Page 120 - 《广西植物》2022年第8期

ऐ 期 罗 群 凤 等 ᧥ 基于 ୩୩኏ 标记的大明松天然群体遗传多样性分析 ϟ ሕ ᤃ ँ
的保护ܦ品种鉴定及遗传改良提供借鉴与依据ᤥ 季风气候ᤥ 无霜期 ԰ँ԰ ጲ ሕϟ԰ ʛᖔ日照时间长ᖔ光热
鉴于此ᖔ本文利用 ୩୩኏ 分子标记对大明松天 充足ᤥ 夏湿冬干ᖔ干冷同期ᖔ湿热同季ᖔ气候垂直
然群体开展遗传多样性研究ᖔ分析其多样性水平 变化明显ྉ冯源恒等ᖔ԰ԡϟँɯᤥ
及遗传分化情况ᖔ将有力加强对稀有树种的保护 梵净山群体ྉèȮɯ 取自贵州梵净山国家级自然
力度ᖔ促进生物多样性保护与生态环境建设ᖔ为科 保 护区棉絮岭 ྉ ϟԡऐ๼ ሕँࣕ ࿗ᤃ×ᗵϟԡऐ๼ ሕँࣕ ጢ԰× ጶܦ
学利用稀有松类资源打下坚实基础ᤥ 因此ᖔ研究 ԰Ꭾ๼ጢ࿗ࣕ࿗ጢ×ᗵ԰Ꭾ๼ጢ࿗ࣕ࿗ᤃ× શɯᖔ属中亚热带湿润山地
我国黔桂地区大明松天然群体遗传多样性具有重 季风气候ᤥ 无霜期 ԰Ꭾԡ ጲ ԰Ꭾऐ ʛᖔ相对湿度平均达
要理论和意义ᤥ ऐԡᠮྉ冯源恒等ᖔ԰ԡϟँɯᤥ
大沙河群体ྉ᧕୩ɯ取自贵州大沙河国家级自然
ϟজ 材料与方法 保 护区甑子岩 ྉ ϟԡᎮ๼ ሕጢࣕ ԡ࿗×ᗵϟԡᎮ๼ ሕጢࣕ ԡँ× ጶܦ
԰ँ๼ԡऐࣕϟሕ×ᗵ԰ँ๼ԡऐࣕ԰԰× શɯᖔ属北亚热带湿润季风
ϓॹϓ 材料 气候ᤥ 大沙河地形北高南低ᖔ最高海拔 ϟ ँሕँ঎ँ ቝᖔ
实验材料包括 ሕ 个天然群体ᖔ分别为广西大明 最低海拔 ጢᤃԡ ቝᖔ平均海拔 ϟ ࿗ԡԡ ቝᖔ相对湿度 ऐऐᠮ
山群体ܦ贵州梵净山群体ܦ 贵州大沙河群体 ྉ 表 ྉ冯源恒等ᖔ԰ԡϟँɯᤥ
ϟɯᤥ 其中ᖔ大明山群体ྉ᧕ᥘɯ取自广西大明山国家 每个群体按照株距 ሕԡ ቝᖔ采集 ሕԡ 株以上样本ᤥ
级自然保护区仙人台ྉϟԡऐ๼԰ጢࣕጢ࿗×ᗵϟԡऐ๼԰ጢࣕጢऐ× ጶܦ 因大明山群体空间较小ᖔ仅采集到 ԰ᤃ 株ᤥ 将采集的
԰ሕ๼ሕԡࣕϟ԰×ᗵ԰ሕ๼ሕԡࣕϟሕ× શɯᖔ属南亚热带湿润山地 针叶装入离心管ᖔ填充硅胶进行干燥处理ᖔ便于保存ᤥ

表 ϓই 大明松群体样本信息
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ۪ᆍᡱࣼ᤟ᑕᡷᔽᆍႿ ༁ᑕቝᡱ᤟ᔀ ᔽႿ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ۗᔠႥࣩ໧ ᡙᐹᔠँᐹႥᓣႥ໧ᔠ໧ ׹ᑕʢ঎ ʐᐹቂᔠႥ੖໧၊ᐹႥᓣႥ໧ᔠ໧

