Page 7 - 《广西植物》2021年第8期
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ऐ 期 武丽霞等᧥ 生长素输出载体蛋白 ۪᧧શϟ 在作物根和胚中的亚细胞定位 ϟ ϟ
ྉèᆍʢᔀ༁ᡷᑕႿ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟɯᖔ在花序初生原基细胞中显 ྉାèዶɯྉ ቝᆍᔀዹࣼᑕʢ ᡱʢᆍᤦᔀ༁ɯ 对不同农作物的根和胚
示为非极性定位 ྉ୩ҴᔽʢᡱᑕႿ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡԡँɯᤥ 但是ᖔ目 处理 ँԡ ቝᔽႿᖔ然后使用改良的免疫组织化学分析
前尚不清楚 ۪᧧શϟ 在不同作物的根和胚中的亚细胞 方法进行检测ྉ۪ᑕዹᔽᆍʢᔀҴ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡԡᤃɯᤥ 具体如下᧥
定位ᖔ包括水稻ܦ小麦ܦ玉米和大豆ᤥ 首先ᖔ将样品在 ጢ ቩ 室温条件下用 ࿗ᠮ戊二醛溶
在这 项研究中ᖔ 我们基于水稻 ጸ 日本晴 ᆥ 液固定 ϟၤଫ然后ᖔሕᎮ ቩ 条件下用 ᠮ崩溃酶处理 ϟ
ྉጸશᔽᡱᡱᆍႿᤦᑕʢᔀᆥɯ的 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 氨基酸序列ᖔ制备了抗 ၤଫ最后ᖔ用抗兔的 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 多克隆抗体ྉϟ ᨒ ԡԡɯ
兔的 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 多克隆抗体ᖔ利用该抗体开展的免疫 和二抗Џ 驴抗兔的 ᧧੫᥈ྉ ̀շᓂɯ᥋ዶᔀᑕࣼᆍʢ ࿗ऐऐ 抗体
组化实验发现水稻的 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 及小麦和玉米中的 ྉϟ ᨒ ጢԡԡɯ ྉ ȮᑕዹҴ༁ᆍႿ ᧧ቝቝࣼႿᆍᔀ༁ᔀᑕʢዹၤɯ 进行免疫组
同源蛋白可以非极性定位在根和胚中子叶表皮细 化检测ᤥ 使用 ᓂᔀᔽዹᑕ ୩۪ጢ 激光共聚焦显微镜ྉᓂᔀᔽዹᑕ
胞的细胞质膜上ᖔ而大豆的 ᥈ቝ۪᧧શϟᤦ 可以非极性地 ᥘᔽዹʢᆍ༁ᢃ༁ᡷᔀቝ༁ɯ观察 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 的定位ᤥ
定位在根中表皮细胞的质膜上ᖔ但是ᖔ在胚的子叶 ϓॹ 生物信息学分析
表皮细胞中是细胞质定位ᤥ 此外ᖔ水稻根表皮细胞 从 શऊା᧧ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ᣰ ᣰ औऔऔႿዹᤦᔽႿቝႿᔽၤ੫ᆍ ᣰ ɯ 获得
质膜上的 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 可以通过内吞运输途径进入到 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 及其同源蛋白的氨基酸序列ᖔ通过在线网
细胞质中ᤥ 这些 ۪᧧શϟ 定位结果将有助于我们研究 站ྉၤᡷᡷᡱ༁᧥ᣰ ᣰ औऔऔࣼႿᔽᡱʢᆍᡷᆍʢ੫ ᣰ ɯ分析 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 的跨膜
生长素极性运输在水稻ܦ小麦ܦ玉米和大豆作物发 结构域ᖔ 使用软件 ᔀዹᡷᆍʢ શఋ᧧ ୩ࣼᔽᡷᔀ ᤃ 进行氨基酸序
育中的作用ᤥ 列比对ᖔ所有图片均使用 ۪ၤᆍᡷᆍ༁ၤᆍᡱ 软件处理ᤥ
ϟজ 材料与方法 জ 结果与分析
ϓॹϓ 植物材料 ԣॹϓ 不同作物的 ۗᧇટϓ 序列相似性分析
