Page 36 - 《广西植物》2023年第4期
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ᤃ ϟ ऐ                                  广জ 西জ 植জ 物                                         ࿗ሕ 卷
            基的抗霉素 ᑕႿᡷᔽቝᢃዹᔽႿ ዶϟऐᖔ对植物病原菌有良好                      ϟ঎ϟ঎ጢ 主要仪器জ୩ۼ᥋ऊȮ᥋԰è 超净工作台ྉ苏州安泰
            的杀菌活性ᖔ而抗乙肝病毒活性未见报道ᤥ 因此ᖔ                            空气 技术有限公司ɯଫ ఋዶʛ׹ᑕႿዹᔀʛ ँᤃ۪ऊ኏ 扩增仪
            本研究开展木榄生境中可培养细菌物种多样性探                              ྉାᔽᆍቝᔀᡷʢᑕᖔ 德国ɯଫ Իۼɟ۪᥋԰ϟԡ԰ 恒 温 培养振荡器
            索ᖔ并测试其代谢产物抗乙肝病毒活性ᖔ以期为药                             ྉ上海智城分析仪器制造有限公司ɯଫ̀኏ϟጢԡԡ᥋֒
            用红树资源充分挖掘利用和抗乙肝药物开发提供                              ା԰ 生物安全柜ྉ 青岛海尔生物医疗股份有限公
            药源菌株ᤥ                                              司ɯଫ ᥘऊᨃ᥋ϟᎮԡዶ᧧ऊ᧕ᓂ᥋۪ऊ 全波长多 功 能 酶 标 仪
                                                               ྉఋᔀዹᑕႿᖔ瑞士ɯଫᓂᔽ੫ၤᡷ ऊᢃዹ᤟ᔀʢ࿗ऐԡ֒高通量实时荧光
            ϟজ 材料与方法                                           定量 ۪ऊ኏ 系统ྉ኏ᆍዹၤᔀᖔ瑞士ɯᤥ
                                                               ϓॹԣ 方法
            ϓॹϓ 材料                                             ϟ঎԰঎ ϟ 样品的预处理 জ 样品处理参考李菲等
            ϟ঎ϟ঎ϟ 样品জ԰ԡϟँ 年 ጢ 月在广西北仑河口红树林                      ྉ԰ԡϟऐɯ的方法ᤥ 首先将木榄的根ܦ叶ܦ胚轴先用无
            自然保护区ྉϟԡऐ๼ϟ࿗ࣕϟϟ× ጶܦϟँ๼ሕᤃࣕጢጢ× શɯ 采集木                菌水清洗ᖔ然后用 Ꭾጢᠮ酒精浸泡 ԰ቝᔽႿᖔ最后用无
            榄的生境沉积物ܦ根ܦ叶ܦ胚轴样品ᤥ 对木榄沉积                            菌水冲洗除去酒精ᤥ 取大约 ԰঎ԡ ੫ 沉积物样品和

            物用灭菌铲挖取深度为 ጢዹቝ 的土壤ᖔ对木榄的根ܦ                          木榄各组织样品ᖔ分别置于无菌研钵中ᖔ加 ԰ቝᓂ
            叶ܦ胚轴直接采取后用无菌水冲洗表面ᖔ将各样品                             海水充分研磨ᖔ作为样品原液ᤥ 用无菌海水依次
            分装在密封袋内ᖔ保存于采样冰盒中ᖔ带回实验室                             稀释成 ϟġϟԡ ܦϟġϟԡ ੫ኼቝᓂ 样液ᤥ
                                                                                         ᥋ϟ
                                                                          ᥋ሕ
                                                                                 ᥋࿗
            处理ᤥ                                                ϟ঎԰঎԰ 木榄生境中可培养细菌的分离纯化জ 取 ϟġ
            ϟ঎ϟ঎԰ 培养基জ 分离培养基᧥共 ϟԡ 种ᖔ包括燕麦培                      ϟԡ ܦϟġϟԡ ੫ኼቝᓂ 的样液 ϟԡԡ ဂᓂ 均匀涂布于 ϟԡ
                                                                 ᥋ሕ
                                                                        ᥋࿗
                                                                                ᥋ϟ
            养基ྉ۪ሕɯܦ酪氨酸᥋天冬酰胺培养基ྉ۪Ꭾɯܦ海藻糖᥋                        种分离培养基中ᖔ在 ԰ऐ ቩ 恒温培养箱中倒置培养
            脯氨酸培养基ྉᥘጢɯܦ改良 ᧧୩۪ጢ 培养基ྉᥘᎮɯܦ精氨                      ԰ጲ ᤃ 周ᖔ不同形态的单菌落被挑取后ᖔ接种于 ᧧୩۪԰
