Page 37 - 《广西植物》2023年第4期
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࿗ 期 候师师等᧥ 红树木榄生境中可培养细菌物种多样性及其体外抗乙肝病毒活性研究 ᤃ ϟ ँ
物较为丰富的菌ᤥ 分别将 ᧧୩۪ 液体培养基发酵产 到菌株 ࿗ 株ᖔ占比为 ᤃऐᠮᤥ
物命名为ᥥ细菌编号ɼᖔ含 ԡϟᠮ小球藻的改良 ᧧୩۪ 通过 ጶझାᔽᆍऊᆍࣼʛ 服务器进行 ϟᤃ୩ ʢશዶ 基因
液体培养基发酵产物命名为ᥥ 细菌编号 ᣮɼᖔ两份 序列比对分析ᖔ有 ሕ 株菌株与有效描述的物种表
空 白 培养基对照命名为 ᥥ ᥈ᣮ᧧ᥘ᧕ԡԡԡԡԡ ɼ 和 现出低序列相似性ྉጐँऐᤃጢᠮɯ ᖔ对潜在的新菌株
ᥥ᥈ᣮ᧧ᥘ᧕ԡԡԡԡԡᣮɼᤥ 进行了 ϟᤃ୩ ʢશዶ 基因的完整测序ྉ ᢦ ϟ ሕሕԡ ᤦᡱɯ
ϟጢ 菌株代谢产物对 ̀ᔀᡱ᥈ϟጢ 细胞增殖的影 后ᖔ 发现 ᥈ᣮ᧧ᥘ᧕ԡᎮ࿗ԡ ྉ ᥈ᔀႿାᑕႿҴ 登录号᧥
响জ 对代谢产物较为丰富的菌株进行抗乙肝病毒 ᥘఋᤃϟሕሕሕँɯ 与 ۗᓣࣩʐᅳᅳዞᓣᐹႥᔠዞᅳᤀᐹ ᐹᓣᡙࣩᐹʗᔠᔠ ጶ᥋ϟ 的
ఋ
实验ᖔ加生物级 ᧕ᥘ୩ᨃ 完全溶解后用完全培养基 最高 相似度为 ँᤃ ሕሕᠮᖔ ᥈ᣮ᧧ᥘ᧕ԡᎮᤃᤃጢ ྉ ᥈ᔀႿାᑕႿҴ
稀释至浓度为 ጢԡԡܦጢԡܦϟጢ ဂ੫ኼቝᓂ ᤥ 取对数生 登录 号᧥ᥘۼᎮԡँ࿗ሕ࿗ ɯ 与 ௴၊ᔠᅳዞᤀᐹצᐹ ᡓᐹዞᔠஏᔠዞᐹ ᧕୩ᥘ
᥋ϟ
长期细胞ᖔ调整细胞浓度为 ጢ ġϟԡ 个ኼቝᓂ ᖔ接种 ϟԡϟᤃᤃ 和 ௴၊ᔠᅳዞᤀᐹצᐹ ቂᐹʗᔠႥᐹ ᥘ۪Ի୩ԡϟԡԡԡԡԡጢ 的最
ఋ
࿗
ఋ
᥋ϟ
于 ँᤃ 孔板上ᖔ每孔 ϟԡԡ ဂᓂᖔ贴壁培养 ࿗ ၤ 后ᖔ换入 高相似度均为ँᤃ࿗ᠮᖔ᥈ᣮ᧧ᥘ᧕ԡᎮሕऐ࿗ 与 ዛᓣᡙࣩᐹʗᔠᔠ
ఋ
含药培养 液ᖔ 同时设空白组和阳性对照组 ྉϟԡԡ ᤇᐹዞࣩᤀࣩቂ ࣩႥዞ၊ᓣᅳႥᓣႥᓣ ୩ऊϟᎮ 的 最高相似度为
᥋ϟ
