Page 146 - 《广西植物》2021年第7期
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Ꭾ 期 涂 然 等 ᧥ 同一生境下白及与黄花白及内生菌群差异的初步研究 ϟ ϟ Ꭾ ጢ
平均气温为 ϟጢ࿗ ቩ ᖔ地貌以山为主ᤥ 白及和黄花 程序如下᧥ँጢ ቩ ጢ ቝᔽႿ ϟ 个循环ᖔँጢ ቩ ሕԡ ༁ᖔᤃԡ ቩ
白及处于开花期ᖔ根据不同花色区分白及和黄花 ሕԡ ༁ᖔᎮ ቩ ጢԡ ༁ᖔሕጢ 个循环ଫᎮ ቩ ጢ ቝᔽႿ ϟ 个循环ᤥ
白及ᤥ 随机选取 ጢ 个采样点ᖔ保留根部土壤并用 每个样本重复 ሕ 次ᖔ۪ऊ 产物混匀ᖔϟԡ ੫ኼᓂ 琼脂
᥋ϟ
湿布覆盖ᖔ整株植物保存于低温下ᖔ立即带回实验 糖凝胶电泳分离ᖔ溴化乙锭ྉᔀᡷၤᔽʛᔽࣼቝ ᤦʢᆍቝᔽʛᔀᖔጶାɯ
室做表面消毒处理ᤥ 首先ᖔ叶ܦ茎ܦ块茎ܦ根自来水 染 色后紫外光下参考 ᧕ᓂԡԡԡ ᧕શዶ ᑕʛʛᔀʢ
冲洗 ሕ 次去除黏附土壤ᖔᎮԡᠮ 乙醇浸泡 ϟቝᔽႿଫ然 ྉఋᑕᑕᑕɯ切下目标条带ᖔ回收纯化ᤥ
后ᖔ新鲜配置的次氯酸钠溶液清洗 ࿗ቝᔽႿྉ 块茎和 ϓॹ 酶切
根ɯܦሕ ቝᔽႿྉ叶和茎ɯᖔᎮԡᠮ乙醇漂洗 ሕ 次各 ሕԡ ༁ଫ最 ۪ऊ 扩增产物用限制性内切酶 ᤹ᡓ ᧧ 或 ̵ᐹᓣ ᎏ
后ᖔ用无菌去离子水冲洗 ሕ 次ᖔ无菌滤纸擦干ᤥ 随 ྉఋᑕᑕᑕɯ在 ሕᎮ ቩ水育下消解 ࿗ၤᖔ设置 ሕ 个重复ᤥ
机选取白及和黄花白及各 ጢ 株ᖔ按叶ܦ茎ܦ块茎和 Ꭾጢ ቩ ϟԡ ቝᔽႿ 灭活处理后ᖔ混匀 ሕ 个平行样本ᖔϟጢ
根不同组织剪成小段ᖔ液氮速冻后ᖔͱऐԡ ቩ 保存用 ੫ኼᓂ 琼脂糖凝胶电泳分离ᖔ其余步骤同上ᤥ 参照
᥋ϟ
于 ᧕શዶ 提取ᤥ 其余白及和黄花白及样本ᖔ自然风 ጢԡ ᤦᡱ 的 ᧕શዶ ᑕʛʛᔀʢ 确定酶切片段的碱基长度ᖔ小
干后ᖔ粉碎过筛ᖔͱԡ ቩ 保存用于有效成分测定ᤥ 于 ሕԡ ᤦᡱ 的片段不回收ᤥ 分离纯化标记的片段ᖔ在