植物材料为水稻品种ጸશᔽᡱᡱᆍႿᤦᑕʢᔀᆥ 和ጸ 丽江新 为了检测不同作物中生长素输出载体蛋白
团黑谷ᆥ ྉጸ ᓂఋ̀ᆥɯ ྉ ᧣ʗᡥऊᐹ ᐹᡙᔠצᐹ ༁ࣼᤦ༁ᡱ ᢝᐹᡓᅳႥᔠዞᐹɯܦ ۪᧧શϟ 的亚细胞定位ᖔ 首先ᖔ 我们对拟南芥
小麦 ྉ ௴ʗᔠᡙᔠዞࣩቂ ᐹᓣᡙᔠצࣩቂ ጸ ऊၤࣼᑕႿቝᑕᔽϟԡᎮ ᆥɯܦ 玉米 ྉዶᡷ۪᧧શϟɯܦ水稻ྉᨃ༁۪᧧શϟᤦɯܦ小麦ྉఋᑕ۪᧧શϟɯܦ玉米
ྉ Ԯᓣᐹ ቂᐹᡥ ጸାᎮሕ ᆥɯ 和大豆 ྉ ᤩᤀᡥዞᔠႥᓣ ቂᐹଝ ྉԻቝ۪᧧શϟᤦɯ和大豆ྉ᥈ቝ۪᧧શϟᤦɯ 中 ۪᧧શϟ 的氨基酸
ጸۼᔽᔽᑕቝ༁ᆥɯᖔ各作物种子置于 ऐ ቩ 条件下水培萌 序列进行比 对 分 析 ྉ 图 ϟɯᤥ 结果表明᧥ዶᡷ۪᧧શϟܦ
发ᖔ使用生长了 Ꭾʛ 的胚根分生区细胞和 ϟʛ 的子 ఋᑕ۪᧧શϟܦԻቝ۪᧧શϟᤦܦ᥈ቝ۪᧧શϟᤦ 的序列与 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 分
叶胚来检测 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 及同源物的亚细胞定位ᤥ 别具有 ጢऐᤃᠮܦᤃϟጢᠮܦᤃጢᠮܦᤃϟँᠮ的相似性ᖔ在
ϓॹԣ 抗体的制备和检测 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 的氨基酸序列中存在 ϟԡ 个跨膜区ᤥ
根据水稻 ጸ શᔽᡱᡱᆍႿᤦᑕʢᔀᆥ 的生长素输出载体 ԣॹԣ 水稻中 ᧣ۗᧇટϓᤇ 的检测
ᨃ༁۪᧧શϟᤦྉᨃ༁ԡ੫ԡᎮ࿗ሕ࿗ԡԡɯ 的氨基酸序列人工合成 ۪᧧શϟ 序列在水稻ܦ小麦ܦ玉米和大豆之间显示
多肽 ͐୩୩શ۪ఋ۪᥈୩୩èશऊᖔ并将其注入新西兰兔 出高度相似性ྉ图 ϟɯᤥ 我们选择 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 中的序列
体内ᤥ 通过 ጶᓂ᧧୩ዶ 方法检测到纯化的抗 兔 ͐୩୩શ۪ఋ۪᥈୩୩èશऊᖔ通过人工合成多肽免疫兔子
᥋ϟ 制备了抗兔的 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 多克隆抗体ᤥ 为检测抗兔
ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 多克隆抗体ᖔ 其浓度 为 ԡ ጢϟ ቝ੫ ኼ ቝᓂ
ྉϟ ᨒ ԡ ԡԡԡɯྉ杭州华安生物技术有限公司ɯᤥ 的 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 多克隆抗体的有效性ᖔ我们提取了水稻
ϓॹᇺ 免疫杂交和免疫组化检测 叶片和根的总蛋白ᖔ并使用抗兔的 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 多克隆
为检测 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 的表达ᖔ提取了水稻叶片和 抗体进行免疫杂交检测ᤥ 结果表明ᖔ用 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 抗
根的总蛋白ᖔ并用一抗Џ抗兔的 ᨃ༁۪᧧શϟᤦ 多克隆抗 体可以检测到目标蛋白 ᨃ༁۪᧧શϟᤦྉ图 ɯᤥ
体 ྉ ϟ ᨒ ԡԡ ɯ 和二抗 Џ 山羊抗兔 的 ᧧੫᥈᥋۪̀ ԣॹᇺ ۗᧇટϓ 在不同农作物中的亚细胞定位
ྉϟ ᨒ ጢ ԡԡԡɯ 进行了免疫杂交ᤥ 为了检测蛋白亚 通过免疫组织化学分析进一步检测了水稻ܦ
᥋ϟ 小麦ܦ 玉米和大豆根中 ۪᧧શϟ 的亚细胞定位ᖔ 发现
细胞定位ᖔ使用或不使用 ጢԡ ቝቝᆍኼᓂ ାʢᔀᔀʛᔽႿ ዶ
