Page 42 - 《广西植物》2022年第8期

ϟ ԰ ँ ᤃ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗԰ 卷
年 ϟ԰ 月 ԰ϟ 日在广西沿海区域采集三种真红树植 泥土 ሕ 份ᤥ 经北仑河口红树林自然保护区吴志鹤
物的根ܦ茎ܦ叶ܦ花ܦ果实和泥土ᖔ按照不同地点分 鉴定ᖔሕ 种真红树分别为秋茄ྉ ᣞᐹႥʐᓣᤀᔠᐹ ዞᐹႥʐᓣɯܦ木
成 ԰԰ 份样品ᤥ 具体信息见表 ϟᖔ根部位样品 ࿗ 份ᖔ 榄ྉ ଧʗࣩ੖ࣩᔠᓣʗᐹ ੖ᡥቂႥᅳʗʗ၊ᔠऊᐹɯ 和红海榄 ྉ ቴ၊ᔠऊᅳᡓ၊ᅳʗᐹ
茎部分 ᤃ 份ᖔ叶部分 ᤃ 份ᖔ花部分 ϟ 份ᖔ果实 ԰ 份ᖔ ໧ᡙᡥᤀᅳ໧ᐹɯᤥ

表 ϓই 样品采样信息
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ᧧Ⴟ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ዹᆍ᤟᤟ᔀዹᡷᔀʛ ༁ᑕቝᡱ᤟ᔀ༁
样品编号 植物类型 样品部位 经纬度
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èϟ 秋茄 ϟ 根ܦ叶ܦ茎ܦ泥土 ϟԡऐ๼࿗԰ࣕԡᤃ ጶܦ԰ϟ๼ሕँࣕԡ࿗ શ
ᣞᐹႥʐᓣᤀᔠᐹ ዞᐹႥʐᓣ ϟ ኏ᆍᆍᡷᖔ ᤟ᔀᑕ஦ᖔ ༁ᡷᔀቝᖔ ༁ᆍᔽ᤟
è԰ 秋茄 ԰ 根ܦ叶ܦ茎ܦ泥土 ϟԡऐ๼ሕϟࣕ԰ጢ ጶܦ԰ϟ๼ጢሕࣕϟጢ શ
ᣞॹ ዞᐹႥʐᓣ ԰ ኏ᆍᆍᡷᖔ ᤟ᔀᑕ஦ᖔ ༁ᡷᔀቝᖔ ༁ᆍᔽ᤟
èሕ 木榄 ϟ 果ܦ叶ܦ茎 ϟԡऐ๼ϟሕࣕ࿗Ꭾ ጶܦ԰ϟ๼ሕᤃࣕጢᎮ શ
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è࿗ 木榄 ԰ 花ܦ叶ܦ茎 ϟԡऐ๼ϟሕࣕ࿗Ꭾ ጶܦ ԰ϟ๼ሕᤃࣕጢᎮ શ
ଧॹ ੖ᡥቂႥᅳʗʗ၊ᔠऊᐹ ԰ è᤟ᆍऔᔀʢᖔ ᤟ᔀᑕ஦ᖔ ༁ᡷᔀቝ
èጢ 木榄 ሕ 果ܦ根ܦ叶ܦ茎ܦ泥土 ϟԡऐ๼ϟሕࣕ࿗Ꭾ ጶܦ԰ϟ๼ሕᤃࣕጢᎮ શ
ଧॹ ੖ᡥቂႥᅳʗʗ၊ᔠऊᐹ ሕ èʢࣼᔽᡷᖔ ʢᆍᆍᡷᖔ ᤟ᔀᑕ஦ᖔ ༁ᡷᔀቝᖔ ༁ᆍᔽ᤟
èᤃ 红海榄 叶ܦ茎ܦ根 ϟԡऐ๼ϟሕࣕ࿗Ꭾ ጶܦ԰ϟ๼ሕᤃࣕጢᎮ શ
ቴ၊ᔠऊᅳᡓ၊ᅳʗᐹ ໧ᡙᡥᤀᅳ໧ᐹ ᓂᔀᑕ஦ᖔ ༁ᡷᔀቝᖔ ʢᆍᆍᡷ

