Page 21 - 《广西植物》2021年第9期

ँ 期 陈 桂 平 等 ᧥ 蒲公英耐盐突变体ጸ滨蒲 ϟ 号ᆥ的耐盐性研究 ϟ ࿗ ϟ ँ
ϟ঎԰঎ϟ঎԰ શᑕऊ᤟ 最佳胁迫浓度的筛选জ 结合 ዶቝᔀ᤟ ᪲ 表 ϓই ϓԔ 条引物的条带扩增情况
Իᆍၤᔀᔽʢྉ԰ԡϟᤃɯ 的方法初步选取 શᑕऊ᤟ 浓度为 ϟ԰ԡܦ ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ᧧Ⴟ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ϟԡ ᡱᆍ᤟ᢃቝᆍʢᡱၤᔽዹ ᡱʢᔽቝᔀʢ༁
ϟᎮԡܦ԰԰ԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ᖔ对蒲公英植株进行 Ꭾ԰ ၤ 的胁 多态性 多态性
᥋ϟ
退火温度 条带数 比例
迫ᖔ观察其生长状况ᖔ选取最佳盐浓度ᤥ 引物 序列 ዶႿႿᔀᑕ᤟ 条带数 ۪ᆍ᤟ᢃቝᆍʢ᥋ ۪ᔀʢዹᔀႿᡷᑕ੫ᔀ
୩ᔀीࣼᔀႿዹᔀ
ϟ঎԰঎ϟ঎ሕ 盐胁迫处理জ 用筛选出的最佳盐胁迫浓度 ۪ʢᔽቝᔀʢ ྉጢࣕ܀ሕࣕɯ ᡷᔀቝᡱᔀʢᑕᡷࣼʢᔀ શᆍ঎ ᆍ஦ ᡱၤᔽዹ ᆍ஦
ᤦᑕႿʛ
ྉቩ ɯ ᤦᑕႿʛ༁ ᡱᆍ᤟ᢃቝᆍʢᡱၤᔽዹ
的盐溶液对蒲公英进行 ԡܦ԰ܦϟ԰ܦ԰࿗ܦ࿗ऐܦᎮ԰ ၤ 处理ᖔ શᆍ঎ ྉᠮɯ
按照不同胁迫时间取样ྉ 生理指标测定᧥ԡܦ԰ܦϟ԰ܦ Вϟ ዶ᥈᥈᥈᥈ఋऊఋఋ᥈ ሕᤃ঎ँ ԰ ԡ ԡ঎ԡ
԰࿗ܦ࿗ऐܦᎮ԰ ၤଫ根 ኏શዶ 提取᧥ԡܦϟ԰ܦ԰࿗ ၤɯᤥ 样品迅速 Вሕ ᥈᥈᥈ఋఋఋዶ᥈᥈᥈ ሕᤃ঎ँ ሕ ϟ ሕሕ঎ሕ
放入液氮中以便后续实验ᤥ Вϟϟ ऊ᥈ዶዶ᥈ऊఋዶऊऊ ሕᤃ঎ँ ϟ ϟ ϟԡԡ঎ԡ
ϟ঎԰঎԰ 生理指标测定方法জ 丙二醛ྉᥘ᧕ዶɯ 含量采 Вϟሕ ऊऊዶ᥈ఋ᥈ऊఋऊఋ ሕᤃ঎ँ ࿗ ሕ Ꭾጢ঎ԡ
Вϟँ ఋ᥈᥈᥈ዶዶऊ᥈᥈ఋ ሕᤃ঎ँ ࿗ ϟ ԰ጢ঎ԡ
用硫代巴比妥酸法测定ᖔ叶绿素含量采用无水乙
ዶԡሕ ዶ᥈ఋऊዶ᥈ऊऊዶऊ ሕᤃ঎ँ ϟ ԡ ԡ঎ԡ
醇提取法结合分光光度计测定ᖔ相对电导率采用
ዶԡጢ ዶ᥈᥈᥈᥈ఋऊఋఋ᥈ ሕᤃ঎ँ ϟ ϟ ϟԡԡ঎ԡ
