Page 56 - 《广西植物》2022年第4期

ጢ ऐ ԰ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗԰ 卷
松 ᤹ɔଧ 基因进行生物信息学ܦ表达模式等分析ᖔ对 箱进行处理ᤥ 根据预实验结果ᖔ由于在胁迫第 Ꭾ
阐明 ᤹ɔଧ 基因的功能和调控机制具有重要意义ᤥ 天时ᖔ马尾松幼苗存活率低ᖔ已到胁迫耐受末期ᖔ
本研究以前期转录组测序数据为研究区域ᖔ依托 因此ᖔ本实验在开始处理的第 ϟ 天ܦ第 ࿗ 天和第 Ꭾ
生物信息学软件ᖔ采用荧光定量 ۪ऊ኏ 分析方法ᖔ通 天采集同一部位针叶样本ᖔ以正常浇水处理作为
过对 ۗቂ᤹ɔଧ໧ 基因的蛋白质理化性质ܦ保守结构 对照ᖔ对照组每 ԰ʛ 浇 ϟ 次水ᖔ每个处理 ሕԡ 株苗ᖔ
域ܦ系统进化水平ܦ表达模式等进行分析ᖔ拟探讨 采集的所有样品置于液氮中保存备用ᤥ
以下问题᧥ྉϟɯ 马尾松 ኏԰኏ሕ᥋ᥘɟା 蛋白的理化性 ϓॹᇺ ቴટዛ 提取及逆转录
质ܦ保守 结构域等基因特征ଫྉ԰ɯ 马尾松 ኏԰኏ሕ᥋ ኏શዶ 提取按多酚多糖植物 ኏શዶ 提取试剂盒
ᥘɟା 蛋白的系统进化ଫྉ ሕɯ 马尾松 ቴ԰ቴሕ᤬᤹ɔଧ 基 说明进行ྉ 天根公司ᖔ北京ɯᖔ逆转录采用 ᥘ᥋ᥘᓂ჆
因在不同组织中的特异性表达水平ଫྉ ࿗ɯ 马尾松 逆转录酶进行ྉ宝生物公司ᖔ大连ɯᖔ具体步骤按说
ቴ԰ቴሕ᤬᤹ɔଧ 基因在花发育时期和不同非生物胁迫 明书进行ᖔ最终将所有样品浓度调至 ጢԡ Ⴟ੫ኼဂᓂ ᤥ
᥋ϟ
下的表达模式ᤥ 通过本研究以期为进一步深入解 ϓॹ྽ 数据来源
析马尾松 ቴ԰ቴሕ᤬᤹ɔଧ 基因功能及其在花发育和非 马尾松序列来源于前期课题组马尾松三代全
生物胁迫过程中的响应机制提供参考ᖔ同时为马 长转录组ܦ抗虫转录组ྉɟᑕႿ੫ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡϟᤃɯܦ侧枝分
尾松抗性分子育种提供基因资源ᤥ 化转录组ྉऊၤᔀႿ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡ԰ϟɯ 和花发育转录组ྉ 未
发表ɯଫ拟南芥ܦ火炬松ܦ白云杉的 ኏԰኏ሕ᥋ᥘɟା 蛋白
ϟজ 材料与方法 序列来源于 ۪᤟ᑕႿᡷఋèା᧕ 数据库和 શऊା᧧ 数据ᤥ
ϓॹጇ 马尾松 ቴԣቴᇺ᤬᤹ɔଧ 基因生物信息学分析
ϓॹϓ 实验材料 在以上转录组数据中ᖔ筛选 ቴ԰ቴሕ᤬᤹ɔଧ 基因ᖔ
不同组织ྉ根ܦ茎ܦ叶ɯ和非生物胁迫处理材料 从 ۪஦ᑕቝ 数据库下载 ᤹ɔଧ 基因结构域的隐马尔可
来自半年生马尾松全同胞幼苗ᖔ不同发育时期花 夫模 型 ྉ ۪èԡԡ԰࿗ँɯ 后ᖔ 使用 ̀ᥘᥘጶ኏ 软件鉴定
材料来自马尾松种质资源库ྉ 南宁市林科所国家 ᤹ɔଧ 基因ᖔ去除冗余序列和非全长序列后ᖔ利用
马尾松良种基地ᖔ编号为桂 ᥈ऊϟԡጢɯ 的同一无性 શऊା᧧ ାᓂዶ୩ఋ 进行序列比对ᖔ同时以 શऊା᧧ 检索命
系ᤥ 在雌雄球花现蕾期至成熟期阶段ᖔ分 ጢ 次采 名为依据ᖔ最终获得了完整的 ϟᎮ 条 ኏԰኏ሕ᥋ᥘɟା 蛋

集不同发育阶段的雌雄球花材料ྉ 编号为 èϟͱèጢܦ 白序 列ᤥ 利用 ጶ଴۪ዶ୩ᢃ 在线网站 ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ औᔀᤦ঎
ᥘϟͱᥘጢɯᤥ 雌球花样品中ᖔèϟͱèጢ 对应雌花发育初 ᔀ଴ᡱᑕ༁ᢃ঎ᆍʢ੫ ᣰ ɯ分析基因分子质量ܦ等电点ܦ蛋白质不
