Page 84 - 《广西植物》2023年第1期

８ ０ 广 西 植 物 ４３ 卷
ｐｌａｎｔ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｐｕｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｐ.
ｔｕｎｉｃｏｉｄｅｓ. Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｈｅ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ Ｋｏｃｈ’ｓ Ｐｏｓｔｕｌａｔｅｓꎬ ａｎｄ
ｔｈｅｎ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎꎬ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ａｎｄ ＴＥＦ￣１α ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ
ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ: (１) Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ８５ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄꎬ ａｍｏｎｇ ｗｈｉｃｈ ＰＳＤ￣１ꎬ ＰＳＤ￣２
ａｎｄ ＰＳＤ￣３ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｆｕｎｇｉ ｃａｕｓｅｄ ｒｏｏｔ ｒｏｔ ｏｆ Ｐｓａｍｍｏｓｉｌｅｎｅ ｔｕｎｉｃｏｉｄｅｓ. (２) Ｔｈｅｓｅ ｔｈｒｅｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｒｅ￣ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｉｎｔｏ
ｔｈｅ Ｐ. ｔｕｎｉｃｏｉｄｅｓꎬ ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｓｉｍｉｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｗｉｔｈ ｆｉｅｌｄ ｐｌａｎｔｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅｓ ａｆｔｅｒ
ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ６０％ꎬ ６１. ７％ ａｎｄ ７１. ７％ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. ( ３) Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓꎬ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ. Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｆｉｒｓｔｌｙ ｆｏｕｎｄ
ｔｈａｔ ｔｈｅ Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｗａｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｃａｕｓｉｎｇ ｒｏｏｔ ｒｏｔ ｏｆ Ｐｓａｍｍｏｓｉｌｅｎｅ ｔｕｎｉｃｏｉｄｅｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ
ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｌａｙ ａ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎ￣ｄｅｐｔｈ ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｌｏｒａ ｗｉｔｈ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｒｏｏｔ ｒｏｔ ａｎｄ ｉｔｓ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍꎬ ａｎｄ ｓｅｒｖｅ ａｓ ａ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗ￣ｕｐ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｐｓａｍｍｏｓｉｌｅｎｅ ｔｕｎｉｃｏｉｄｅｓꎬ ｒｏｏｔ ｒｏｔꎬ ｉｓｏｌａｔｉｏｎꎬ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ

