Page 127 - 《广西植物》2022年第8期

ϟ ሕ Ꭾ ᤃ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗԰ 卷
ጢ԰ᠮᤥ 张勇等ྉ԰ԡϟँɯ 发现 ᤃᤃ঎ᤃᎮᠮ 的桃 ጶ୩ఋ᥋୩୩኏ 表 ϓই ጇԔ 份供试材料的种质信息
引物在蔷薇科物种中扩增出多态性ᤥ 方书生等 ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ᥈ᔀʢቝᡱ᤟ᑕ༁ቝ ᔽႿ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ጢԡ ᡷᔀ༁ᡷᔀʛ ቝᑕᡷᔀʢᔽᑕ᤟༁
ྉ԰ԡϟऐɯ 发现棉花 ୩୩኏ 标记在红麻中的通用性为 编号 供试材料 种质来源地
ጢሕ঎ጢᠮᤥ 可见ᖔ在近缘物种间探讨 ጶ୩ఋ᥋୩୩኏ 引物的 શᆍ঎ ఋᔀ༁ᡷᔀʛ ቝᑕᡷᔀʢᔽᑕ᤟ ᥈ᔀʢቝᡱ᤟ᑕ༁ቝ ༁ᆍࣼʢዹᔀ
通用性有效且可行ᤥ 本研究基于香合欢转录组测 ϟͱሕԡ 香合欢 广西百色隆林县
ዛᤀᤇᔠऊᔠᐹ ᅳʐᅳʗᐹᡙᔠ໧໧ᔠቂᐹ ᓂᆍႿ੫᤟ᔽႿ ऊᆍࣼႿᡷᢃᖔ ାᑕᔽ༁ᔀᖔ ᥈ࣼᑕႿ੫଴ᔽ
序结果设计开发 ጶ୩ఋ᥋୩୩኏ 引物ᖔ对其在香合欢ܦ黄
ሕϟͱሕ࿗ 黄豆树 广西壮族自治区林业科学研究院
豆树ܦ黑木相思ܦ南洋楹ܦ格木中的通用性进行研 ዛॹ ᡓʗᅳዞᓣʗᐹ ᥈ࣼᑕႿ੫଴ᔽ ዶࣼᡷᆍႿᆍቝᆍࣼ༁ ኏ᔀ੫ᔽᆍႿ
èᆍʢᔀ༁ᡷʢᢃ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀ
究ᖔ将现有引物转移到黄豆树ܦ黑木相思ܦ南洋楹ܦ
ሕጢͱሕऐ 格木 南宁市林业科学研究所
格木等近缘树种上ᖔ既可有效节约引物开发成本ᖔ ጛʗᡥᡙ၊ʗᅳᡓ၊ᤀᓣࣩቂ ஏᅳʗʐᔠᔠ શᑕႿႿᔽႿ੫ èᆍʢᔀ༁ᡷʢᢃ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀ
提高引物的利用效率ᖔ也可为香合欢ܦ黄豆树ܦ黑 ሕँ 香合欢 广西百色田东县
ዛᤀᤇᔠऊᔠᐹ ᅳʐᅳʗᐹᡙᔠ໧໧ᔠቂᐹ ఋᔽᑕႿʛᆍႿ੫ ऊᆍࣼႿᡷᢃᖔ ାᑕᔽ༁ᔀᖔ ᥈ࣼᑕႿ੫଴ᔽ
木相思ܦ南洋楹ܦ格木及其他一些近缘物种的种质
࿗ԡ 香合欢 广西百色西林县
资源保护ܦ遗传多样性等相关研究提供可靠分子 ዛॹ ᅳʐᅳʗᐹᡙᔠ໧໧ᔠቂᐹ ᣮᔽ᤟ᔽႿ ऊᆍࣼႿᡷᢃᖔ ାᑕᔽ༁ᔀᖔ ᥈ࣼᑕႿ੫଴ᔽ
标记ᤥ ࿗ϟ 香合欢 海南尖峰岭
ዛॹ ᅳʐᅳʗᐹᡙᔠ໧໧ᔠቂᐹ ȮᔽᑕႿ஦ᔀႿ੫᤟ᔽႿ੫ᖔ ̀ᑕᔽႿᑕႿ
ϟজ 材料与方法 ࿗԰ ዛॹ ᅳʐᅳʗᐹᡙᔠ໧໧ᔠቂᐹ 海南霸王岭
香合欢
ାᑕऔᑕႿ੫᤟ᔽႿ੫ᖔ ̀ᑕᔽႿᑕႿ
࿗ሕͱ࿗࿗ 南洋楹 广东林科院树木园
ϓॹϓ 材料 Þᐹᤀዞᐹᡙᐹʗᔠᐹ ஏᐹᤀዞᐹᡙᐹ ఋʢᔀᔀ ᥈ᑕʢʛᔀႿ ᆍ஦ ᥈ࣼᑕႿ੫ʛᆍႿ੫ ዶዹᑕʛᔀቝᢃ
ᆍ஦ èᆍʢᔀ༁ᡷʢᢃ
选取 ሕԡ 份香合欢种质作为香合欢引物多态性
࿗ጢͱ࿗ᤃ 南洋楹 广西壮族自治区林业科学研究院
研究的材料ᤥ 另外ᖔ选取香合欢ܦ黄豆树ܦ黑木相 Þॹ ஏᐹᤀዞᐹᡙᐹ ᥈ࣼᑕႿ੫଴ᔽ ዶࣼᡷᆍႿᆍቝᆍࣼ༁ ኏ᔀ੫ᔽᆍႿ
