧕ᖔ蛋白质分子 级结构ᖔ预测结果表明 ᓂᡷࣼè۪۪୩ϟ 蛋白主 要 存 在

式为ऊ ̀ શ ᨃ ୩ ᖔ消光系数为 ᤃሕ ϟᎮጢᖔ不稳 ም᥋螺旋ྉ̀ၤɯܦ 无规则卷曲ྉऊዹɯܦ Ꮗ᥋螺旋ྉఋᡷɯ和延
ϟऐ԰Ꭾ ԰ऐ࿗ϟ ࿗Ꭾϟ ጢ࿗԰ ϟᤃ