ϟ঎ϟ঎԰ 试剂জϟᤃ୩ ʢ኏શዶ 基因扩增引物对 ԰Ꭾèྉጢࣕ᥋ 菌水冲洗干净ᖔᎮጢᠮ乙醇中浸泡 ጢቝᔽႿᖔ无菌水冲
ዶ᥈ዶ᥈ఋఋఋ᥈ዶఋऊऊఋ᥈᥈ऊఋऊዶ᥈᥋ሕࣕɯ 和 ϟ࿗ँ԰኏ ྉ ጢࣕ᥋ 洗至无乙醇味ᤥ 取以上样品约 ԰੫ 于无菌研钵中ᖔ
᥈᥈ఋఋዶऊऊఋఋ᥈ఋఋዶऊ᥈ዶऊఋఋ᥋ሕࣕɯ 购于全式金生物技 加入 ԰ቝᓂ 无菌海水研匀即得原液ᤥ 参考李菲等
术有 限 公 司 ྉ 中国ᖔ 北京ɯଫ ऊၤᔀ᤟ᔀ଴᥋ϟԡԡ 树脂ᖔ԰ ġ ྉ԰ԡϟऐɯ的方法ᖔ泥土样品除去杂质ᖔ取约 ԰঎ԡ ੫ 于
ጶᑕ༁ᢃ ఋᑕी ୩ࣼᡱᔀʢቝᔽ଴ ାᔽᆍ኏ᑕʛ 购于 ାᔽᆍ኏ᑕʛ 公司 ྉ 美 装有 ԰ԡ ቝᓂ 无菌水ྉ 内有玻璃珠ɯ 的锥形瓶中ᖔ放
国ɯଫጢᠮ的次氯酸钠溶液购于朗索医用消毒剂有 入摇床摇匀ᖔ充分均质即得原液ᤥ 所有样品原液
限公司ྉ中国ᖔ杭州ɯଫ其他试剂均为国产分析纯ᤥ 置于 ࿗ቩ 冰箱保存ᤥ 选取 ᥘᎮܦ۪Ꭾܦᥘϟϟܦᥘϟԡܦᥘጢܦ
ϟ঎ϟ঎ሕ 培养基জ 分离培养基᧥参考李蜜等ྉ԰ԡ԰ԡɯ 方 ዶ᥈᥈ܦ۪ሕܦᥘँ ऐ 种分离培养基ᖔ取样品的 ϟԡ 悬液
᥋࿗
法配 制培养基 ۪ሕܦ ۪Ꭾܦ ዶ᥈᥈ܦ ᥘጢܦ ᥘᎮܦ ᥘँܦ ᥘϟԡܦ ϟԡԡ ဂᓂ 涂布ྉ李蜜等ᖔ԰ԡ԰ԡɯᤥ
ᥘϟϟᤥ 发酵培养基᧥改良 ᧧୩۪԰ 液体培养基ᤥ 酶活 ϟ঎԰঎԰ 可培养细菌的分离纯化ܓ鉴定ܓ保藏জ 参考吴
性筛选培养基᧥参考赵雅慧等ྉ԰ԡϟऐɯ 方法制作ᤥ 家法等ྉ԰ԡϟᎮɯ 的方法ᖔ将分离培养平板置于 ԰ऐ ቩ
纤维素酶筛选培养基᧥ᓂା 培养基中加入 ϟᠮ 的羧 恒温培养箱培养 ԰ጲऐ 周ᤥ 长出细菌后ᖔ挑取质地光
甲基纤维素钠和 ϟ঎ጢᠮ 的琼脂ᤥ 淀粉酶筛选培养 滑的单菌落ᖔ三线法在 ᧧୩۪԰ 纯化培养基分离纯化ᖔ
基᧥ᓂା 培养基中加入 ϟᠮ淀粉和 ϟ঎ጢᠮ琼脂ᤥ 蛋白 直至获得纯净菌株ᖔ记录菌株数量及其形态特征ᤥ
酶筛选培养基᧥ 脱脂奶粉 ϟᠮᖔ 葡萄糖 ϟᠮᖔ 琼脂 参考 ऊၤᔀ᤟ᔀ଴᥋ϟԡԡ 法ྉ周双清等ᖔ԰ԡϟԡɯ提取已纯化细

ϟ঎ጢᠮᤥ 菌的基因组 ᧕શዶᖔ参照 ۼᑕ᤟༁ၤ 等ྉϟँँϟɯ的方法对细
ϟ঎ ϟ঎ ࿗ 指示菌 জ 无乳链球 菌 ྉ ୒ᡙʗᓣᡓᡙᅳዞᅳዞዞࣩ໧ 菌基因组 ᧕શዶ 进行 ۪ऊ኏ 梯度扩增ᤥϟᠮ琼脂糖凝
ᐹ੖ᐹᤀᐹዞᡙᔠᐹᓣɯશऊఋऊ ऐϟऐϟܦ海豚链球菌ྉ୒ॹ ᔠႥᔠᐹᓣɯऊዶ᧧ᥘ 胶电泳检测阳性扩增产物委托上海美吉生物医药
ጢ԰Ꭾܦ沙门氏菌ྉ ୒ᐹᤀቂᅳႥᓣᤀᤀᐹɯᤥ 以上指示菌均由华 技术有限公司广州分公司进行测序ᤥ 经 ᧕શዶ ୩ᡷᑕʢ

南农业大学张晓勇课题组提供ᤥ 软件 整 理 ϟᤃ୩ ʢ኏શዶ 基 因 测序结果ᖔ 用数据库
ϓॹԣ 实验方法 ጶझାᔽᆍऊ᤟ᆍࣼʛྉၤᡷᡷᡱ᧥ᣰ ᣰ औऔऔ঎ᔀझᡷᑕ଴ᆍႿ঎ᆍʢ੫ᣰ ɯྉ԰ԡԡँɯ及 ା᤟ᑕ༁ᡷ
ϟ঎԰঎ϟ 样品的处理জ 参考李蜜等ྉ԰ԡ԰ԡɯ 的方法ᖔ真 网站进行相似性比对ᤥ 纯化的菌株保藏于 ԰ԡᠮྉ჆ᣰ
红树植物样品用 ጢᠮ次氯酸钠溶液浸泡 ऐቝᔽႿᖔ无 ჆ɯ甘油管中ᖔ置于ͱऐԡ ቩ超低温冰箱中保存ᤥ