ဂ੫ኼቝᓂ ሕఋऊɯᤥ 培养 Ꭾ ၤ 后吸取上清液ᖔ加入 ጢ ँऐጢᠮᖔ可能为新的物种ᤥ
ቝ੫ኼቝᓂ ᥘఋఋ 溶液 ጢԡ ဂᓂᖔሕᎮ ቩ 孵育 ࿗ၤᖔ弃去孔 ϟ 木榄生境中可培养细菌在样品中的分布জ
᥋ϟ
内 ᥘఋఋ 溶液ᖔ加入 ᧕ᥘ୩ᨃ ϟԡԡ ဂᓂᖔ震荡 ϟԡ ቝᔽႿᤥ 在 由图 ϟ 和图 可知ᖔ从木榄沉积物分离得到的菌株
࿗ँԡ Ⴟቝ 波长下测定各孔光吸收值ᖔ计算细胞存活 种类最为丰富ᖔ共获得菌株 Ꭾ 属 ࿗ԡ 种ଫ木榄不同
率ᤥ 细胞存活率ྉᠮɯ ᢉ ྉ 实验组 ዛ 值 ᣰ 阴性对照 组织部位中ᖔ根分离得到的菌种数目最多ᖔ共获得
࿗ँԡ
孔 ዛ 值ɯ ġϟԡԡᠮᤥ ϟ 属 ϟᎮ 种ଫ木榄沉积物是放线菌纲的重要来源ᖔ
࿗ँԡ
ϟᤃ 检测菌株代谢产物对 ̀ᔀᡱ᥈ϟጢ 细胞上清 其中 ϟԡ 属 ϟ࿗ 种细菌均从木榄 沉 积 物 获 得ᖔ 仅
液中 ̀ା ᧕શዶ 的影响জ 选取对细胞增殖无抑制 ଧʗᓣצᔠᤇᐹዞᡙᓣʗᔠࣩቂ ዞᐹᓣᔠ 分离自木榄胚轴ଫ黄杆菌纲细
作用的菌株代谢产物进行后续抗乙肝病毒活性实 菌均 分 离 自沉积物和根ᖔᥕ᥋变形菌纲细菌除
ጢ ۗᓣࣩʐᅳቂᅳႥᐹ ᡙࣩᡙऊᓣʗᔠ 外ᖔ其余 ϟԡ 种均来源于木榄的
验ᤥ 取对数生长期 ̀ᔀᡱ᥈ϟጢ 细胞制成 ጢ ġ ϟԡ
᥋ϟ 沉积物和根部ଫ从木榄的胚轴ܦ叶分离得到的细菌
个ኼቝᓂ 细胞悬浮液ᖔ接种于 ࿗ 孔板上ᖔ每孔 ϟ
ቝᓂᖔ࿗ ၤ 贴壁培养ᖔ换入含药培养液ᤥ 第 ᤃ 天收集 丰富度较低ᖔ从木榄胚轴分离得到菌株 Ꭾ 属 ϟሕ
细胞上清液ᖔ按照病毒 ᧕શዶ 制备试剂盒的步骤操 种ᖔ从木榄叶分离得到最少菌株种类为 Ꭾ 属 ँ 种ᤥ
作获得高纯度的 ̀ା ᧕શዶᖔ运用乙型肝炎核酸定 在属级水平上对木榄生境来源的细菌进行
量检测试剂盒检测细胞上清液中 ̀ା ᧕શዶ 水平ᤥ ᔀႿႿᢃ 分析ᖔ木榄沉积物和木榄各组织中仅存在 ϟ
个共 有 菌 属 ଧᐹዞᔠᤀᤀࣩᤥ 沉积物和木榄根含有
জ 结果与分析 ᦵᓣቂᓣफࣩᔠႥᐹܦ ᤹ᡥʗᅳᔠʐᓣܦ ଧᐹዞᔠᤀᤀࣩܦ ᡙᐹᡓ၊ᡥᤀᅳዞᅳዞዞࣩܦ