᧕᧕୩᥋ϟϟዶ 型电导仪测定ᖔ脯氨酸含量采用酸性茚
ऊԡऐ ఋ᥈᥈ዶऊऊ᥈᥈ఋ᥈ ࿗ϟ ሕ ϟ ሕሕ঎ሕ
三酮ͱ甲苯法测定ᖔ可溶性蛋白含量ܦ超氧化物歧 ᧕ԡऐ ᥈ఋ᥈ఋ᥈ऊऊऊऊዶ ࿗ϟ ϟ ϟ ϟԡԡ঎ԡ
化酶ྉ୩ᨃ᧕ɯ活性ܦ过氧化氢酶ྉऊዶఋɯ 活性ܦ过氧化 ᧧ԡँ ఋ᥈ዶ᥈ऊऊఋऊዶऊ ሕᤃ঎ँ ԰ ϟ ጢԡ঎ԡ
物酶ྉ۪ᨃ᧕ɯ活性均采用试剂盒测定ྉ 购自南京建 总计 ఋᆍᡷᑕ᤟ ԰԰ ϟԡ ࿗ጢ঎࿗
成生物工程公司ɯᤥ
ϟ঎԰঎ሕ ኏શዶ 提取与 ዹ᧕શዶ 合成জ 蒲公英根总 ኏શዶ
的提取采用 ఋ኏᧧Իᨃᓂ 试剂法ᖔ 用 ᧕શᑕ༁ᔀ ሙ 酶 ԰জ 结果与分析
ྉ኏શᑕ༁ᔀ஦ʢᔀᔀɯ 消化和氯仿抽提ᖔ所提取的 ኏શዶ 经
ԣॹϓ 最佳盐胁迫浓度筛选
琼脂糖凝胶检测可见条带完整ᖔ无降解现象ᤥᨃ᧕
᥋ϟ
将蒲公英幼苗在 ϟ԰ԡܦϟᎮԡܦ԰԰ԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ሕ 个
԰ᤃԡ ᣰ ԰ऐԡ 值均在 ϟ঎ँ ጲ ԰঎ԡ 之间ᖔ表明 ኏શዶ 无污染ᖔ
可用做 ዹ᧕શዶ 反转录模板ᤥ 反转录反应采用反转 浓度梯度 શᑕऊ᤟ 溶液中进行胁迫 Ꭾ԰ ၤᖔ以在水中生长
的幼苗作为对照ᖔ观察蒲公英幼苗变化情况ᤥ 结果
录 试剂盒 Џ èᑕ༁ᡷ͐ࣼᑕႿᡷ ኏ఋ ᣽ᔽᡷ ྉ ۼᔽᡷၤ ੫᧕શᑕ༁ᔀ ɯ
᣽኏ϟԡᤃᖔ购自天根科技生化有限公司ྉ北京ɯ૒ᤥ 如图 ϟ᧥ዶ 所示ᖔ对照中 ሕ 盒蒲公英幼苗长势相近ᖔ
᥋ϟ
生长均较旺盛ᤥ 胁迫 Ꭾ԰ ၤ 之后ᖔϟ԰ԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ શᑕऊ᤟
ϟ঎԰঎࿗ ኏ዶ۪᧕ 法扩增 ዹ᧕શዶ
᥋ϟ
ϟ঎԰঎࿗঎ϟ 引物筛选জ 选取两个质量较好的 ኏શዶᖔ反 溶液对蒲公英幼苗影响不明显ᖔϟᎮԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ શᑕऊ᤟
᥋ϟ
转录成 ዹ᧕શዶᖔ稀释 ጢ 倍后作为模板ᤥ 对 ࿗԰ 条引 溶液对蒲公英幼苗有影响但不致死ᖔ԰԰ԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ
શᑕऊ᤟ 溶液使蒲公英幼苗部分致死ྉ图 ϟ᧥ାɯᤥ 选取
物进行筛选ᖔ࿗԰ 条引物选自文献ྉ 李红等ᖔ԰ԡϟऐɯ
及北京鼎国生物公布的 ጢ԰ԡ 条 ኏ዶ۪᧕ 引物ᖔ扩增 对蒲公英幼苗有影响且不致死浓度为最佳胁迫浓
᥋ϟ
产物在 ԰ᠮ 琼脂糖凝胶中电泳ᖔ溴化乙锭染色ᖔ 凝 度ᖔ将最终胁迫浓度定为 ϟᎮԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ᤥ
胶成像系统成像拍照ᤥ 最终从 ࿗԰ 条随机引物中 ԣॹԣ 蒲公英耐盐突变体ጝ 滨蒲 ϓ 号ᆋ 及其亲本在盐
筛选出 ϟԡ 条重复性高且清晰的引物作为 ۪ऊ኏ 扩 胁迫下生理指标的分析
԰঎԰঎ϟ 脯氨酸ܓ叶绿素ܓᥘ᧕ዶ 含量和相对电导率的
增的最适引物ྉ表 ϟɯᤥ
分析জ 蒲公英耐盐突变体ጸ 滨蒲 ϟ 号ᆥ 和亲本经
ϟ঎԰঎࿗঎԰ ۪ऊ኏ 扩增及电泳检测জ኏ዶ۪᧕ 反应体系 ԰ԡ
᥋ϟ
ϟᎮԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ શᑕऊ᤟ 胁迫 ԡጲ Ꭾ԰ ၤ 各时间点所测得
ဂᓂ᧥ ዹ᧕શዶྉ 反转录产物原液稀释 ጢ 倍ɯ԰ ဂᓂᖔ԰ ଴
的脯氨酸含量结果如图 ԰᧥ዶ 所示ᖔ两种样品的脯
ఋᑕी ۪ऊ኏ ᥘᑕ༁ᡷᔀʢᥘᔽ଴ ϟԡ ဂᓂᖔ ኏ዶ۪᧕ 随机引物 ྉϟԡ
ဂቝᆍ᤟ኼᓂ ɯϟ঎ᤃ ဂᓂᖔ ኏શᑕ༁ᔀ èʢᔀᔀ ʛ̀ ᨃᤃ঎࿗ ဂᓂᤥ 扩 氨酸含量整体均呈上升趋势ᖔ突变体ጸ 滨蒲 ϟ 号ᆥ
᥋ϟ
԰
脯氨酸含量在 ԡၤ 显著高于亲本ᖔ盐胁迫 ԰ၤ 后极
增反应程序᧥ँጢ ቩ 预变性 ԰ቝᔽႿଫ ँጢቩ 变性 ሕԡ ༁ᖔ
显著高于亲本ᖔ随着胁迫时间延长至 ϟ԰ ၤ 时有所
复性 ሕԡ ༁ ྉ温度参考表 ϟɯᖔᎮ԰ ቩ 延伸 ϟቝᔽႿᖔ 共 ሕጢ
个循环ଫ 最后 Ꭾ԰ ቩ 延伸 ᎮቝᔽႿᤥ 扩增产物在 ԰঎ԡᠮ 下降ᖔ之后又开始上升ᖔ胁迫 Ꭾ԰ ၤ 时ጸ滨蒲 ϟ 号ᆥ中
的琼脂糖凝胶上电泳分离ᖔ电压 ϟ԰ԡ ჆ᖔ在凝胶成 脯氨酸含量显著高于亲本ᤥ 两种样品的叶绿素含
量整体上均呈下降趋势ᖔጸ 滨蒲 ϟ 号ᆥ 的叶绿素含
像系统成像ᖔ拍照记录ᤥ