ϓॹԣ 多糖提取和含量测定 ᥈ᔀႿᔀ୩ዹᑕႿ 模式下ᖔ使用 ዶା᧧ ۪ʢᔽ༁ቝ ሕϟԡ 毛细管测序
取黄 花白及和白及块茎 部 位ᖔ 参考徐花荣 仪ྉ୩ၤᑕႿ੫ၤᑕᔽ ᥈ᔀႿᔀऊᆍʢᔀ ାᔽᆍఋᔀዹၤႿᆍᆍ੫ᔽᔀ༁ ऊᆍᖔᓂᡷʛ ɯ检
ྉԡԡᤃɯ的方法ᖔ采用碱水提醇沉法提取多糖ᤥ 采 测ᤥ 随后ᖔ用软件 ᥈ᔀႿᔀᥘᑕᡱᡱᔀʢ ሕᎮ 对荧光图进行分
用苯酚硫酸法ྉϟԡԡ ဂᓂ 多糖溶液շϟԡ ဂᓂ ᤃᠮ苯酚 析ᖔ确定终端限制片段ྉఋ᥋è༁ɯ的峰值大小ܦ面积和
溶液շᤃጢԡ ဂᓂ 浓硫酸混合ɯᖔ࿗ँԡ Ⴟቝ 处测定吸光度 高度ᤥ 合格酶切片段的大小为 ሕԡ ጲ ጢԡԡ ᤦᡱᖔ荧光强
值ᖔ与葡萄糖标准曲线对照ᖔ计算多糖含量ᤥ 度在 ϟԡԡ 个单位以上ᖔ峰面积超过总体峰面积的
ϓॹᇺ 宏基因组提取及 ۗࣷቴ 扩增 ԡጢᠮ ྉ 在 ԡ ጢᠮ 以下认为是背 景 噪 音ɯᤥ ୩ᡱᔀዹᔽᔀ༁
取白及与黄花白及各组织ྉ叶和茎 ԡጢ ੫ଫ块茎 ʢᔽዹၤႿᔀ༁༁ 是用同一个文件中总的 ఋ᥋è༁ 数来计算ྉ大
和根 ϟԡ ੫ɯ进行液氮研磨ᤥ 用 ऊఋዶା ྉዹᔀᡷᢃᡷʢᔽቝᔀᡷၤᢃ᥋ 小为 ሕԡጲጢԡԡ ᤦᡱᖔ不同大小的 ఋ᥋è༁ɯᤥ
ᑕቝቝᆍႿᔽࣼቝ ᤦʢᆍቝᔽʛᔀɯ 法提取总 ᧕શዶᤥ 得到的 ᧕શዶ ఋၤᔀ ୩ၤᑕႿႿᆍႿ᥋ۼᔽᔀႿᔀʢ ᤦᔽᆍʛᔽᔀʢ༁ᔽᡷᢃ ᔽႿʛᔀ ྉ ̵ ɯ ᢉ
用 ԡԡ ဂᓂ ఋጶ 缓冲液 ྉϟԡ ቝቝᆍ ኼ ᓂ ᥋ϟ ఋʢᔽ༁᥋̀ऊᖔ ϟ ͱኮᡓ ġႿᡓ ᤥ
ᔠ ᔠ
᥋ϟ 式中᧥ᡓ 指群落中第 ᔠ 物种个体峰高与所有峰
ቝቝᆍኼᓂ ጶ᧕ఋዶᖔᡱ̀ ऐԡɯ溶解ᤥ ᔠ
真菌 ᧧ఋ୩ 区扩增᧥᧧ఋ୩ϟè ሕࣕ᥋ዶዶఋ᥈ዶዶ᥈᥈ዶ᥈ዶఋఋఋ 值高度之和的比例ᤥ
ዶऊఋ᥈᥈ఋఋऊ᥋ጢࣕ ྉèዶᥘɯᖔ ᧧ఋ୩࿗ ሕࣕ᥋ऊ᥈ఋዶఋዶ᥈ఋఋዶఋఋऊ ఋၤᔀ ୩ၤᑕႿႿᆍႿ ᔀᔀႿᔀ༁༁ ᔽႿʛᔀྉጛɯᢉ ̵ ᣰ ̵ቝᑕᤥ