ۗᓣࣩʐᅳᅳዞᓣᐹႥᔠዞᅳᤀᐹܦ᤹ᔠዞʗᅳᤇࣩᤀᤇᔠஏᓣʗܦႬᔠᤇʗᔠᅳ Ꭾ 个相同菌属ᖔ
ԣॹϓ 木榄生境中可培养细菌的多样性分布 共有菌属丰富度明显优于沉积物和木榄其他组织
ϟϟ 木榄可培养细菌的多样性分析জ 利用 ϟԡ 种 部位ᤥ
分离培养基ᖔ通过菌株形态学和 ϟᤃ୩ ʢશዶ 基因 ϟሕ 不同培养基对木榄生境中可培养细菌的分
测序技术进行排重ᖔ共获得可培养细菌 ጢँ 种ྉ 表 离效果জ 由图 ሕ 可知ᖔϟᤃጶ 培养基分离得到的菌
ϟɯ ᤥ 由表 ϟ 可知ᖔጢँ 种细菌归属于 ࿗ 门 ጢ 纲 ϟ࿗ 种数目最多ᖔ为 ࿗ 株ᖔ菌属分布最为广泛ᖔ包括
目 ሕ 科 ሕᤃ 属ᖔ分别为 ዶዹᡷᔽႿᆍᤦᑕዹᡷᔀʢᔽᑕྉ 放线菌纲ɯ ዛᓣᡙࣩᐹʗᔠᔠᤇᐹዞࣩᤀࣩቂܦଧᐹዞᔠᤀᤀࣩܦᦵᓣቂᓣफࣩᔠႥᐹ 等 ϟϟ 属ᖔ 株
ϟԡ 属 ϟጢ 种ܦ èᑕᆍᤦᑕዹᡷᔀʢᔽᑕྉ 黄杆菌纲ɯሕ 属 ሕ 种ܦ 新菌 ᥈ᣮ᧧ᥘ᧕ԡᎮ࿗ԡ 和 ᥈ᣮ᧧ᥘ᧕ԡᎮሕऐ࿗ 均分离自该培
ାᑕዹᔽᔽᑕ ྉ 芽孢杆菌纲 ɯᤃ 属 ϟᎮ 种ܦ 养基ᤥ 其次是 ᥘᎮ ྉ ԡ 种ɯܦ ዶ ྉ ϟᤃ 种ɯ 和 ዶ᥈᥈
ዶᡱၤᑕᡱʢᆍᡷᔀᆍᤦᑕዹᡷᔀʢᔽᑕྉ ም᥋变形 杆菌纲ɯϟԡ 属 ϟሕ 种ܦ ྉϟጢ 种ɯ 培养基ᖔ 菌属丰富度较高ᖔ 均分离得到
᥈ᑕቝቝᑕᡱʢᆍᡷᔀᆍᤦᑕዹᡷᔀʢᔽᑕྉ ᥕ᥋变形菌纲ɯᎮ 属 ϟϟ 种ᤥ 其 ଧᐹዞᔠᤀᤀࣩܦ᤹ᔠዞʗᅳᤇࣩᤀᤇᔠஏᓣʗܦۗᐹႥᡙᅳᓣᐹܦᡙᐹᡓ၊ᡥᤀᅳዞᅳዞዞࣩܦႬᔠᤇʗᔠᅳ
中ᖔଧᐹዞᔠᤀᤀࣩྉ 芽孢 杆 菌 属ɯ 为本次研究的优势菌 属菌株ᤥ۪ሕ 和 ۪Ꭾ 得到菌株 ँ 属 ϟ࿗ 种和 Ꭾ 属 ϟԡ
属ᖔ分离 得 到 菌 株 ँ 株ᖔ 占总菌株数的 ϟጢ ሕᠮଫ 种ᖔ另 ϟ 株新菌 ᥈ᣮ᧧ᥘ᧕ ାሕሕϟ 分离自 ۪Ꭾ 培养基ᤥ
ᡙᐹᡓ၊ᡥᤀᅳዞᅳዞዞࣩྉ 球菌属ɯ 为次优势菌属ᖔ共分离得 其余 ࿗ 种培养基 ᥘጢྉጢ 种ɯܦᥘँྉऐ 种ɯܦᥘϟԡྉᤃ 种ɯ