            酸᥋天冬酰胺培养基ྉᥘँɯܦ改良淀粉᥋水解酪素培                           培养基ᖔ利用三区划线纯化菌株ᤥ 将生长良好且
            养基ྉᥘϟԡɯܦ棉籽糖᥋组氨酸培养基ྉᥘϟϟɯܦ改良的                        无污染的菌体保藏于 ԰ԡᠮྉႬᣑ Ⴌɯ 甘油管中ᖔ置于 ࿗
            高氏培养基ྉዶ᥈᥈ɯܦ኏԰ዶܦ԰԰ϟᤃጶᖔ培养基详细配方                       ቩ 冰箱中短期存放ᖔ于ͱऐԡ ቩ 冰箱中长期保存ᤥ
            参考李 蜜 等 ྉ԰ԡ԰ԡɯ 的方法ᤥ 纯化培养基᧥ 改良                      ϟ঎԰঎ሕ 细菌的分子生物学鉴定জ 提取目标菌株的
            ᧧୩۪԰ 固体培养基ྉ 酵母提取物 ԰঎ԡ ੫ܦ麦芽提取物                      基因组 ᧕શዶ 采用 ऊၤᔀ᤟ᔀ଴᥋ϟԡԡ ኏ᔀ༁ᔽႿ 法ྉ 周双清等ᖔ
            ԰঎ԡ ੫ܦ 葡萄糖 ԰঎ ԡ ੫ܦ 琼脂 ԰ԡ঎ ԡ ੫ 和海水 ϟԡԡԡ             ԰ԡϟԡɯ并参照 ۼᑕ᤟༁ၤ 等ྉϟँँϟɯ 的方法进行 ۪ऊ኏ 梯
            ቝᓂɯᤥ 发酵培养基᧥改良 ᧧୩۪԰ 液体培养基ܦ含ԡ঎ϟᠮ                     度扩增ᤥ 通用引物 ԰Ꭾè 和 ϟ࿗ँ԰኏ 用于 ϟᤃ୩ ʢ኏શዶ
            小球藻的改良 ᧧୩۪԰ 液体培养基ᤥ 细胞完全培养                          基因片段的扩增ᤥ 用 ϟᠮ 琼脂糖ྉ ቂᣑ Ⴌɯ 凝胶电泳
            基᧥ँԡᠮ ᧕ᥘጶᥘ 培养基ܦϟԡᠮ 胎牛血清ܦϟԡԡ В ኼ                    检测扩增产物后ᖔ委托上海美吉生物医药技术有
               ᥋ϟ                                              限公司广州分公司完成 ϟᤃ୩ ʢ኏શዶ 基因测序ᤥ 测
            ቝᓂ 青链霉素ᤥ
            ϟ঎ϟ঎ሕ 细胞জ ̀ᔀᡱ᥈԰঎԰঎ϟጢ 细胞株᧥广西艾滋病防治                   序结果经 ୩ᔀीᥘᑕႿ 软件整理ᖔ 利用 ጶझାᔽᆍऊ᤟ᆍࣼʛ
            研究重点实验室叶力教授惠赠ᤥ                                     ྉၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ औऔऔ঎ᔀझᤦᔽᆍዹ᤟ᆍࣼʛ঎Ⴟᔀᡷᣰ ɯ 服务器进行在线分
            ϟ঎ϟ঎࿗ 试剂জ ऊၤᔀ᤟ᔀ଴᥋ϟԡԡ 树脂ܦ԰ġጶᑕ༁ᢃ ఋᑕी ୩ࣼᡱᔀʢቝᔽ଴        析ྉ᣽ᔽቝ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟ԰ɯ获取同源性最高的典型菌株
            购于美国 ାᔽᆍ኏ᑕʛ 公司ଫϟᤃ୩ ʢ኏શዶ 基因扩增引物对                    序列ᖔ通过比对进行物种多样性分析ᖔ序列相似度ጐ
            ԰Ꭾè 和 ϟ࿗ँ԰኏ 购于全式金生物技术有限公司ଫ                         ँऐ঎ᤃጢᠮ视为潜在新物种ྉ ᣽ᔽቝ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡϟ࿗ɯᤥ 利用
            ᧕ᥘጶᥘ 培养基ܦ胎牛血清ܦ青链霉素ܦ生物级二甲                           ჆ᔀႿႿᢃ 在线分析网站ᖔ在属级水平上对木榄不同来
            基亚 砜 ྉ᧕ᥘ୩ᨃɯ 购于美国 ᥈ᔽᤦዹᆍ 公司ଫ 噻唑蓝                     源细菌类群分布进行韦恩图分析ᤥ
            ྉᥘఋఋɯ购于美国 ୩ᔽ੫ቝᑕ 公司ଫ拉米夫定ྉሕఋऊɯ 购于                    ϟ঎԰঎࿗ 菌株代谢产物的制备及代谢产物多样性的
            上海麦克林生化科技有限公司ଫ᧕શዶ 病毒基因组                            筛选জ 将对数生长期菌株分别接种到两种液体发
                                                                                             ᥋ϟ
            提取试剂盒购于北京索莱宝科技有限公司ྉ 中国ᖔ                            酵培养基后ᖔ于 ԰ऐ ቩ ܦϟऐԡ ʢኼቝᔽႿ 摇床发酵培养 Ꭾ
            北京ɯଫ̀ା჆ ᧕શዶ 定量测定试剂盒购于湖南圣湘                          ʛᤥ 发酵液用等体积乙酸乙酯萃取ᖔ萃取相经减压
            生物科技有限公司ଫ其他分离培养基用试剂均为                              浓缩后置于干燥器中低温保存备用ᤥ 利用 ۪̀ᓂऊ᥋

            国产分析纯ᤥ                                             ᧕ዶ᧕ 技术分析菌株代谢产物ᖔ初步筛选出代谢产
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