᥈ऊऊఋऊऊఋ᥋ጢࣕᤥ ۪ऊ 反应体系 ጢ ဂᓂᖔ含 ࿗ ဂᓂ ྉϟԡԡ 式中᧥̵ቝᑕ ᢉ Ⴟଫ 是每个样本中 ఋ᥋è༁ 的
᥋ϟ
Ⴟ੫ ɯ模板 ᧕શዶᖔ首尾引物各 ϟဂᓂ ྉԡ ဂቝᆍኼᓂ ɯᖔ 数量ᤥ
۪ऊ ቝᔽྉఋᑕᑕᑕɯ ϟጢ ဂᓂᖔ加去离子水补足到 ጢ ϓॹጇ 统计分析
ဂᓂᤥ 扩增程序如下᧥ँጢ ቩ ጢ ቝᔽႿ ϟ 个循环ଫँጢ ቩ 所有统计分析都是使用软件 ୩۪୩୩ ϟऐԡ 完成ᤥ 对
ሕԡ ༁ᖔᤃԡ ቩ ሕԡ ༁ᖔᎮ ቩ ጢԡ ༁ᖔጢ 个循环ଫᎮ ቩ ጢ ቝᔽႿ 于 ఋ᥋èᓂ۪ 分析ᖔ将 ఋ᥋è༁ 归一化峰值用于主成分分
ϟ 个循环ᤥ 块茎组织比较特殊ᖔ采取的扩增程序如 析ྉ۪ऊዶɯ和聚类分析ᤥᥘᔽऊዶ ۪ዶఋ շ在线分析工具用
下᧥ँጢ ቩ ጢ ቝᔽႿ ϟ 个循环ଫँጢ ቩ ሕԡ ༁ᖔᤃԡ ቩ ሕԡ ༁ᖔᎮ 于比对每个 ఋ᥋è༁ 代表的占主导地位的细菌或真菌ᤥ
ቩጢԡ ༁ᖔሕ 个循环ᖔᎮ ቩ ጢ ቝᔽႿ ϟ 个循环ᤥ
জ 结果与分析
细菌 ϟᤃ୩ ʢ᧕શዶ 扩增᧥ᤃሕè ሕࣕ᥋ऊఋ᥈ዶዶऊ᥈ఋዶऊዶ
ऊዶዶఋऊऊ᥈᥈ዶ᥋ጢࣕᖔ ϟ࿗ँ࿗ ሕࣕ᥋ ऊዶ᥈ऊዶఋఋ᥈ఋఋऊऊዶఋɟ
᥈᥈ऊዶఋ᥋ጢࣕ ྉ̀ጶዶɯᖔ ۪ऊ 反应体系 ጢ ဂᓂᖔ含 ࿗ဂᓂ ԣॹϓ 酶切产生的 ௴ቴÞ 数量
ྉϟԡԡ Ⴟ੫ ɯ模板 ᧕શዶᖔ首尾引物各 ϟဂᓂ ྉԡ ဂቝᆍኼ 用 ᥈ᔀႿᔀᥘᑕᡱᡱᔀʢሕᎮ 软件分析 ᤹ᡓ ᧧ 或 ̵ᐹᓣ ᎏ酶
ᓂ ɯᖔ۪ऊ ቝᔽྉఋᑕᑕᑕɯ ϟጢ ဂᓂᖔ加去离子水补足 切产生的荧光图谱ᖔ得到白及与黄花白及共 ऐ 个
᥋ϟ
到 ጢ ဂᓂᤥ 扩增程序如下᧥ँጢ ቩ ጢ ቝᔽႿ ϟ 个循环ଫ 组织样本的 ఋ᥋è༁ 数量ᖔ各组织样本中 ఋ᥋è༁ 的均
ँጢ ቩ ሕԡ ༁ᖔᤃԡ ቩ ሕԡ ༁ᖔᎮ ቩ ጢԡ ༁ᖔሕԡ 个循环ଫᎮ ቩ 值介于 ጢጲሕᎮ 之间ྉ表 ϟɯᤥ 就内生细菌而言ᖔ白及
ጢቝᔽႿ ϟ 个循环ᤥ 块茎组织比较特殊ᖔ采取的扩增 和黄花白及都是叶组织产生的 ఋ᥋è༁ 最多ᖔ但各