年均气温 年降水量
采样数目 平均胸径 平均树高
群体名称 采样地点 ᥘᔀᑕႿ ᑕႿႿࣼᑕ᤟ ᥘᔀᑕႿ ᑕႿႿࣼᑕ᤟
୩ᑕቝᡱ᤟ᔽႿ੫ ዶ׹ᔀʢᑕ੫ᔀ ᧕ା̀ ዶ׹ᔀʢᑕ੫ᔀ
᥈ʢᆍࣼᡱ Ⴟᑕቝᔀ ୩ᑕቝᡱ᤟ᔽႿ੫ ᤟ᆍዹᑕᡷᔽᆍႿ ᡷᔀቝᡱᔀʢᑕᡷࣼʢᔀ ʢᑕᔽႿ஦ᑕ᤟᤟
Ⴟࣼቝᤦᔀʢ ྉዹቝɯ ၤᔀᔽ੫ၤᡷ ྉቝɯ
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广西大明山
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贵州梵净山
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᥈ࣼᔽझၤᆍࣼ èᑕႿᢼᔽႿ੫ ᥘᆍࣼႿᡷᑕᔽႿ
贵州大沙河
᧕୩ ሕሕ ԰ሕ঎ሕጢ ϟ԰঎ँᤃ ऐ঎ԡጲ ϟᤃ঎࿗ ϟ ԰ԡԡጲ ϟ ሕᤃԡ
᥈ࣼᔽझၤᆍࣼ ᧕ᑕ༁ၤᑕၤᔀ
জ 注᧥ ᦵ᤹঎ 大明山群体ଫ Þȣ঎ 梵净山群体ଫ ᦵ୒঎ 大沙河群体ᤥ 下同ᤥ
জશᆍᡷᔀ᧥ ᦵ᤹঎ ᧕ᑕቝᔽႿ੫ ᥘᆍࣼႿᡷᑕᔽႿ ੫ʢᆍࣼᡱଫ Þȣ঎ èᑕႿᢼᔽႿ੫ ᥘᆍࣼႿᡷᑕᔽႿ ੫ʢᆍࣼᡱଫ ᦵ୒঎ ᧕ᑕ༁ၤᑕၤᔀ ੫ʢᆍࣼᡱ঎ ఋၤᔀ ༁ᑕቝᔀ ᤦᔀ᤟ᆍऔ঎
ϓॹԣ 方法 术有限公司合成ᖔఋᑕी 酶ܦʛશఋ۪༁ 等也购自该公司ᤥ
ϟ঎԰঎ϟ 大明松 ᧕શዶ 提取方法জ 采用改良的 ऊఋዶା ۪ऊ኏ 反应体系为 ϟԡ ဂᓂ᧥ ϟԡ ቝቝᆍ᤟ ኼ ᓂ ᥋ϟ ᡱ̀
裂解ᗵ硅珠吸附法ྉ ᧕ᆍᢃ᤟ᔀ ᪲ ᧕ᆍᢃ᤟ᔀᖔϟँँԡɯ 提取大 ऐ঎ ԡఋʢᔽ༁᥋̀ऊ᧧ᖔ ጢԡ ቝቝᆍ᤟ ኼ ᓂ ᥋ϟ ᣽ऊ᧧ᖔ ԰঎ ጢ ቝቝᆍ᤟ ኼ ᓂ ᥋ϟ
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԰շ
明松针叶 ᧕શዶ 并纯化ᖔ通过琼脂糖凝胶电泳ྉϟᠮ ᥘ੫ ᖔԡ঎԰ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ʛશఋ۪༁ᖔ԰঎ጢ ᡱቝᆍ᤟ 引物ᖔԡ঎ԡऐ В
浓度ɯ抽样检测样本 ᧕શዶ 质量ᖔ采用紫外分光光 ఋᑕी 聚合酶ᖔϟԡ ጲ ԰ԡ Ⴟ੫ ᧕શዶᤥ 扩增反应程序᧥ँ࿗ ቩ
度计测定各样本 ᧕શዶ 浓度ᖔ稀释至统一浓度后置 ࿗ ቝᔽႿଫँ࿗ ቩ ϟጢ ༁ᖔ ጢጢ ጲ ᤃԡ ቩ ϟጢ ༁ᖔ Ꭾ԰ ቩ ሕԡ ༁ᖔ ԰ጢ
于ͱ԰ԡ ቩ 环境保存备用ᤥ ዹᢃዹ᤟ᔀ༁ଫ Ꭾ԰ ቩ 延伸 ԰ԡ ቝᔽႿ 结束 ۪ऊ኏ 反应ྉ 冯源恒
ϟ঎԰঎԰ 大明松 ୩୩኏ 引物来源及 ۪ऊ኏ 反应条件জ 研 等ᖔ԰ԡϟᤃɯᤥ
究所使用的 ୩୩኏ 引物是根据马尾松基因组 ᧕શዶ 将 ۪ऊ኏ 扩增产物进行 ऐᠮ聚丙烯酰胺凝胶电
测序所得序列设计开发获得ྉ 冯源恒等ᖔ԰ԡϟᤃɯᖔ并 泳ᖔ并银染检测ᖔ实验方法参照杨章旗等ྉ԰ԡϟ࿗ɯ 方
使用 ऐ 个大明松 ᧕શዶ 样品进行引物筛选ᖔ选取主 法进行ᤥ
带清晰且有多态性的引物 ϟ԰ 对ᖔ用于本实验的群 ϟ঎԰঎ሕ 遗传多样性分析জ୩୩኏ 条带判读参照杨章旗
体遗传多样性研究ᤥ 引物设计由上海捷瑞基因技 等ྉ԰ԡϟ࿗ɯ 方法进行ᤥ 获得 ୩୩኏ 分型数据后ᖔ采用