期ྉ长 ԰ቝቝɯܦ前期ྉ 长 ࿗ቝቝɯܦ中期ྉ 长 ጢቝቝɯܦ 稳定 系数等理化性质ଫ ۼᆍᓂè ۪୩ᨃ኏ఋ ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ
后期ྉ长 Ꭾቝቝɯܦ授粉期ྉ长 Ꭾቝቝ 且已显深红色ɯ ᡱ༁ᆍʢᡷ঎ ၤ੫ዹ঎ ᢼᡱ ᣰ ɯ 进 行亚细胞定位分析ଫ ఋᥘ̀ᥘᥘ
ጢ 个阶段ᤥ 雄花样品中ᖔᥘϟͱᥘጢ 对应雌花发育初 ୩ᔀʢ׹ᔀʢ ׹঎ ԰঎ ԡ ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ औऔऔ঎ ዹᤦ༁঎ ʛᡷࣼ঎ ʛҴ ᣰ ༁ᔀʢ׹ᔽዹᔀ༁ᣰ
期ྉ长 ԰ቝቝɯܦ前期ྉ长 ሕቝቝɯܦ中期ྉ长 ጢቝቝɯܦ后 ఋᥘ̀ᥘᥘ ᣰ ɯ分析蛋白跨膜结构ଫ୩ᨃ۪ᥘዶ 预测蛋白
期ྉ长 Ꭾቝቝɯܦ授粉期ྉ 长 ँቝቝ 且已显深红色ɯጢ 质二级结构ଫશᔀᡷ۪ၤᆍ༁ ሕ঎ϟྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ औऔऔ঎ዹᤦ༁঎ʛᡷࣼ঎ʛҴ ᣰ
个阶段ᤥ 雄花变异材料采集时间对应雌球花发育 ༁ᔀʢ׹ᔽዹᔀ༁ ᣰ શᔀᡷ۪ၤᆍ༁ᣰ ɯ分析磷酸化位点ଫᥘጶ᥈ዶ Ꭾ 软件
的第 ԰ 至第 ጢ 个样时期ྉ编号为 ାఋ԰ͱାఋጢɯᤥ 的 શᔀᔽ੫ၤᤦᆍʢ᥋ȮᆍᔽႿᔽႿ੫ ྉશȮɯ 法构建系统发育进化树ᖔ
ϓॹԣ 实验处理 并利用 ᔽఋᨃᓂྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ ᔽᡷᆍ᤟঎ ᔀቝᤦ᤟঎ ʛᔀ ᣰ ɯ 美化进化树ଫ
以半年生马尾松全同胞幼苗为材料ᖔ幼苗生 ۼᔀᤦᓂᆍ੫ᆍྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ औᔀᤦ᤟ᆍ੫ᆍ঎ ᤦᔀʢҴᔀ᤟ᔀᢃ঎ ᔀʛࣼ ᣰ ᤟ᆍ੫ᆍ঎ ዹ੫ᔽɯ 绘
长于 ऐዹቝ 直径的种植袋ᖔ培养基质为椰糠 ᨒ 黄心 制保 守区域特征图ଫ ᥘጶᥘጶ ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ ቝᔀቝᔀ᥋༁ࣼᔽᡷᔀ঎
土 ᨒ 泥炭土ྉᤃ ᨒ ሕ ᨒ ϟɯᤥ 筛选生长一致的幼苗置 ᆍʢ੫ ᣰ ቝᔀቝᔀ ᣰ ɯ 分析基因保守基序ᖔ 并利用 ఋାᡷᆍᆍ᤟༁
于人工气候箱中培养 ϟጢ ʛ 适应环境后ྉ温度 ԰Ꭾ ቩܦ ྉऊၤᔀႿ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡ԰ԡɯ进行结果可视化ᤥ
᥋ϟ
相对湿度 ᤃԡᠮܦ光周期 ϟ԰ ၤɯᖔ分别以 ሕԡԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ϓॹᣤ 实时荧光定量 ۗࣷቴ
᥋ϟ
શᑕऊ᤟ܦሕԡᠮ ۪ጶ᥈᥋ᤃԡԡԡ 和 ϟԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ۪ᤦྉ શᨃ ɯ 以 上 述处理所得植物样本ᖔ 利用 ۪ʢᔽቝᔀʢ
ሕ ԰
溶液对苗木进行盐胁迫ܦ干旱胁迫ܦ铅胁迫处理 ۪ʢᔀቝᔽᔀʢ ጢ 设计基因荧光定量 ۪ऊ኏ 引物ྉ 表 ϟɯᖔ以
ྉ姜国斌等ᖔ԰ԡԡᎮଫ刘菲等ᖔ԰ԡϟऐଫ闫闪闪ᖔ԰ԡ԰ԡଫ陈 ۗቂІଧᧇ࿗ܦۗቂࣷɔۗܦۗቂ௴Іଧዛ 基因分别作为组织特异
璇等ᖔ԰ԡ԰ϟɯᖔ低温胁迫将苗木移至 ࿗ቩ 人工气候 性ܦ 非生物胁迫ܦ 花发育的内参基因 ྉऊၤᔀႿ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