根腐病是一类具有容易传染、发病率高、防治 ２００２)ꎮ ｒＤＮＡ 是鉴定镰刀菌的理想方法ꎬ其最大
困难等特点的根部病害ꎬ在根和根茎类药用植物 优点是既具有保守性ꎬ又存在变异性ꎮ 作为真核
中的发病率较高(陈茂婷等ꎬ２０２０)ꎮ 据报道ꎬ引起 生物多肽链延伸因子ꎬＴＥＦ￣１α 在种水平上具丰富
植物根腐病的病原菌主要为镰刀菌属真菌( 穆向 信息量ꎬ较 ＩＴＳ 序列有更多的种间变异ꎬ具有高分
荣等ꎬ２０１４ꎻ伍晓丽等ꎬ２０２０ꎻ曹敏ꎬ２０２２)ꎮ 镰刀菌 辨力ꎮ 这种方法与 ＩＴＳ 序列联合分析ꎬ可提高对镰
是一类世界性分布的真菌ꎬ可通过破坏植物体结 刀菌鉴别的准确性ꎮ
构ꎬ侵染多种植物根、茎及果实等部位ꎬ引起根腐 金 铁 锁 ( Ｐｓａｍｍｏｓｉｌｅｎｅ ｔｕｎｉｃｏｉｄｅｓ ) 是 石 竹 科
病、 茎 腐 病 和 穗 腐 病 等 多 种 病 害 ( 谢 安 娜 等ꎬ (Ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｃｅａｅ)金铁锁属(Ｐｓａｍｍｏｓｉｌｅｎｅ) 植物ꎬ首
２０２０)ꎮ 由镰刀菌引起的多种土传病害也正威胁 载于«滇南本草» (兰茂ꎬ２００４)ꎬ主要分布在中国云
我国三七、人参、黄芪、半夏、川芎、麻黄等重要中 南、贵州、西藏等省区(朱常成等ꎬ２００７)ꎮ 金铁锁以
药材 的 种 植 生 产 ( 朱 春 雨 等ꎬ ２００３ꎻ 李 佳 穗 等ꎬ 根入药ꎬ主治跌打损伤、风湿、痈疽疮疖、创伤出血
２０１５ꎻ文增 叶 等ꎬ２０１９ꎻ 张 静 等ꎬ２０１９ꎻ 姚 天 明 等ꎬ 等(胡成刚等ꎬ２００２)ꎮ 在苗族、彝族、白族等少数民
２０２０ꎻＬｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１)ꎮ 目前ꎬ国内外研究关于镰 族中有着悠久的用药历史ꎬ其有效成分为齐墩果烷
刀菌分类地位、形态学与分子学特征、致病性与致 型三萜皂苷类化合物ꎬ在镇痛抗炎、调节免疫、杀菌
病机 理 及 生 物 防 治 等 方 面 均 有 报 道 ( 高 芬 等ꎬ 抑菌等方面具有较好的作用(王学勇等ꎬ２００６ꎻ周欣
２０１８ꎻ梁嘉俊等ꎬ２０１９)ꎮ 由于镰刀菌属形态复杂ꎬ 等ꎬ２０１３)ꎬ是“云南白药”等多种著名中成药的主要
易受外界环境影响而发生变异ꎬ因此ꎬ通过形态学 原料药物之一(周祖英等ꎬ２０２１)ꎮ 近年来ꎬ由于长
特征很难准确地鉴定镰刀菌种类ꎬ影响了后续防 期的采挖ꎬ金铁锁野生资源急剧减少(朱常成和尹
治等工作的开展ꎮ 随着分子生物学技术的发展ꎬ 子丽ꎬ２０１７)ꎬ现已被列为国家二级保护植物ꎬ被«中
形态学结合 ＤＮＡ 分子片段分析等手段能更加有 国植物红皮书»收录(傅立国ꎬ１９９１)ꎮ
效地提高镰刀菌种类鉴定的准确性( 王世伟等ꎬ 目前ꎬ云南大部分地区都有种植金铁锁( 吕金
２０１８)ꎮ 内转录间隔区( ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒꎬ 富等ꎬ２０１８ꎻ罗映菊ꎬ２０１８)ꎮ 课题组前期对曲靖马
ＩＴＳ)、 线 粒 体 小 亚 基 核 糖 体 ( ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｓｍａｌｌ 龙、玉溪华宁、大理剑川及丽江华坪等云南各地区
ｓｕｂｕｎｉｔ ｒＤＮＡꎬｍｔＳＳＵ)、β￣微管蛋白( β￣ｔｕｂｕｌｉｎ) 及 金铁锁栽培基地进行了走访调查ꎬ发现二年生、三
翻译延伸因子( ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ￣ 年生的金铁锁在 ７—８ 月雨季时极易发生根腐病ꎬ多
１αꎬＴＥＦ￣１α)等 ｒＤＮＡ 片段已被广泛地用于镰刀菌 年的连作方式使土壤中的病原菌积累ꎬ导致土壤环
种类的鉴定( Ｓａｍｐｉｅｔｒｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０)ꎮ 其中ꎬ核糖 境复杂ꎬ根腐病害的发生逐年加重ꎬ农户因怕遭受
体 ＤＮＡ (ｒＤＮＡ)和 ＴＥＦ￣ｌα 延伸因子两类基因位点 病害导致损失而采挖一年生的金铁锁ꎬ但一年生金
常用于进行镰刀菌属的种属鉴定( Ｔａｐａｎｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ 铁锁因栽培年限不够又导致药材浸出物检验不合