思ܦ南洋楹ܦ格木种质资源各 ࿗ 份ᖔ作为引物通用性 èᆍʢᔀ༁ᡷʢᢃ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀ
黑木相思
研究的材料ྉ表 ϟɯᤥ 其中ᖔ格木和黑木相思材料均 ࿗Ꭾͱጢԡ ዛዞᐹዞᔠᐹ ቂᓣᤀᐹႥᅳଝᡥᤀᅳႥ 南宁市林业科学研究所
શᑕႿႿᔽႿ੫ èᆍʢᔀ༁ᡷʢᢃ ኏ᔀ༁ᔀᑕʢዹၤ ᧧Ⴟ༁ᡷᔽᡷࣼᡷᔀ
采自南宁市林业科学研究所ᖔ࿗ 份香合欢材料分别
为广西百色市田东县地方种ܦ广西百色市西林县地
量分光光度计对提取好的 ᧕શዶ 的浓度进行检测ᖔ
方种ܦ海南省尖峰岭地方种ܦ海南省霸王岭地方种ᖔ࿗
置于ͱ԰ԡ ቩ 冰箱保存ᤥ
份南洋楹材料中 ԰ 份采自广东省林科院树木园ܦ԰
ϓॹ྽ ۗࣷቴ 扩增
份采自广西壮族自治区林业科学研究院ᖔ࿗ 份黄豆
树材料采自广西壮族自治区林业科学研究院ᤥ 格 ۪ऊ኏ 扩增反应总体积 ϟԡ ဂᓂᖔ含 ϟဂᓂ ᧕શዶྉᤃԡ
᥋ϟ
木ܦ黑木相思ܦ黄豆树材料由于取样地距离较近且 Ⴟ੫ኼဂᓂ ɯᖔԡ঎԰ ဂᓂ ʛશఋ۪༁ᖔ上下游引物各 ԡ঎԰ጢ ဂᓂᖔ
取材较方便ᖔ因此采样后立即放入采样箱中ᖔ随后 ϟဂᓂ 的 ϟԡ ġ ۪ऊ኏ ାࣼ஦஦ᔀʢᖔ ԡ঎ ϟ ဂᓂ 的 ఋᑕी ᧕શዶ
᥋ϟ
将样品放入ͱऐԡ ቩ 冰箱进行保存ଫ而香合欢和南洋 ۪ᆍ᤟ᢃቝᔀʢᑕ༁ᔀ ྉጢ Вኼဂᓂ ɯᖔᎮ঎԰ ဂᓂ 的 ʛʛ̀ ᨃᖔ扩增反
԰
楹材料因为取样地距离较远且取材较难ᖔ所以采集 应在 ۪ऊ኏ 仪上进行ᤥ 扩增程序为 ँ࿗ ቩ 预变性 ࿗
ቝᔽႿᖔँ࿗ ቩ 变性 ϟጢ ༁ᖔጢऐ ቩ 复变性 ϟጢ ༁ᖔᎮ԰ ቩ 延伸
新鲜样品后立即放入硅胶中干燥保存ᤥ
ϓॹԣ ୒୒ቴ 标记开发 ሕԡ ༁ᖔ԰ጢ 个循环ଫᎮ԰ ቩ 延伸 ԰ԡ ቝᔽႿᖔϟ԰ ቩ 保存ᤥ
对香合欢叶子进行转录组测序ᖔ根据测序结 ϓॹጇ 扩增产物的检测
果ᖔ使用 શᆍ׹ᆍ஦ᔽႿʛᔀʢ 软件对香合欢转录组 ሕऐ ϟԡᎮ 用 ऐᠮ的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物ᖔ
条 ВႿᔽ੫ᔀႿᔀ 中的 ୩୩኏ 位点进行搜索ᖔ筛选的标准 在 ԰࿗ԡ ჆ 恒压下电泳ྉ一般为 ጢԡ ጲ ጢጢ ቝᔽႿɯᖔ可根据
溴酚蓝指示剂的位置调整电泳时间ᤥ 首先ᖔ将凝
是三至五核苷酸重复基元的次数为 ጢ 次或大于 ጢ
次ᖔ序列长度的范围为 ϟऐ ጲ ԰ᤃ ᤦᡱᤥ 引物均由广 胶用 ʛʛ ̀ ᨃ 清洗 ԰ 次后ᖔ在固定液中固定 ϟԡ ቝᔽႿᖔ
԰
州艾基生物技术有限公司合成ᤥ 随后取出凝胶用蒸馏水清洗 ԰ 次ᖔ 每次清洗 ԰
ϓॹᇺ ᦵટዛ 提取 ቝᔽႿଫ然后ᖔ将凝胶放入 ԡ঎ϟጢᠮ ዶ੫શᨃ 溶液中染色
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植物基因组 ᧕શዶ 的提取是使用液氮将香合欢 ᤃጲᎮ ቝᔽႿᖔ用 ʛʛ ̀ ᨃ 清洗 ԰ 次ᖔ每次 ԰ቝᔽႿᖔ随后将
԰
及其近缘物种的叶片研磨成粉末状ᖔ采用 ጶझࣼᡱ 柱 凝胶放入显影液中至条带清晰ᖔ用 ʛʛ ̀ ᨃ 清洗 ԰
԰
式植物基因组 ᧕શዶ 抽提试剂盒提取 ᧕શዶᖔ 使用微 次后读带并拍照ᤥ